一种植酸酶突变体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种植酸酶突变体及其制备方法和应用，植酸酶突变体的序列SEQ ID No：1，该突变体由编码无花果曲霉植酸酶氨基酸序列发生改变而获得；本发明专利技术使用烟曲霉植酸酶的部分氨基酸序列来替代无花果曲霉植酸酶氨基酸序列，使其成为耐热性高的植酸酶；以无花果曲霉植酸酶基因序列作为模版，通过基因点突变技术使无花果植酸酶基因发生突变，获得了新的植酸酶基因的突变体SEQ ID NO：2，该植酸酶基因的突变体与质粒PPIC9K等相连构建重复质粒，转化宿主GS115等获得基因工程菌株，通过基因工程菌株发酵，获得新的植酸酶突变体；能有较宽的pH作用范围和较理想耐热特性，适合耐高温制粒，较好地满足饲料工业的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种植酸酶突变体及其制备方法和应用。
技术介绍
植酸广泛存在于玉米、米糠、各种饼粕等饲料原料中，一方面它具有很强的抗营养作用，与饲料中金属离子和蛋白质结合，影响这些营养物质的消化与吸收；另一方面植酸分子含有大量有机磷，动物胃肠道由于缺少相应的酶，因而不能利用，这些有机磷随粪便排放到环境中，造成环境污染。植酸酶可使植酸发生水解反应，生成肌醇衍生物和正磷酸，作为单胃动物的饲料添加剂，可以促进动物对磷元素的利用，有助于畜禽生长，提高畜牧业效益，同时它还能降低植酸磷对环境的污染，并且可以提高饲料中能量与蛋白质的消化率。现在已成为饲料行业公认的有效饲料添加剂。植酸酶作为饲料添加剂在实际应用过程中需要耐受饲料高温制粒过程，因此饲用植酸酶必须耐热，而目前大多数植酸酶耐热性能较差。无花果植酸酶(黑曲霉植酸酶)虽然酶比活相对高，也具有一定的耐热作用，但在实际应用上还不理想，如果能够将其耐热性增高，无花果植酸酶将具有更大的应用价值。相比之下，烟曲霉植酸酶有着更好的耐热性，但比活相对较低。因此，本专利技术根据烟曲霉植酸酶的序列中与其耐热性相关的氨基酸序列来改造无花本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植酸酶突变体，其特征在于，所述植酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种植酸酶突变体，其特征在于，所述植酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。2.根据权利要求1所述植酸酶突变体，其特征在于，所述植酸酶突变体由编码无花果曲霉植酸酶氨基酸序列SEQ ID No：3中第43位缬氨酸变成丝氨酸、第46位脯氨酸变为丝氨酸、第169位谷氨酰胺变为苏氨酸、第170位脯氨酸变为天冬酰胺、第171位甘氨酸变为精氨酸、第252位苏氨酸变为精氨酸、第255位缬氨酸变为天冬氨酸、第256位天冬氨酸变为丙氨酸、第258位赖氨酸变为谷氨酰胺而获得。3.编码权利要求1所述植酸酶突变体的编码基因，其特征在于，所基因的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。4.根据权利要求1所述植酸酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤包括：(1)、无花果植酸酶基因连接到pMD19-T载体上的重组质粒为模板，设计引物进行突变PCR扩增；产物电泳检测，条带正确后加1μlDMT酶于PCR产物中，混匀，37℃孵育1h；进而进行突变片段组装，配制10μl组装体系与50℃反应15min；(2)、加入10μl突变组装后的产物于50μl DMT感受态细胞中，混匀，冰浴30min；42℃准确热激45s，立即置于冰上10min；加500μlLB培养基，200转、37℃培养1h；7000rpm离心3min...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄遵锡，韩楠玉，苗华彪，
申请(专利权)人：昆明爱科特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53