本发明专利技术公开了一种4‑氰基吡啶中3‑氰基吡啶、4‑甲基吡啶的高效液相色谱检测方法：（1）制备系统适用性溶液；（2）制备供试品溶液；（3）制备对照溶液；采用高效液相色谱分别对系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液进行检测，检测条件为：色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为A为改性缓冲盐20mmol磷酸二氢钾+2.4ml三乙胺到1000ml水中，用磷酸调节PH值至6.0～8.0，B相为有机相采用梯度洗脱；流速0.5～1.5ml/min；柱温为10℃～40℃；检测波长200～300nm；进样体积10µl；本发明专利技术检测方法中3‑氰基吡啶、4‑氰基吡啶和4‑甲基吡啶分离度均在2.0以上，理论塔板数高，对称性好，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明专利技术检测方法具有检测结果准确可靠、分析时间短，操作简便等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域，本专利技术涉及一种高效液相色谱检测方法，一种4-氰基吡啶的中3-氰基吡啶、4-甲基吡啶高效液相色谱检测方法。
技术介绍
4-氰基吡啶是托吡司他合成的起始原料。4-氰基吡啶的分子式C6H4N2，分子量为104.11，其结构式如下：本专利技术的目的为了使4-氰基吡啶的出峰时间与溶剂峰及杂质峰完全分离，改善出峰峰型，进而准确控制4-氰基吡啶的含量，目前很难查询到4-氰基吡啶中3-氰基吡啶和4-甲基吡啶相关高效液相色谱检测方法。本专利技术的特点在于克服了4-氰基吡啶极性大，从而导致在高效液相色谱中出峰早，不能很好地和溶剂峰及杂质峰分离，且峰型也不佳，比较难以控制4-氰基吡啶含量的困难。本专利技术找到了一种与杂质分离度高，出峰时间适中，分析时间短的检测4-氰基吡啶有关物质的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种4-氰基吡啶中3-氰基吡啶、4-甲基吡啶的高效液相色谱检测方法，以解决现有技术中存在的上述问题。本专利技术涉及的一种4-氰基吡啶中3-氰基吡啶、4-甲基吡啶的高效液色谱检测方法，包括以下步骤：(1)制备系统适用性溶液：取3-氰基吡啶、4-氰基吡啶、4-甲基吡啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4-氰基吡啶约为0.5mg/ml～1.5mg/ml，含3-氰基吡啶、4-甲基吡啶约为5μg/ml～15μg/ml的溶液，作为系统适用性溶液；(2)制备供试品溶液：取4-氰基吡啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml 中含4-氰基吡啶约为0.5mg/ml～1.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液。(3)制备对照溶液：取供试品溶液适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4-氰基吡啶约为5μg/ml～15μg/ml的溶液，作为对照溶液。(4)采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱。(5)设置液相色谱仪的流动相，即A相为改性缓冲盐，B相为有机相，设置液相色谱仪的梯度洗脱，方法见下表。 时间(min) A相(％) B相(％) 0 90 10 9 90 10 13 40 60 16 40 60 20 90 10 30 90 10 (6)设置液相色谱仪的流速为0.5～1.5mL/min，检测波长200～300nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱温度为10℃～40℃；(7)取步骤(1)(2)、(3)的样品溶液10μl注入经步骤(4)(5)、(6)设置的液相色谱仪，完成4-氰基吡啶中3-氰基吡啶和4-甲基吡啶检测。(8)按自身对照法以峰面积计算供试品中3-氰基吡啶,和4-甲基吡啶的含量。所述步骤(1)中，系统适用性溶液4-氰基吡啶的浓度为0.5mg/ml～1.5mg/ml，3-氰基吡啶的浓度为5μg/ml～15μg/ml、4-甲基吡啶的浓度为5μg/ml～15μg/ml。优选的，步骤(1)中，系统适用性溶液4-氰基吡啶的浓度约为0.8mg/ml～1.2mg/ml，3-氰基吡啶、4-甲基吡啶的浓度约为8μg/ml～12μg/ml。优选的，步骤(1)中，系统适用性溶液4-氰基吡啶的浓度约为1.0mg/ml，3-氰基吡啶、4-甲基吡啶的浓度约为10μg/ml。所述步骤(2)中，供试品溶液的浓度约为0.5mg/ml～1.5mg/ml。优选的，步骤(2)中，供试品溶液的浓度约为0.8mg/ml～1.2mg/ml。优选的，步骤(2)中，供试品溶液的浓度约为1.0mg/ml。所述步骤(3)中，对照溶液的浓度约为5μg/ml～15μg/ml。优选的，步骤(3)中，对照溶液的浓度约为8μg/ml～12μg/ml。优选的，步骤(3)中，对照溶液的浓度约为10μg/ml。所述步骤(1)、(2)、(3)中的有机溶剂为乙腈。优选的，步骤(4)中，色谱柱为菲罗门luna C18(4.6*250mm 5μm)柱，规格为4.6*250mm 5μm柱，规格为长度250mm、内径4.6mm、粒径5μm。所述步骤(5)中，A相为改性缓冲盐，B相为有机相，优选的，步骤(5)中，改性缓冲盐为20mmol磷酸二氢钾+2.4ml三乙胺，用磷酸调节PH值至6.0～8.0的溶液。优选的，步骤(5)中，改性缓冲盐为20mmol磷酸二氢钾+2.4ml三乙胺，用磷酸调节PH值至6.6～7.0的溶液。优选的，步骤(5)中，改性缓冲盐为20mmol磷酸二氢钾+2.4ml三乙胺，用磷酸调节PH值至6.8的溶液。所述步骤(5)中，B有机相为甲醇或乙腈。优选的，步骤(5)中，有机相为乙腈。所述步骤(6)中，流速为0.5～1.5mL/min。优选的，步骤(6)中，流速为0.8～1.2mL/min。优选的，步骤(6)中，流速为1.0mL/min。所述步骤(6)中，检测波长为200～300nm。优选的，步骤(6)中，检测波长为250～280nm。优选的，步骤(6)中，检测波长为265nm。所述步骤(6)中，柱温为10℃～40℃。优选的，步骤(6)中，柱温为25℃～35℃。优选的，步骤(6)中，柱温为30℃。所述步骤(7)中，进样量为10μl。所述步骤(8)中，按自身对照法以峰面积计算供试品中3-氰基吡啶和4-甲基吡啶的含量。本专利技术4-氰基吡啶中3-氰基吡啶和4-甲基吡啶的高效液相色谱检测方法，具有以下优点：(1)本专利技术在流动相上采取梯度洗脱，可以使3-氰基吡啶、4-氰基吡啶、4-甲基吡啶的保留时间均在16分钟以内，分离度在2.0以上，理论塔板数高，色谱峰的峰形尖锐，同时具有分离度高，分析时间短等优点。(2)本专利技术采用乙腈溶解样品，其溶解度大，溶解速度快，可以有效地避免检测过程中析出固体而导致色谱柱以及色谱系统的堵塞，使得检测结果准确可靠，其操作简便。本专利技术检测方法3-氰基吡啶、4-氰基吡啶、4-甲基吡啶的分离度在2.0以上，理论塔板数高，有效地避免各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本专利技术检测方法具有检测结果准确可靠、分析时间短、成本低、操作简便等优点，且符合检测方法的方法验证要求。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本思路的前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本思路的前提下，做出的任何形式的修改、替换或变更，均在本专利技术范围内。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明下面结合附图对本专利技术技术方案作进一步说明：图1为实施例1条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图2为实施例2条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图3为实施例3条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图4实施例4条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图5实施例5条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图6实施例6条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图7实施例7条件下3-氰基吡啶、4-氰基吡啶和4-甲基吡啶的分离效果图；图8本专利技术检测方法本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种4‑氰基吡啶中3‑氰基吡啶、4‑甲基吡啶的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备系统适用性溶液：取3‑氰基吡啶、4‑氰基吡啶、4‑甲基吡啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4‑氰基吡啶为0.5mg～1.5 mg，含3‑氰基吡啶为5µg～15µg，含4‑甲基吡啶为5µg～15µg的溶液，作为系统适用性溶液；（2）制备供试品溶液：取4‑氰基吡啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4‑氰基吡啶为0.5mg～1.5 mg的溶液，作为供试品溶液；（3）制备对照溶液：取供试品溶液适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4‑氰基吡啶为5µg～15µg的溶液，作为对照溶液；（4）采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；（5）设置液相色谱仪的流动相，即A相为改性缓冲盐，B相为有机相，设置液相色谱仪的梯度洗脱，方法见下表：时间（min)A相（%）B相（%）0901099010134060164060209010309010（6）设置液相色谱仪的流速为0.5～1.5mL/min，检测波长200～300nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱温度为10℃～40℃；（7）取步骤（1）（2）、（3）的样品溶液10µl注入经步骤（4）（5）、（6）设置的液相色谱仪，完成4‑氰基吡啶中3‑氰基吡啶和4‑甲基吡啶检测；（8）按自身对照法以峰面积计算供试品中3‑氰基吡啶,和4‑甲基吡啶的含量；根据权利要求1所述的一种4‑氰基吡啶中3‑氰基吡啶、4‑甲基吡啶高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述步骤（1）系统适应性溶液中4‑氰基吡啶浓度为0.8mg/ml～1.2 mg/ml，3‑氰基吡啶浓度为8µg/ml～12µg/ml，取用的4‑甲基吡啶浓度为8µg/ml～12µg/ml。...
【技术特征摘要】
1.一种4-氰基吡啶中3-氰基吡啶、4-甲基吡啶的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备系统适用性溶液：取3-氰基吡啶、4-氰基吡啶、4-甲基吡啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4-氰基吡啶为0.5mg～1.5 mg，含3-氰基吡啶为5µg～15µg，含4-甲基吡啶为5µg～15µg的溶液，作为系统适用性溶液；（2）制备供试品溶液：取4-氰基吡啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4-氰基吡啶为0.5mg～1.5 mg的溶液，作为供试品溶液；（3）制备对照溶液：取供试品溶液适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4-氰基吡啶为5µg～15µg的溶液，作为对照溶液；（4）采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；（5）设置液相色谱仪的流动相，即A相为改性缓冲盐，B相为有机相，设置液相色谱仪的梯度洗脱，方法见下表：时间（min)A相（%）B相（%）0901099010134060164060209010309010（6）设置液相色谱仪的流速为0.5～1.5mL/min，检测波长200～300nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱温度为10℃～40℃；（7）取步骤（1）（2）、（3）的样品溶液10µl注入经步骤（4）（5）、（6）设置的液相色谱仪，完成4-氰基吡啶中3-氰基吡啶和4-甲基吡啶检测；（8）按自身对照法以峰面积计算供试品中3-氰基吡啶,和4-甲基吡啶的含量；根据权利要求1所述的一种4-氰基吡啶中3-氰基吡啶、4-甲基吡啶高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述步骤（1）系统适应性溶液中4-氰基吡啶浓度为0.8mg/ml～1.2 mg/ml，3-氰基吡啶浓度为8µg/ml～12µg/ml，取用的4-甲基吡啶浓度为8µg/ml～12µg/ml。2.根据权利要求1所述的一种4-氰基吡啶中...
【专利技术属性】
技术研发人员：林海荣，翟富民，陆学山，陈建丽，包华兰，
申请(专利权)人：江苏悦兴医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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