液相色谱-质谱联用对分析物进行高效分离鉴定的方法技术

本发明专利技术涉及一种使用液相色谱-质谱联用对分析物进行高效分离鉴定的方法，使用三氟乙酸作为液相色谱流动相添加剂，在密闭的电喷雾离子源处引入挥发性酸气体，通过向离子化区域中引入挥发性酸气体来降低或消除三氟乙酸对电喷雾质谱检测信号的抑制，提高质谱检测的分辨率和灵敏度。该分离鉴定方法简单，只需要从密闭电喷雾离子源处引入挥发性酸即可以降低或消除三氟乙酸对电喷雾质谱检测信号的抑制，提高质谱检测的分辨率和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于液相色谱-质谱联用的研究
，具体涉及一种提高分析物色谱分离分辨率和质谱检测灵敏度，从而实现分析物的高效分离鉴定的方法。
技术介绍
液相色谱-质谱联用是常见的分离鉴定技术。在流动相中加入离子对试剂，如三氟乙酸(TFA)，甲酸等，有助于获得更好的分离效率。尽管三氟乙酸在分离方面上展现出比甲酸更优越的分离效果(文献1.Garcia,M.C.；Hogenboom,A.C.；Zappey,H.；Irth,H.,Effect of the mobile phase composition on the separation and detection of intact proteins by reversed-phase liquid chromatography-electrospray mass spectrometry.Journal of chromatography.A 2002,957(2),187-99.)，但由于三氟乙酸会抑制离子化效率，与目前高通量鉴定蛋白质的质谱不兼容(文献2.Apffel,A.；Fischer,S.；Goldberg,G.et al.Enhanced Sensitivity for Peptide-Mapping with Electrospray Liquid-Chromatography Mass-Spectrometry in the Presence of Signal Suppression Due to Trifluoroacetic Acid-Containing Mobile Phases.Journal of Chromatography A 1995,712(1),177-190.)，因此，许多研究工作人员通过各种方法降低三氟乙酸的离子抑制效应。Kuhlman等在柱后添加含丙酸的异丙醇溶液，破坏分析物与TFA形成的离子对，释放出分析物从而降低离子抑制作用，该方法有显著缺点是会造成样品的稀释(文献3.Kuhlmann,F.E.；Apffel,A.；Fischer,S.M.et al.Signal enhancement for gradient reverse-phase high-performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry analysis with trifluoroacetic and other strong acid modifiers by postcolumn addition of propionic acid and isopropanol.J Am Soc Mass Spectrom 1995,6(12),1221-5.)；Corradini等降低流动相中的三氟乙酸的浓度，在色谱分离与质谱检测中需要寻找合适的浓度鉴定分析物(文献4.Corradini,D.；Huber,C.G.；Timperio,A.M.；Zolla,L.,Resolution and identification of the protein components of the photosystem II antenna system of higher plants by reversed-phase liquid chromatography with electrospray-mass spectrometric detection.Journal of chromatography.A 2000,886(1-2),111-21.)；还有研究人员在流动相中额外加甲酸等挥发性酸(文献5.You,J.；Wang,L.；Saji,M.et al.High-sensitivity TFA-free LC-MS for profiling histones.Proteomics 2011,11(16),3326-34.)，该方法其他添加剂仍存在于流动相中不利于有效分离；刘虎威等在色质联用的接口中采用双极膜电渗析的方法去除流动相的TFA(文献6.北京大学.一种三氟乙酸去除
装置及其应用:中国,CN201110345371.X[P].2012-6-20.)，但搭建装置复杂，需要合适的流速电压，更换液体等缺点。本专利技术正是利用上述文献提及的酸能有效降低TFA的抑制效应，将挥发性的高浓度酸气体直接引入密闭的电喷雾离子源处，在分析物的液滴爆裂的过程中，高浓度的酸竞争性结合三氟乙酸根负离子并实现质子化，破坏三氟乙酸与分析物的作用，释放分析物，从而尽可能地消除三氟乙酸对质谱离子信号的抑制作用，进而在有效分离的基础上实现分析物的高效鉴定。
技术实现思路
本专利技术是向流动相添加剂为三氟乙酸的液相色谱中引入挥发性酸，来消除三氟乙酸对质谱离子信号的抑制作用，达到液相色谱-质谱联用对分析物进行高效分离鉴定的目的。本专利技术的技术方案为：本专利技术所述的液相色谱-质谱联用系统对分析物高效的分离鉴定方法为：使用三氟乙酸作为液相色谱流动相添加剂，并在密闭的电喷雾离子源处引入挥发性酸气体消除三氟乙酸对电喷雾质谱检测信号的抑制。所述的挥发性酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等可用于质谱的挥发性酸中的一种或两种以上混合，挥发性酸的纯度为98％-100％，挥发性酸的引入总量是离子化区域中三氟乙酸的质量的7000倍至90 000倍。挥发性酸向液相色谱引入的方法是通过质谱抽真空的泵使得封闭的电喷雾离子源处于0.08Torr甚至更低的负压，迫使空气协同挥发性酸气体进入密闭电喷雾离子源处，所述的挥发性酸使用的液相色谱分离流动相为水和乙腈，其中添加剂三氟乙酸浓度范围为0.001％-20.000％。挥发性酸对三氟乙酸的作用机理为：本专利技术提出的将挥发性酸气体引入密闭电喷雾离子源处，使得分析物离子化区域中存在的高浓度的挥发性酸气体，竞争性结合并质子化三氟乙酸根负离子，破坏三氟乙酸与分析物的作用，释放分析物，从而尽可能地消除三氟乙酸对质谱离子信号的抑制作用，有效地提高分析物的离子信号强度，进而提高分析物的分离鉴定效率。本专利技术的有益效果为：该分离鉴定方法简单，只需要从密闭电喷雾离子源处引入挥发性酸即可以降低或消除三氟乙酸对电喷雾质谱检测信号的抑制，提高质谱信号，进而提高检测的分辨率和灵敏度。附图说明图1为仪器的简略图，采用封闭离子源的液相色谱质谱联用，其中，挥发性酸气体在负压下通过质谱抽真空的泵进入密闭电喷雾
离子源处。图2为甲酸和三氟乙酸作为流动相添加剂时，核糖核酸酶、细胞色素c、溶菌酶、肌红蛋白的色谱基峰图；其中，A图为流动相中添加0.1％体积分数的甲酸，B图为流动相中添加0.05％体积分数的三氟乙酸。图3为三氟乙酸作为添加剂的情况下，于分析物离子化区域引入不同挥发性酸的色谱基峰图，其中，图3A为未引入酸，图3B为引入了甲酸，图3C为引入了乙酸，图3D为引入了丙酸。图4为三氟乙酸作为添加剂的情况下，于分析物离子化区域引入丙酸与未引入丙酸的色谱基峰图，其中，实线表示未引入丙酸，虚线表示引入了丙酸(PA)。具体实施方式下面通过实施例进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液相色谱‑质谱联用系统对分析物的分离鉴定方法，其特征在于：使用三氟乙酸作为液相色谱流动相添加剂，在密闭的电喷雾离子源处引入挥发性酸气体，通过向离子化区域中引入挥发性酸气体来降低或消除三氟乙酸对电喷雾质谱检测信号的抑制，提高质谱信号，进而提高检测的分辨率和灵敏度。

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱-质谱联用系统对分析物的分离鉴定方法，其特征在于：使用三氟乙酸作为液相色谱流动相添加剂，在密闭的电喷雾离子源处引入挥发性酸气体，通过向离子化区域中引入挥发性酸气体来降低或消除三氟乙酸对电喷雾质谱检测信号的抑制，提高质谱信号，进而提高检测的分辨率和灵敏度。2.根据权利要求1所述的分离鉴定方法，其特征在于：所述的挥发性酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等可用于质谱的挥发性酸中的一种或两种以上混合，挥发性酸的纯度为98％-100％，挥发性酸的引入总量是离子化区域中三氟乙酸质量的7...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹汉法，陈津，王方军，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21