一种母乳中拉莫三嗪的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种母乳中拉莫三嗪的检测方法，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为45:55，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：265nm。本发明专利技术方法可以准确检测母乳中拉莫三嗪，并且检测方法快速简便，专属性强，灵敏度高，稳定性好，可用于临床检测母乳中拉莫三嗪的浓度，为服用拉莫三嗪的哺乳期妇女喂母乳提供指导。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物药物分析领域，具体涉及一种母乳中拉莫三嗪的检测方法。
技术介绍
拉莫三嗪(1amotrigine，LTG,商品名：利必通)是苯三嗪类新一代广谱抗癫痫药物，拉莫三嗪化学名称为3，5-二氨基-6-(2，3-二氯苯基)-as-三吖嗪，分子式为C9H7C12N5。由于大量临床观察研究发现该药物没有明显的胎儿致畸副作用，也不会影响女性的生殖和月经，还同时是一种情感稳定剂，因此，该药物成了全世界妊娠期女性的推荐抗癫痫药物。然而，因哺乳期妇女服用拉莫三嗪以后，母乳中是否含有拉莫三嗪以及含有的拉莫三嗪浓度均不清楚，导致很多服用拉莫三嗪的癫痫女性不敢给孩子喂母乳，最后只能直接选择奶粉喂养，增加了癫痫患者家庭的经济负担，最重要的是奶粉不含母乳所含的所有免疫成分，而且奶粉喂养也不能替代母乳喂养在培养亲子感情方面的重要作用。因此，有效检测母乳中的拉莫三嗪具有重要意义。目前尚没有关于检测母乳中拉莫三嗪方法的报道。
技术实现思路
为了解决前述问题，本专利技术的目的在于提供了一种母乳中拉莫三嗪的检测方法。本专利技术提供了一种母乳中拉莫三嗪的检测方法,它是采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为45:55，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：265nm。进一步优选地，所述检测方法是定量检测方法，步骤如下：a、供试品制备：取供试母乳，加入5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；b、标准品制备：取空白母乳，加入1/9倍体积的拉莫三嗪标准品溶液，混匀得标样母乳，再加入标样母乳5倍体积的乙酸乙酯，混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为标准品；c、检测：取步骤a的供试品和步骤b的标准品，用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定
相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为45:55，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：265nm；d、绘制标准曲线，计算供试母乳中拉莫三嗪的含量。母乳：是产后女性乳房产生的用作哺育婴儿的汁液。空白母乳：是指来自于未服用拉莫三嗪妇女的母乳。进一步优选地，所述步骤(1)、步骤a或步骤b中，离心的转速是4000r/min，离心的时间为10min。进一步优选地，所述步骤(1)、步骤a或步骤b中，吹干是在50℃条件下用氮气吹干。进一步优选地，所述步骤(1)、步骤a或步骤b中，复溶是采用步骤(2)中的流动相复溶。进一步优选地，所述步骤(2)或步骤c中，所述C18色谱柱的规格为150mm×4.6mm，填料粒径为5μm。进一步优选地，所述步骤(2)或步骤c中，所述流动相中，无机盐溶液是浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液。进一步优选地，所述步骤(2)或步骤c中，流动相的流速1.0mL/min。进一步优选地，所述步骤(2)或步骤c中，检测的柱温为37℃。高效液相色谱是检测领域常用的检测方法，但是由于母乳本身的成分复杂，干扰杂质多，会干扰拉莫三嗪的测定，而且拉莫三嗪在母乳中的代谢产物也会干扰拉莫三嗪的测定，另外，由于母乳中拉莫三嗪的浓度低，不易富集，检测难度大。比如，申请人在前期实验中发现用紫外分光光度计在190—900nm对拉莫三嗪进行紫外扫描，显示其最大吸收波长为207.94nm，然而，在该波长下检测，却存在很多干扰峰，无法准确检测。本专利技术通过特定的前处理方法与特定高效液相色谱检测条件的结合，达到了准确检测母乳中拉莫三嗪的目的，并且，本专利技术方法快速简便，专属性强，灵敏度高，稳定性好，可用于临床检测母乳中拉莫三嗪的浓度，为服用拉莫三嗪的哺乳期妇女喂母乳提供指导。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为按本专利技术实施例1方法对空白母乳进行检测所得的高效液相色谱图。图2为按本专利技术实施例1方法对加入了拉莫三嗪标准品的标样母乳进行检测所得的高效液相色谱图，LTG为拉莫三嗪。图3为按本专利技术实施例1方法对加供试母乳进行检测所得的高效液相色谱图，LTG为拉莫三嗪。图4为按本专利技术试验例2方法所得的标准曲线图。图5为按本专利技术试验例6抗干扰实验所得的高效液相色谱，图中1为拉莫三嗪的峰、2为氯霉素的峰、3为丙戊酸钠的峰。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。具体如下：实验材料：拉莫三嗪标准品100775-200401，中国药品生物制品检定所；甲醇：分析纯(20120921)，成都市科龙化工试剂厂；磷酸二氢钾：分析纯(20091010)，成都市科龙化工试剂厂；乙酸乙酯：分析纯(20120414)，成都市科龙化工试剂厂。主要实验仪器：高效液相色谱仪：LC-20AB，日本岛津公司；紫外扫描仪：UV-VIS282PC，Unico仪器有限公司。供试母乳来自服用了拉莫三嗪妇女的母乳。实施例1 本专利技术定量检测方法(1)供试品的制备：取供试母乳200μL，置于1.5mL离心管中，加入1mL乙酸乙酯，旋涡混合20s，4000r/min离心10min，吸取上层乙酸乙酯层于1.5mL离心管中，在50℃水浴下用氮气吹干，加入100μL流动相(流动相为甲醇-磷酸二氢钾(0.05mol/L，pH4.5)(45:55)，)后旋涡混合20s，作为供试品。(2)标准品的制备：取空白母乳180μL，置于1.5mL离心管中分别加入浓度为5，10，20，50，100和150μg/mL拉莫三嗪标准品溶液20μL，旋涡混合20s，使拉莫三嗪浓度分别为0.5,1,2,5,10,15μg/mL，作为标样母乳。向该标样母乳中加入1mL乙酸乙酯，旋涡混合20s，4000r/min离心10min，吸取上层乙酸乙酯层于1.5mL离心管中，在50℃水浴下用氮气吹干，加入100μL流动相后旋涡混合20s，作为标准品。(3)分别取供试品和标准品进行检测，进样量为20μL，色谱条件如下：色谱柱为Diamonsil C18(5μm 150mm×4.6mm)，流动相为甲醇-磷酸二氢钾(0.05mol/L，pH4.5)(45:55)，等度洗脱；柱温为37℃；流速为1.0mL/min；检测波长为265nm。(4)制作拉莫三嗪浓度与峰面积的标准曲线，根据标准曲线，计算供试母乳中拉莫三嗪的含量。实施例 2本专利技术定性检测方法(1)供试品的制备：取供试母乳200μL，置于1.5mL离心管中，加入1mL乙酸乙酯，旋涡混合20s，4000r/min离心10min，吸取上层乙酸乙酯层于1.5mL离心管中，在50℃水浴下用氮气吹干，加入100μL流动相(流动相为甲醇-磷酸二氢钾(0.05mol/L，pH4.5)(45:55))后旋涡混合20s，作为供试品。(2)取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种母乳中拉莫三嗪的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇‑无机盐溶液，二者的体积比为45:55，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：265nm。

【技术特征摘要】
1.一种母乳中拉莫三嗪的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为45:55，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：265nm。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述检测方法是定量检测方法，步骤如下：a、供试品制备：取供试母乳，加入5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；b、标准品制备：取空白母乳，加入1/9倍体积的拉莫三嗪标准品溶液，混匀得标样母乳，再加入标样母乳5倍体积的乙酸乙酯，混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为标准品；c、检测：取步骤a的供试品和步骤b的标准品，用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为45:55，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，周东，谢贞建，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51