利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法技术

本发明专利技术提供一种利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，步骤如下：以地衣芽孢杆菌FJAT‑4(Bacillus licheniformis)为菌种，以LB液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；以微生物发酵床养猪垫料与麸皮或玉米芯或麦粒混合后作为制备菌肥生产的固体基础培养基，分装于组培瓶中，灭菌后，接种液体菌种，30‑35℃恒温培养发酵40‑52h，制备地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥。本发明专利技术采用固态发酵方式，利用微生物发酵床养猪垫料作为固态发酵培养基成份之一，即可为菌株发酵提供所需养分，降低生产成本，又可降低农副产品废弃物对环境的污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法。
技术介绍
目前植物病害的防治主要通过选育高抗品种、农业措施、化学药剂和生物农药等方法进行防治，因化学农药带来生态环境和人类健康等弊端越来越严重，育种周期长，一些农业措施操作繁琐等问题，近几年生物防治得到了广泛的关注，越来越多的科研人员开始攻研具有肥效和生防的生物制剂，以减少化肥农药的使用，节约成本，降低污染，保护环境。作物枯萎病是由尖胞镰刀菌(Fusarium oxysporum)侵染引起的一种毁灭性土传病害，可造成严重损失，目前对该病害的防治仍困难重重。生物防治作为该病害的防治方法之一，近年来相关研究越来越多，特别是芽胞杆菌因其易培养、存活能力强，防治效果好，已有较广泛的研究与应用，如枯草芽胞杆菌、短短芽胞杆菌、淀粉液化芽胞杆菌等在防治枯萎病上都有一定的应用。地衣芽孢杆菌因其有耐热、酶系丰富、产酶量高和安全等诸多优良特性，对尖胞镰刀菌具有很强的抑制作用，已在香蕉、棉花和西瓜等作物枯萎病防治方面有成功的应用。地衣芽孢杆菌的生产发酵常采用液体发酵或液固双向发酵。目前地衣芽孢杆菌主要采用液体发酵为主，固态发酵较少。在发酵设备和工艺方面，虽深层液体发酵工艺都较为成熟，但用于农用微生物制剂的生产，存在成本高、代谢物不能充分利用、有废液排放等弊端。而固态发酵具湿度低，能耗低，培养基来源广泛等优越性，特别适宜发展中国家生物农药的有效生产。目前常用固态发酵原料为麸皮、米糠、黄豆粉饼、花生粉饼等农业副产物，存在价格高、高温灭菌后粘度增加、疏松度不够、空隙小、后续接种困难等问题，/>因此寻找一种新的农业副产物作为固态发酵的主要培养基是必需的。近几年兴起的微生物发酵床养猪技术产生的副产物--微生物发酵床养猪垫料(以下简称垫料)，它是通过微生物将谷壳，锯末、猪粪、尿等物混合经原位分解发酵而成，富含养分，可考虑作为地衣芽胞杆菌固态发酵原料进行生产。现有技术的缺点：在发酵设备和工艺方面，虽深层液体发酵工艺都较为成熟，但用于农用微生物制剂的生产，存在成本高、代谢物不能充分利用、有废液排放等弊端。目前常用固态发酵原料为麸皮、米糠、黄豆粉饼、花生粉饼等农业副产物，存在价格高、高温灭菌后粘度增加、疏松度不够、空隙小、后续接种困难等问题，因此寻找一种新的农业副产物作为固态发酵的主要培养基是必需的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，采用固态发酵方式，利用微生物发酵床养猪垫料作为固态发酵培养基成份之一，即可为菌株发酵提供所需养分，降低生产成本，又可降低农副产品废弃物对环境的污染。本专利技术是这样实现的：利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤(1)生产用液体菌种的制备：以地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)为菌种，以LB液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；步骤(2)地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)固体菌肥的制备：以微生物发酵床养猪垫料与麸皮或玉米芯或麦粒混合后作为制备菌肥生产的固体基础培养基，分装于组培瓶中，灭菌后，接种步骤(1)所制备的液体菌种，30-35℃恒温培养发酵40-52h，制备地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥；所述地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)，于2010年11月1
日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为武汉市珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2010285。进一步地，所述步骤(1)中生产用液体菌种制作步骤具体如下：步骤A.地衣芽孢杆菌菌株FJAT-4的活化：用接种环将地衣芽孢杆菌菌株FJAT-4划线于NA培养基上，并于恒温培养箱中培养48h，培养温度设定为30℃；步骤B.发酵液的制备：将步骤A所获得的活化后的地衣芽孢杆菌菌株FJAT-4的单菌落接种于LB液体培养基中，并将其置于恒温摇床振荡培养，转速200rpm，温度设定为30℃，培养24h后即得生产用液体菌种。进一步地，所述步骤A中NA培养基的组分为：牛肉浸膏0.1％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠0.5％，琼脂1.8％，以水配制，pH 7.0-7.2；所述步骤B中LB液体培养基组分为：牛肉浸膏0.1％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠0.5％，以水配制，pH 7.0-7.2；且各培养基组分中的百分比均为重量百分比。进一步地，所述步骤(2)中地衣芽孢杆菌固体菌肥的制备步骤为：步骤C.以微生物发酵床养猪垫料为主要成份的固体基础培养基配制：所述微生物发酵床养猪垫料与麸皮按重量比为0:10～7:3配制，所述微生物发酵床养猪垫料与玉米芯或麦粒按重量比为3:7～7:3配制形成固体基础培养基；步骤D.基础培养基中其他成分的添加：在固体基础培养基中按质量比添加K2HPO4 0.05％、MgSO4 0.025％，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为40％～45％，转入组培瓶中，组培瓶中装料量控制在5％-25％体积比范围内，灭菌；步骤E.地衣芽孢杆菌固体菌肥的培养与制备：往步骤D的培养基中接种步骤(1)中制备的液体菌种，按接种量3％(v/g)体积接种，30～35℃恒温下发酵16-52小时，即地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥。进一步地，所述步骤C中，所述微生物发酵床养猪垫料与麸皮或玉米
芯或麦粒按重量比为7:3配制形成固体基础培养基；所述步骤D中，调整含水体积比为45％，转入组培瓶中，组培瓶中装料量控制在25％体积比范围；所述步骤E中，接种完成后，在35℃恒温下发酵40小时，即地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥。本专利技术具有如下优点：本专利技术一方面为微生物发酵床垫料废弃物提供一条新的利用途径，又解决了废弃物造成的环境污染，实现资源再利用；另一方面又为地衣芽孢杆菌的固体发酵筛选到了价格低廉的发酵原料，为工艺生产节省成本。该发酵产物既有很好的有机肥料，又含有丰富的地衣芽孢杆菌生防菌，菌含量能达到2.63×109cfu/g，既可作为菌肥使用，又可以作为肥料使用，有效的将菌和肥有机结合在一起。故本专利技术具有很好的经济效应和环境效应。总之，本专利技术采用固态发酵方式，利用微生物发酵床养猪垫料作为固态发酵培养基成份之一，即可为菌株发酵提供所需养分，降低生产成本，又可降低农副产品废弃物对环境的污染。【具体实施方式】以下结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例一、菌株的获得本专利技术所述地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)是从福建省福州市永泰、福清、闽侯等6个县(市)的番茄、西瓜、豇豆等作物的根际土壤中分离并筛选得到具有很好生物防治作用的菌株。1.菌株的分离：(1)取根际土壤样品10g于90mL无菌水中，充分振荡后吸取1mL土壤悬液进行梯度稀释；(2)将步骤(1)获得的土壤稀释液涂布于NA培养基平板上，然后将
NA培养基平板置于30℃恒温培养箱内培养72h；(3)先挑取步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤(1)生产用液体菌种的制备：以地衣芽孢杆菌FJAT‑4(Bacillus licheniformis)为菌种，以LB液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；步骤(2)地衣芽孢杆菌FJAT‑4(Bacillus licheniformis)固体菌肥的制备：以微生物发酵床养猪垫料与麸皮或玉米芯或麦粒混合后作为制备菌肥生产的固体基础培养基，分装于组培瓶中，灭菌后，接种步骤(1)所制备的液体菌种，30‑35℃恒温培养发酵40‑52h，制备地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥；所述地衣芽孢杆菌FJAT‑4(Bacillus licheniformis)，于2010年11月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为武汉市珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2010285。

【技术特征摘要】
1.利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤(1)生产用液体菌种的制备：以地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)为菌种，以LB液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；步骤(2)地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)固体菌肥的制备：以微生物发酵床养猪垫料与麸皮或玉米芯或麦粒混合后作为制备菌肥生产的固体基础培养基，分装于组培瓶中，灭菌后，接种步骤(1)所制备的液体菌种，30-35℃恒温培养发酵40-52h，制备地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥；所述地衣芽孢杆菌FJAT-4(Bacillus licheniformis)，于2010年11月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为武汉市珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2010285。2.根据权利要求1所述的利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，其特征在于：所述步骤(1)中生产用液体菌种制作步骤具体如下：步骤A.地衣芽孢杆菌菌株FJAT-4的活化：用接种环将地衣芽孢杆菌菌株FJAT-4划线于NA培养基上，并于恒温培养箱中培养48h，培养温度设定为30℃；步骤B.发酵液的制备：将步骤A所获得的活化后的地衣芽孢杆菌菌株FJAT-4的单菌落接种于LB液体培养基中，并将其置于恒温摇床振荡培养，转速200rpm，温度设定为30℃，培养24h后即得生产用液体菌种。3.根据权利要求2所述的利用微生物发酵床养猪垫料生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，其特征在于：所述步骤A中NA培养基的组分为：牛肉浸膏0.1％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘波，陈燕萍，肖荣凤，朱育菁，葛慈斌，史怀，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35