具有降血糖功能的黑苦荞米提取物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有降血糖功能的黑苦荞米提取物及其制备方法，包括以下步骤：(1)将黑苦荞米粉碎、过20目筛处理后，得到黑苦荞米原料；(2)取得到的黑苦荞米原料，加入料液比为1:20‑1:25、体积分数为50‑60％的乙醇溶液；在150～250W频率下超声波处理10～30min后，继续在40‑75℃条件下，搅拌提取30‑75min后，冷却至室温，将提取液在4℃、3000～6000rpm下冷冻离心10‑30min，收集上清液；(3)取上清液，减压浓缩，回收乙醇，浓缩得到浓缩液；(4)将得到的浓缩液进行液相色谱分离，收集分离液，分离液经真空冷冻干燥得到黑苦荞米提取物。采用本发明专利技术的方法制备得到的黑苦荞米提取物主要成分为芦丁，纯度为87‑95％。同时，本发明专利技术的黑苦荞米提取物具有较好的降血糖功效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及功能食品领域，特别涉及一种具有降血糖功效的黑苦荞米提取物及其制备方法。
技术介绍
荞麦属于蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrium)，一年生草本，双子叶植物。荞麦又名三角麦、乌麦，生育期短、耐冷冻瘠薄，是粮食作物中比较理想的填闲补种作物。到目前为止，荞麦属中研究较多的化学成分是黄酮类化合物，该类化合物是荞麦中最重要的生物活性物质之一，广泛存在于荞麦特别是苦荞的花、茎、也和种子中，具有抗氧化、防治冠心病、降低胆固醇等多种保健功能(B,MrázováZ.Prophylactic components of buckwheat[J].Food Research International,2005,38(5):561-568.)。荞麦分为苦荞麦和甜荞麦，苦荞种子和植株中黄酮类化合物的含量均高于甜荞。荞麦黄酮类化合物主要包括芦丁、槲皮素、山奈酚、桑色素、金丝桃苷等化合物，其中芦丁又称芸香苷，维生素P，占苦荞中黄酮总量的75％以上(中国苦荞[M].科学出版社,2009.；李丹.苦荞麦加工与利用的研究:博士学位论文[D].,2001.)。糖尿病是由多种病因所引起的以高血糖为特征的代谢紊乱性疾病。高血糖主要是由胰岛素分泌不足或其生物功能障碍引起，进而会导致蛋白质、脂肪等代谢紊乱，造成各种组织，特别是眼、心脏、肾、血管、神经的慢性损害及功能衰竭。随着社会经济的快速发展，生活水平的逐渐提高和生活模式的改变，全球糖尿病患者数逐年成上升趋势。糖尿病目前已经成为威胁人类健康的重大疾病，是世界上最普遍和最具挑战性的重大公共卫生问题之一。相关研究表明，黄酮具有体外和体内的降血糖效果(李胜华,伍贤进,曾军英,等.蛇含委陵菜总黄酮的体外和体内降血糖效果研究[J].食品科学,2014,11:049.)。肝脏是糖代谢作用的地点之一,参与糖
原的合成，HepG2细胞来源于人体肝组织,具有肝细胞的功能和形态,因而可以采用HepG2细胞模型,来观察黑苦荞米提取物的降糖作用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种具有黑苦荞米提取物的制备方法，采用超声处理、乙醇提取和液相色谱分离制备方法获得高纯度黑苦荞米提取物，经该法制备所得的黑苦荞米提取物具有降血糖活性。本专利技术通过以下技术方案实现，提取步骤如下：(1)将黑苦荞米粉碎、过20目筛处理后，得到黑苦荞米原料；(2)取步骤(1)得到的黑苦荞米原料，加入料液比为1:20-1:25、体积分数为50-60％的乙醇溶液；在150～250W频率下超声波处理10～30min后，继续在40-75℃条件下，搅拌提取30-75min后，冷却至室温，将提取液在4℃、3000～6000rpm下冷冻离心10-30min，收集上清液；(3)取步骤(2)的上清液，在40℃条件下减压浓缩，回收乙醇，浓缩至原体积的20-25％，得到浓缩液；(4)将步骤(3)得到的浓缩液进行液相色谱分离，收集分离液，分离液经真空冷冻干燥得到黑苦荞米提取物。作为本专利技术的黑苦荞米黄酮提取方法的改进，步骤(4)所述的液相色谱分离条件为：色谱柱为Promosil C18(4.6×250mm,5μm)，即色谱柱孔内径4.6mm，长度250mm，色谱柱填料颗粒直径5μm，流速为1mL/min，柱温控制为30℃；流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；采用梯度洗脱方式，洗脱流程为：0-5min时，流动相B的体积浓度为5％；5-25min时，流动相B的体积浓度为5-16％；25-33min时，流动相B的体积浓度为16-30％；33-35min时，流动相B的体积浓度为30-90％；35-40min时，流动相B的体积浓度为90％；40-45min时，流动相B的体积浓度为90-5％；45-50min时，流动相B的体积浓度为5％；收集20-30min时间段内的洗脱液，冷冻干燥至恒重后，得到黑苦荞米提取物。本专利技术中，所得到的黑苦荞米提取物中有效成分为芦丁，芦丁质量百分比含量为87-95％。本专利技术的黑苦荞米提取物具有降血糖功效。可用于制备以高血糖为特征的医学病症的治疗药物或用于制备具有降血糖功能的功能性食品。作为优选，黑苦荞米提取物的有效降血糖剂量为50μg/ml。本专利技术具有以下优点及效果：1、本专利技术主要采用超声波辅助乙醇提取，具有环保、方便和高效的优点2、通过液相色谱制备的方法，可以得到高纯度的苦荞米提取物3、所得的苦荞米提取物具有较好的降血糖生物活性附图说明图1黑苦荞米提取物液相图；图2为实施例1制备的黑苦荞米提取物提高HepG2细胞对葡萄糖的消耗作用；图3为实施例2制备的黑苦荞米提取物对α-淀粉酶活性的抑制作用。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述，以下列举的仅是本专利技术的具体实施例，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：本专利技术的实施例以黑苦荞米为原料。实施例1(1)将黑苦荞米粉碎、过20目筛处理后，得到黑苦荞米原料；(2)取5g步骤(1)得到的黑苦荞米原料，加入125mL食品级50％的乙醇溶液，在150W频率下超声波处理20min；然后在65℃条件下，搅拌提取70min后，冷却至室温，将提取液在4℃、5000rpm下冷冻离心10min，收集上清液；(3)取步骤(2)的上清液，在40℃条件下减压浓缩，回收乙醇，浓缩至30ml，得到浓缩液；(4)将步骤(3)得到的浓缩液进行液相色谱分离，收集分离液，分离液经真空冷冻干燥得到黑苦荞米提取物，具体液相色谱分离条件为：液相色谱仪器为Dionex ultimate 3000，检测器为UV检测器，检测波长为260nm，色谱柱为Promosil C18(4.6×250mm,5μm)，进样量为10μl，流速为1mL/min，柱温控制为30℃；流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；采用梯度洗脱方式，洗脱流程为：0-5min时，流动相B的体积浓度为5％；5-25min时，流动相B的体积浓度为5-16％；25-33min时，流动相B的体积浓度为16-30％；33-35min时，流动相B的体积浓度为30-90％；35-40min时，流动相B的体积浓度为90％；40-45min时，流动相B的体积浓度为90-5％；45-50min时，流动相B的体积浓度为5％；收集20-30min时间段内的洗脱液，-60℃冷冻干燥至恒重后，得到黑苦荞米提取物103mg。经HPLC检测，所得到的黑苦荞米提取物中有效成分为芦丁，芦丁质量百分比含量为95％，见图1。实施例2将实施例1步骤(2)中的乙醇浓度由50％改为55％，超声频率由150W改为200W,超声波处理时间由20min改为10min，搅拌提取时间由70min改为75min，离心条件由5000rpm改为3000rpm，离心时间由10min改为30min，其余同实施例1.最终得到黑苦荞米提取物97mg。经HPLC检测，所得到的黑苦荞米提取物中有效成分为芦丁，芦丁质量百分比含量为90％。实施例3将实施例1步骤(2)中提取温度由65℃改为40℃，超声频率由150W改为250W,超声波处理时间由20min改为30min，搅拌提取时间由70min改为30min，离心条件由5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黑苦荞米提取物的制备方法，其特征在于，提取步骤如下：(1)将黑苦荞米粉碎、过20目筛处理后，得到黑苦荞米原料；(2)取步骤(1)得到的黑苦荞米原料，加入料液比为1:20‑1:25、体积分数为50‑60％的乙醇溶液；在150～250W频率下超声波处理10～30min后，继续在40‑75℃条件下，搅拌提取30‑75min后，冷却至室温，将提取液在4℃、3000～6000rpm下冷冻离心10‑30min，收集上清液；(3)取步骤(2)的上清液，在40℃条件下减压浓缩，回收乙醇，浓缩至原体积的20‑25％，得到浓缩液；(4)将步骤(3)得到的浓缩液进行液相色谱分离，收集分离液，分离液经真空冷冻干燥得到黑苦荞米提取物。

【技术特征摘要】
1.一种黑苦荞米提取物的制备方法，其特征在于，提取步骤如下：(1)将黑苦荞米粉碎、过20目筛处理后，得到黑苦荞米原料；(2)取步骤(1)得到的黑苦荞米原料，加入料液比为1:20-1:25、体积分数为50-60％的乙醇溶液；在150～250W频率下超声波处理10～30min后，继续在40-75℃条件下，搅拌提取30-75min后，冷却至室温，将提取液在4℃、3000～6000rpm下冷冻离心10-30min，收集上清液；(3)取步骤(2)的上清液，在40℃条件下减压浓缩，回收乙醇，浓缩至原体积的20-25％，得到浓缩液；(4)将步骤(3)得到的浓缩液进行液相色谱分离，收集分离液，分离液经真空冷冻干燥得到黑苦荞米提取物。2.根据权利要求1所述的黑苦荞米提取物，其特征在于，步骤(4)所述的液相色谱分离条件为：色谱柱为Promosil C18(4.6×250mm,5μm)，流速为1mL/min，柱温控制为30℃；流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为0.1％甲酸水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，孙崇德，牛兴和，王冶，杨海莺，陈历水，鲍涛，
申请(专利权)人：浙江大学，中粮营养健康研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33