一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法技术

本发明专利技术公开了一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内的平板孢子，震荡后用无菌蒸馏水稀释，即得孢子悬浮液并备用；b）复合60Co‑γ与等离子体诱变：制取该菌株的孢子悬浮液，进行等离子体离子束注入，置于剂量0.5～2.0 KGy的辐照台面上，吸取60Co‑γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4%的干酪素培养基上；c）菌株筛选：c1)将干酪素培养基在35℃避光恒温培养2～4 d，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株，接入分离培养基斜面保存备用；c2)取步骤c1）得到的菌株，加入1 mL 2%的硫代硫酸钠作为解毒剂，培养基中30℃培养2d，选育出酸性蛋白酶酶活力提高值最大的为高产菌株。

【技术实现步骤摘要】
201610351277

【技术保护点】
一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内40℃下培养5 d的平板孢子，用无菌蒸馏水洗脱平板孢子，置于无菌并盛有玻璃珠的三角瓶中，在250～300 r/min的震荡装置上震荡2～5 h，使孢子活化和分散，使孢子分散率在90% 以上，在光学显微镜下观察孢子并计数，然后用无菌蒸馏水稀释孢子悬浮液至115 个/mL，即得孢子悬浮液并备用；b）复合60Co‑γ与等离子体诱变：洗脱麦芽汁琼脂平板培养基上的孢子，制取该菌株个/mL的孢子悬浮液，移液管移取0.2 mL悬液至无菌空平皿，涂匀，以无菌风吹干，计算损耗率；进行等离子体离子束注入，以为注入离子，注入电压为10KV～25KV，注入剂量分别为（15~75）×2.6×；然后将盛有菌体悬液的试管置于剂量0.5～2.0 KGy的辐照台面上，涂布培养72 h，吸取60Co‑γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4% 的干酪素培养基上；c）菌株筛选：c1) 将步骤b）的干酪素培养基在35℃避光恒温培养2～4 d，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株，接入分离培养基斜面保存备用；HC值=透明圈直径/菌落直径；c2) 取步骤c1）得到的菌株，加入 1 mL 2 %的硫代硫酸钠作为解毒剂，培养基中 30℃培养 2d，然后利用福林酚法检测中性蛋白酶酶活力，选育出酸性蛋白酶酶活力提高值最大的为高产菌株。...

【技术特征摘要】
1.一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内40℃下培养5 d的平板孢子，用无菌蒸馏水洗脱平板孢子，置于无菌并盛有玻璃珠的三角瓶中，在250～300 r/min的震荡装置上震荡2～5 h，使孢子活化和分散，使孢子分散率在90% 以上，在光学显微镜下观察孢子并计数，然后用无菌蒸馏水稀释孢子悬浮液至115 个/mL，即得孢子悬浮液并备用；b）复合60Co-γ与等离子体诱变：洗脱麦芽汁琼脂平板培养基上的孢子，制取该菌株个/mL的孢子悬浮液，移液管移取0.2 mL悬液至无菌空平皿，涂匀，以无菌风吹干，计算损耗率；进行等离子体离子束注入，以为注入离子，注入电压为10KV～25KV，注入剂量分别为（15~75）×2.6×；然后将盛有菌体悬液的试管置于剂量0.5～2.0 KGy的辐照台面上，涂布培养72 h，吸取60Co-γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4% 的干酪素培养基上；c）菌株筛选：c1) 将步骤b）的干酪素培养基在35℃避光恒温培养2～...

【专利技术属性】
技术研发人员：何荣军，王茜，孙培龙，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33