可溶性GPC3蛋白质的测定方法技术

本发明专利技术涉及被检试样中的可溶性GPC3蛋白质的测定方法，其特征在于，使用与GPC3蛋白质的N末端区域中存在的不同表位结合的2种不同的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及被检试样中的可溶性GPC3蛋白质的测定方法，其特征在于，使用与GPC3蛋白质的N末端区域中存在的不同表位结合的2种不同的抗体。【专利说明】可溶性GPC3蛋白质的测定方法
本专利技术涉及被检试样中的可溶性GPC3蛋白质的测定方法，其特征在于，使用与 GPC3蛋白质的N末端区域中存在的不同表位结合的2种不同的抗体。
技术介绍
有报道称，由肝细胞癌引起的死亡全年约有60万，在世界由癌症引起的死亡中位 居第五位(非专利文献1)。大部分肝细胞癌患者在诊断为该疾病后1年以内死亡。不幸的是， 经常出现在能够治愈的疗法不怎么奏效的后期阶段被诊断出肝细胞癌的例子。包括化学疗 法、化学栓塞术、烧灼和质子束疗法在内的医疗处置对上述患者的效果依然不充分。大多数 患者表现出疾病复发，该情况伴随血管浸润及多部位肝内转移迅速发展到进行阶段，其5年 存活率仅为7% (非专利文献2)。可实施局部癌切除术的肝细胞癌患者的预后较好，但其5年 存活率仍停留在15%~39% (非专利文献3)。由于磷脂酰肌醇蛋白聚糖(glypican)3(GPC3)在肝癌中频繁地高度表达，所以认 为GPC3能用作确定GPC3在肝癌中的作用的靶标、肝癌治疗的靶标或肝癌诊断的靶标。 已知GPC3在细胞表面表达后，在该特定部位通过转化酶、磷酯酶D或Notum的作用 而受到加工(非专利文献4)。已公开了利用上述现象、通过测定存在于患者的血浆中的GPC3 来筛选HCC患者的方法(专利文献1)。此外，已开发了包含与被分泌至血浆中的分泌型GPC3 的表位结合的抗体的肝癌的诊断药物或诊断方法(专利文献2,3)。此外，已开发了包含下述 抗体的肝癌的诊断药物或诊断方法，所述抗体是存在于从患者分离的组织标本等中的、与 经加工后仍存在于细胞表面的锚定型GPC3的表位结合的抗体(专利文献4)。除了肝癌以外， 还公开了通过测定血液中的GPC3水平来筛选前列腺癌患者的方法(专利文献5)。 本说明书中引用的参考文献如下所述。这些文献中记载的内容全部通过引用并入 本说明书中。需要说明的是，对于本说明书而言，这些文献中的任一篇均不是现有技术。 现有技术文献 专利文献 专利文献 1:W02003/100429 专利文献 2:W02004/038420 专利文献 3:W02004/023145 专利文献 4:W02009/116659 专利文献 5:W02007/081790 非专利文献 非专利文献l:Llovet JM，Burroughs A，Bruix J;Lancet(2003),362,1907-17 非专利文献2:Bosch FX，Ribes J，Cleries R;Gastroenterology(2004)，127，S5_ 16 非专利文献3:Takenaka K，Kawahara N，Yamamoto K，Kajiyama K，Maeda T， Itasaka H1Shirabe K1Nishizaki T,Yanaga K,Sugimachi K；Arch Surg(1996),131,71-6 非专利文献4:Cheng AL，Chen Z，Tsao CJ,Qin S,Kim JS，et al .Efficacy and safety of sorefanib in patients in the Asia-Pacific region with advanced hepatocellular carcinoma : a phase III randomized,double-blind,placebo-controlled trial.Lancet Oncol.(2009)10,25-34
技术实现思路
专利技术所要解决的课题以往，不存在能够检测或准确定量健康人体液中含有的低浓度的可溶性GPC3的技 术，因此，未能实现癌的罹患初期阶段的早期发现、使用的抗癌剂的选择取舍、精密进行治 疗后的预后诊断。 本专利技术所要解决的课题在于提供可溶性GPC3的高灵敏度测定方法，所述测定方法 能够定量性地测定健康人体液中含有的可溶性GPC3的浓度。 用于解决课题的手段本申请的专利技术人为了解决上述课题而进行了锐意研究，发现通过使用与GPC3蛋白 质的N末端区域中存在的不同表位结合的2种不同的抗体，能够以高灵敏度测定被检试样中 的可溶性GPC3蛋白质。 SP，本专利技术涉及以下的~。 被检试样中的可溶性GPC3蛋白质的测定方法，其特征在于，使用2种不同的抗 体，所述2种不同的抗体与包含序列号70所示的氨基酸序列的GPC3蛋白质的第128号氨基酸 至第357号氨基酸的序列中含有的不同的表位结合； 如上述所述的测定方法，其中，不同的表位中的一者为包含选自GPC3蛋白 质的第337号、339号、340号、及344号氨基酸中的至少1种氨基酸的表位； 如上述或所述的测定方法，其中，不同的表位中的一者为包含选自GPC3 蛋白质的第221号、298号、301号、302号、305号、308号及309号中的至少1种氨基酸的表位。 如上述所述的测定方法，其中，不同的表位为下述组合(A)或(B); (A)不同的表位中的一者为包含选自GPC3蛋白质的第341号、第343号、346号、347 号、348号、349号及350号中的至少1种氨基酸的表位，另一者为包含选自GPC3蛋白质的第 297号、300号、304号、306号、311号、312号、313号、314号及315号中的至少1种氨基酸的表位 (B)不同的表位中的一者为包含选自GPC3蛋白质的第128号、129号、131号、132号、 133 号、134 号、135 号、171号、208 号、209 号、210 号、211号、212 号、214 号、215 号、218 号、322 号、325号、326号、328号、329号、330号、332号、333号、335号、336号及338号中的至少1种氨 基酸的表位，另一者为包含选自GPC3蛋白质的第220号、228号、231号、232号、235号、291号、 294号及295号中的至少1种氨基酸的表位 如上述所述的测定方法，其中，不同的表位为下述组合(A)或(B); (A)不同的表位中的一者为包含选自GPC3蛋白质的第337号、339号、340号、及344 号氨基酸中的至少1种氨基酸、并且包含选自第341号、343号、346号、347号、348号、349号及 350号中的至少1种氨基酸的表位，另一者为包含选自GPC3蛋白质的第221号、298号、301号、 302号、305号、308号及309号中的至少1种氨基酸、并且包含选自第297号、300号、304号、306 号、311号、312号、313号、314号及315号中的至少1种氨基酸的表位 (B)不同的表位中的一者为包含选自GPC3蛋白质的第337号、339号、340号及344号 氨基酸中的至少1种氨基酸、并且包含选自第128号、129号、131号、132号、133号、134号、135 号、171 号、208 号、209 号、210 号、211号、212 号、214 号、215 号、218 号、322 号、325 号、326 号、 328号、32本文档来自技高网...

【技术保护点】
被检试样中的可溶性GPC3蛋白质的测定方法，其特征在于，使用2种不同的抗体，所述2种不同的抗体与包含序列号70所示的氨基酸序列的GPC3蛋白质的第128号氨基酸至第357号氨基酸的序列中含有的不同的表位结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：大友俊彦，天野润，安达秀树，铃木司，水内素晶，山口哲司，和久井世纪，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，JSR株式会社，JSR生命科学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP