用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂，包括间充质干细胞和外源性细胞因子。通过采用间充质干细胞结合外源性细胞因子共同制成干细胞制剂，使得间充质干细胞能够定向向内皮细胞分化，并通过间充质干细胞的旁分泌及外源性细胞因子能够刺激内皮细胞的生长，增加创面中成纤维细胞、毛细血管的生成以及胶原合成和肉芽的生长，并能够增加皮肤角化细胞及内皮细胞的增殖，从而能够实现快速有效修复因溃疡损伤的皮肤的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞工程
，特别涉及一种用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂。
技术介绍
慢性皮肤溃疡又称难治性皮肤溃疡，是一种常见难治性疾病，具有病因复杂、病程 长和反复发作特点，可引起皮肤表皮和部分真皮甚至皮下脂肪缺损。致病因素包括糖尿病、 外伤、压迫和感染等，其中糖尿病为主要原因。目前，我国糖尿病患者约9200万，15%~25% 患者在其疾病过程中将发生足溃疡。目前，尚无慢性皮肤溃疡治疗指南，临床上多采用清创术、负压疗法、抗感染药物 及敷料处理，这些方法都达不到兼具促进创面愈合和保护创面的作用，治疗效果不尽人意。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术中治疗皮肤溃疡效果差等缺陷，提 供一种能够快速有效治疗皮肤溃疡的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:提供一种用于修复皮肤溃疡的干细 胞制剂，包括间充质干细胞和外源性细胞因子。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，所述间 充质干细胞的浓度为(2~8) X IO7个/ml。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述外源性细胞因子包括成 纤维细胞生长因子、转化生长因子、表皮生长因子、纤维母细胞生长因子、血管内皮生长因 子、血小板源生长因子、类胰岛素生长因子和P物质。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述外源性细胞因子来源于 血小板血浆裂解液。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述血小板血浆裂解液的制 备过程包括以下步骤：无菌条件下，取骨髓，加入肝素钠抗凝，离心至骨髓分层，取下层细胞层，加入标准 培养基进行原代培养;取原代培养后的细胞悬液离心后吸取上层血浆和下层红细胞进行第 二次离心，再次取上层血浆和下层红细胞进行第三次离心，弃上清液后，混匀，置于-50~-80°C保存，24~36小时后取出，水浴解冻，反复冻存解冻至少三次，即可获得血小板血浆裂 解液。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述标准培养基为含有体积 分数为5~15%血清、浓度为2~15U/ml的强力霉素以及1~5U/ml肝素的DMEM培养基。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，所述血 小板血浆裂解液的体积分数为5~20%。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述间充质干细胞的获取过 程包括以下步骤： 获取脐带，于无菌条件下去除动静脉及外膜，PBS清洗，剪成段，再次清洗去除血 液，然后处理成肉糜状，水浴消化后，加入基础培养基反复吹打，过滤，收集滤液离心，弃上 清，将沉淀的细胞接种于完全培养基中进行培养，次日首次换液，之后每2~3天换液一次； 待细胞融合，不完全消化后，进行传代纯化，获得第三代间充质干细胞完全消化后，继续进 行传代培养。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，所述干细胞制剂还包括20~ 8Omg/m 1的血清蛋白、梓檬酸钠、0.1~0.5mo I /L的氯化钠和5~15μηιο I /L法舒地尔。 在本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂中，还包括1~15U/mL的强力霉 素。 实施本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂，可以达到以下有益效果:通 过采用间充质干细胞结合外源性细胞因子共同制成干细胞制剂，使得间充质干细胞能够定 向向内皮细胞分化，并通过间充质干细胞的旁分泌及外源性细胞因子能够刺激内皮细胞的 生长，增加创面中成纤维细胞、毛细血管的生成以及胶原合成和肉芽的生长，并能够增加皮 肤角化细胞及内皮细胞的增殖，从而能够实现快速有效修复因溃疡损伤的皮肤的目的。【具体实施方式】 为解决现有技术中治疗皮肤溃疡存在治疗效果不佳，治疗周期长等缺陷，本专利技术 的创新点在于提供一种含有间充质干细胞和外源性细胞因子的干细胞制剂，不仅能够提高 皮肤溃疡的治疗效果，而且能够缩短修复皮肤的时间；另外，因干细胞制剂的作用时间较 长，从而能够实现彻底修复皮肤溃疡的目的。 具体地，本专利技术提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂，包括间充质干细胞和细 胞因子。 其中，间充质干细胞可来源于骨髓、脐带、胎盘等，来源广泛、扩增潜能较强，横向 分化能力较强，以及可逃避免疫识别和抑制免疫反应等，其他干细胞无法比拟的优势细胞 活力较好、扩增能力稳定、无免疫原性、无致瘤性等优点，更加适合移植治疗。 而间充质干细胞能够向内皮细胞和成纤维细胞分化，成纤维细胞是皮肤重建的重 要细胞，内皮细胞在皮肤组织重建中可形成血管并参与组织重建，参与创伤愈合的各个阶 段；同时，间充质干细胞还能够分泌对创伤愈合起关键作用的多种细胞因子和生长因子，这 些因子通过不同的基质在局部的炎症反应、上皮再生成、肉芽组织形成、新生血管形成、细 胞外基质的分泌中起着重要作用，具有治疗皮肤溃疡的潜在价值。 间充质干细胞具有强大的分泌潜能，能够分泌大量的细胞因子，包括趋化因子、细 胞生长与营养类因子、细胞因子受体、血管生成因子、促炎症反应因子以及抗炎症反应因 子;这些高分泌的细胞因子间相互作用相互关联，形成复杂的关系网络，其中包括了促炎因 子IL_6(白介素_6)、IL_8(白介素_8)、TNF_a(Tumor Necrosis Factor，肿瘤坏死因子-α)， 抑炎因子IL-10(白介素-1〇)、了册-則肿瘤坏死因子-0)、11^-13(白介素-13)、基质金属蛋白 酶MMPl及抑制剂可能调控皮肤局部血管再生，改善皮肤血供，促进皮肤再生，从而能够修复 皮肤。除此之外，间充质干细胞移植后能够通过促进皮肤细胞的增殖、抑制细胞凋亡，从而 使皮肤能够再生。 间充质干细胞的获取过程包括以下步骤： 获取脐带，于无菌条件下去除动静脉及外膜，PBS清洗，剪成段，再次清洗去除血 液，然后处理成肉糜状，水浴消化后，加入基础培养基反复吹打，过滤，收集滤液离心，弃上 清，将沉淀的细胞接种于完全培养基中进行培养，次日首次换液，之后每2~3天换液一次； 待细胞融合，不完全消化后，进行传代纯化，获得第三代间充质干细胞即为本专利技术所需的间 充质干细胞，调整细胞浓度为（2~8) X IO7个/ml;当然也可以是将第三代间充质干细胞进 行完全消化后，继续传代培养获得的间充质干细胞； 其中，基础培养基为DMEM/F12培养基。 进一步地，本专利技术中的细胞因子为外源性细胞因子，其中包括成纤维细胞生长因 子、转化生长因子、表皮生长因子、纤维母细胞生长因子、血管内皮生长因子、血小板源生长 因子、类胰岛素生长因子、P物质等。 其中，转化生长因子可分为转化生长因子-α和转化生长因子-β，转化生长因子-α 在结构上与表皮生长因子相似，通过与表皮生长因子受体结合发挥作用，但需要转化生长 因子的协同作用才能诱导细胞不依赖性生长。转化生长因子主要分布于表皮基底层、 巨噬细胞、成纤维细胞、汗腺和毛囊上皮细胞等，其中，转化生长因子_β2在毛囊细胞内表达 明显，转化生长因子_β3则在角质细胞和血管内皮细胞胞浆中表达明显。转化生长因子_β可 以促进毛囊等皮肤辅助结构的形成，而转化生长因子_β3对角质细胞和内皮细胞的增殖具 有强烈的抑制作用。与转化生长因子_β2和转化生长因子_β3相比，转化生长因子-m与伤口 修复愈合的关系最为密切。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂，其特征在于，包括间充质干细胞和外源性细胞因子。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪卓，鲁菲，
申请(专利权)人：深圳爱生再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44