液质联用检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种液质联用法检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法，包括如下步骤：(1)含药血浆样品制备；(2)工作曲线样品的制备；(3)LC测定条件；(4)MS/MS条件：(5)采用内标法定量，以系列表儿茶素及表儿茶素巯代物在空白血浆的药物浓度为横坐标，表儿茶素及表儿茶素巯代物与内标物普萘洛尔的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，权重系数为1/x2，求得的直线回归方程，即为工作曲线，使用工作曲线,将含药血浆样品中的表儿茶素及表儿茶素巯代物的药物浓度计算出来。本发明专利技术的方法快速、专属、准确、灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药检测
，涉及一种检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法。
技术介绍
缩合鞣质具有抗氧化、抗病原微生物、抗炎、降血压、调血脂、降血糖等多方面的药理活性，近10年来研究发现缩合鞣质在抗肿瘤、抗HIV、抗风湿等方面有很好的应用前景，金荞麦缩合鞣质制成的威麦宁已在临床用作抗肿瘤药，乌药茎中寡聚缩合鞣质是抗HIV-1整合酶的主要活性成分，也是其抗炎、抗风湿活性的主要物质基础。缩合鞣质有效成分缩合单宁类化合物，其在血浆中不易被检测，目前尚无一种准确精密的方法来测定血浆中的缩和单宁类化合物的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种液质联用检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法。本专利技术的技术方案概述如下：一种液质联用法检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法，包括如下步骤：(1)含药血浆样品制备取服用含有缩合鞣质药物后的动物血浆50μL，加入10μL甲醇、20μL100ng/mL普萘洛尔溶液、50μL5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液质联用法检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法，其特征是包括如下步骤：(1)含药血浆样品制备取服用含有缩合鞣质药物后的动物血浆50μL，加入10μL甲醇、20μL 100ng/mL普萘洛尔溶液、50μL 50mg/mL盐酸巯乙胺溶液，涡流混匀后，60℃水浴20min，再加入50μL甲醇，涡流混匀后，离心，取上清50μL加入50μL体积浓度为50％的甲醇水溶液,供LC/MS/MS测定；所述普萘洛尔溶液的溶剂为体积浓度为50％的乙腈‑甲醇溶液；所述盐酸巯乙胺溶液的溶剂为浓盐酸和甲醇按体积比为1：9配制而成。(2)工作曲线样品的制备①标准系列溶液的配制取表儿茶素和表儿茶素巯代物的标准品储备...

【技术特征摘要】
1.一种液质联用法检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法，其特征是包括如下
步骤：
(1)含药血浆样品制备
取服用含有缩合鞣质药物后的动物血浆50μL，加入10μL甲醇、20μL100ng/mL普
萘洛尔溶液、50μL50mg/mL盐酸巯乙胺溶液，涡流混匀后，60℃水浴20min，再加入50μL
甲醇，涡流混匀后，离心，取上清50μL加入50μL体积浓度为50％的甲醇水溶液,供LC/MS/MS
测定；所述普萘洛尔溶液的溶剂为体积浓度为50％的乙腈-甲醇溶液；所述盐酸巯乙胺溶液的
溶剂为浓盐酸和甲醇按体积比为1：9配制而成。
(2)工作曲线样品的制备
①标准系列溶液的配制取表儿茶素和表儿茶素巯代物的标准品储备液母液，用甲醇配
置成表儿茶素和表儿茶素巯代物的浓度均为1mg/mL的储备液，再用甲醇分别稀释，得到儿
茶素和表儿茶素巯代物的浓度均为50、100、250、500、1000、2500，5000和10000ng/mL；
②取8份空白血浆50μL，分别加入步骤①配得的各个表儿茶素和表儿茶素巯代物的甲
醇溶液10μL，配制成相当于表儿茶素和表儿茶素巯代物在血浆中的浓度为10、20、50、100、
200、500，1000和2000ng/mL的样品，再分别加入20μL100ng/mL普萘洛尔溶液、50μL
50mg/mL盐酸巯乙胺溶液，涡流混匀后，60℃水浴20min，再加入50μL甲醇，涡流混匀后，
离心，取上清50μL加入50μL体积浓度为50％的甲醇水溶液,供LC/MS/MS测定；所述普萘
洛尔溶液的溶剂为体积浓度为50％的乙腈-甲醇溶液；所述盐酸巯乙胺溶液的溶剂为浓盐酸和
甲醇按体积比为1：9配制而成。
(3)LC测定条件

【专利技术属性】
技术研发人员：付淑军，王鹏，戴玮，肖苏萍，常新全，左臣强，张守庆，赖东海，
申请(专利权)人：瀚盟测试科技天津有限公司，中国中药公司，
类型：发明
国别省市：天津;12