一种从茶叶中提取儿茶素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从茶叶中提取儿茶素的方法。先将茶叶粉碎成粉末，加入７５％乙醇，在恒温水浴中搅拌浸提，冷却过滤，滤液蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液；在茶多酚提取液中加入氯仿萃取除去咖啡因，得到水溶液；在所得的水溶液中再用乙酸乙酯萃取，除去水相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品；将儿茶素粗提品经过层析分离得到儿茶素纯品。本发明专利技术所选用的溶剂价廉、毒性小、易于回收、无残留，所得样品纯度高达到９５％以上，成本低、时间短、操作简单。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生化
，具体的说涉及。
技术介绍
茶叶中茶多酚类化合物含量高，而其中主要含有儿茶素类化合物。儿茶素具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗畸变、降血压、降血脂、降血糖、防辐射等多种保健功能，社会对儿茶素的需求量很大，虽然儿茶素的提取方法多种多样，但其提取分离纯化成本均较高，使得儿茶素纯品的价格昂贵，且订购时间长，限制了其在医药、日用化工、食品油脂工业领域和实验室研究中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有儿茶素提取方法成本高的问题，提供一种新的从茶叶中提取儿茶素的方法，本专利技术的提取方法所选用的溶剂价廉，毒性小，易于回收，无残留，所得样品纯度高、成本低，提取时间短、操作简单。本专利技术的从茶叶中提取儿茶素的方法，具体如下所示先将茶叶粉碎成粉末，加入75％乙醇，在80～90℃的恒温水浴中搅拌浸提，冷却后过滤，滤液蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液；在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液；在所得的水溶液中再用等量乙酸乙酯萃取5次，除去水相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品；将儿茶素粗提品经过层析分离得到儿茶素纯品。上述层析分离具体步骤如下所示将儿茶素粗提品溶于蒸馏水中配成质量百分数为20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份；对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮；将经浓缩除去丙酮后的溶液，加入甲醇和水的体积比为1∶1溶液的溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25，用100倍的80％甲醇水溶液作为洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。上述的在80～90℃的恒温水浴中搅拌浸提的时间为60分钟。本专利技术的有益效果本专利技术应用多次萃取、二次柱层析的方法连续提取分离得到三种儿茶素单体，选用的溶剂价廉，毒性小，易于回收，无残留，所得样品纯度高达到95％以上、成本低、时间短、操作简单。具体实施例方式实施例1将绿茶叶子分选除杂，用粉碎机粉碎，取100g，加入1000ml的75％乙醇，在85℃的恒温水浴中，提取三次。第一次提取(固液比为1∶10)，浸提60分钟；滤渣再提取三次(固液比为1∶3)，每次30分钟，将三次提取液合并，用抽滤方法过滤，蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液。滤渣可作饲料。在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液。在所得的水溶液中再用等量的乙酸乙酯反复萃取5次，最后除去水相，合并酯相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品。柱层析将儿茶素粗提品重新溶于蒸馏水中配成20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份。对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮。将经浓缩除去丙酮后的溶液，加甲醇/水(1∶1)溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，用100倍的80％甲醇/水洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。将单体儿茶素冷冻干燥后，分别得儿茶素EGCG、GCG、ECG单体纯品。将干燥后的各单体儿茶素粉碎，得EGCG、GCG、ECG单体儿茶素纯品分别为3.1g、2.1g、0.5g，装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达95％以上。实施例2将茶叶鲜叶在60℃下烘干后，分选除杂，用粉碎机粉碎，取100g，加入1000ml的75％乙醇，在85℃的恒温水浴中，提取三次。第一次提取(固液比为1∶10)，浸提60分钟；滤渣再提取三次(固液比为1∶3)，每次30分钟，将三次提取液合并，用抽滤方法过滤，蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚乙醇浓缩提取液。滤渣可作饲料。在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液。氯仿萃取液可用于提取咖啡因。在所得的水溶液中再用等量的乙酸乙酯反复萃取5次，最后除去水相，合并酯相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品。柱层析将冷冻干燥后得儿茶素粗提品重新溶于蒸馏水中配成20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份。对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮。将经浓缩除去丙酮后的溶液，加甲醇/水(1∶1)溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，用100倍的80％甲醇/水洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。将单体儿茶素冷冻干燥后，分别得儿茶素EGCG、GCG、ECG单体纯品。将干燥后的各单体儿茶素粉碎，得EGCG、GCG、ECG单体儿茶素纯品分别为2.6g、1.8g、0.6g，装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达95％以上。实施例3取茶多酚总含量为85％以上的茶叶提取物25g，加入250ml的75％乙醇，在85℃的恒温水浴中，提取三次。第一次提取(固液比为1∶10)，浸提30分钟；滤渣再提取三次(固液比为1∶3)，每次20分钟，将三次提取液合并，用抽滤方法过滤，蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚乙醇浓缩提取液。在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液。氯仿萃取液可用于提取咖啡因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从茶叶中提取儿茶素的方法，其特征在于先将茶叶粉碎成粉末，加入７５％乙醇，在８０～９０℃的恒温水浴中搅拌浸提，冷却后过滤，滤液蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液；在茶多酚提取液中加入氯仿萃取除去咖啡因，得到水溶液；在所得的水溶液中再用乙酸乙酯萃取，除去水相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品；将儿茶素粗提品经过层析分离得到儿茶素纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗一帆，赵超艺，郭振飞，许旋，凌彩金，
申请(专利权)人：中山大学，广东省农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]