抗RSPO2和/或抗RSPO3抗体及其用途制造技术

本文中提供的是抗RSPO抗体(特别是抗RSPO2抗体和/或抗RSPO3抗体)及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对相关申请的交叉引用本申请依据35U.S.C.§119要求2013年10月18日提交的美国临时申请No.61/893,141和2014年9月26日提交的美国临时申请No.62/056,324的权益，据此通过述及完整收录其内容。序列表本申请含有序列表，已经经EFS-Web提交且据此通过述及将其完整收录。所述ASCII拷贝(在2014年10月14日创建)命名为P5719R1-WO_SequenceListing.txt，并且大小为124950字节。专利
本文中提供了抗RSPO抗体(特别是抗RSPO2抗体和/或抗RSPO3抗体)及其使用方法。专利技术背景R-spondin(RSPO)家族是一小组，四种分泌型蛋白质(RSPO1至RSPO4)，在脊椎动物胚胎和成体中广泛表达。通过强烈增强Wnt途径激活，RSPO具有发育和干细胞生长中的多效功能(Kazanskayaetal.，Dev.Cell7：525-534(2004)；Kimetal.，CellCycle5：23-26(2006)；WO2005/040418)。哺乳动物RSPO1至RSPO4分享40％-60％氨基酸序列同一性，而且由一个信号肽，两个相邻的弗林蛋白酶样富半胱氨酸域(FU-CRD)，接着是一个血小板反应蛋白型I重复(TSR)域，和一个带正电荷的C端区组成。两个FU-CRD对于促进Wnt/β-联蛋白信号传导是必要且充分的(Kazanskayaetal.，Dev.Cell7：525-534(2004)；WO2005/040418)。LGR4(含富亮氨酸重复[LRR]的G蛋白偶联受体[GPCR]4)，LGR5，和LGR6(Hsuetal.，Mol.Endocrinol.12：1830-1845(1998)；Hsuetal.，Mol.Endocinol.14：1257-1271(2000))是RSPO的受体。LGR4/5/6受体的一项共同特征是它们在独特类型的成体干细胞中的表达。LGR5早已描述为Wnt依赖性隔室(包括小肠，结肠，胃，和毛囊)中的驻留干细胞的一种标志物(BarkerandClevers，Gastroenterology138：1681-1696(2010)；Seshagirietal.，Nature488：660-664(2012))。LGR6还充当表皮中的多效干细胞的一种标志物(Snippertetal.，Science327：1385-1389(2010))。LGR4在正在增殖的细胞中广泛表达(VanSchooreetal.，HistochemCellBiol.124：35-50(2005))，而且它的敲除小鼠显示许多器官(包括骨，肾，睾丸，皮肤，和胆囊)中的发育缺陷(Mustataetal.，EMBORep12：558-564(2011))。LGR4/5/6受体具有胞外域中17个LRR的中央排列，N和C端二者侧翼为富半胱氨酸序列，之后是7个跨膜螺旋，而且胞外域对于与RSPO的高亲和力结合是必要且充分的(deLauetal.，GenomeBiol.13：242(2011)；Wangetal.，Genes&Dev.27：1339-1344(2013))。LGR4/5/6受体可以在RSPO识别后在物理上与低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(LRP5/6)相互作用，并且由此RSPO和Wnt配体一起作用来激活Wnt/β-联蛋白信号传导(deLauetal.，GenomeBiol.13：242(2011)；Carmonetal.，ProcNatlAcadSci108：11452-11457(2012))。通过稳定Frizzled和LRP5/6受体，RSPO还有能力促进Wnt/β-联蛋白信号传导(Haoetal.，Nature485：195-200(2012))。锌和RING指3(ZNRF3)及其同系物RING指43(RNF43)是跨膜E3遍在蛋白连接酶，它促进细胞表面上的Frizzled和LRP6受体周转(Haoetal.，Nature485：195-200(2012)；Kooetal.，Nature488：665-669(2012))。通过与LGR4/5/6和ZNRF3/RNF43的胞外域相互作用，RSPO可诱导自膜清除ZNRF3，这稳定Frizzled和LRP6受体以增强Wnt/β-联蛋白信号传导(Haoetal.，Nature485：195-200(2012))。通过述及而完整收录本文中引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物。专利技术概述本专利技术提供抗RSPO抗体(特别是结合RSPO2，RSPO3，和/或RSPO2和RSPO3二者的抗体)及其使用方法。本文中提供的是结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体抑制RSPO2与跨膜E3遍在蛋白酶的相互作用。在一些实施方案中，该跨膜E3遍在蛋白酶为ZNRF3和/或RNF43。在一些实施方案中，该抗体不抑制RSPO2与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项或多项的相互作用(例如增强RSPO2与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项或多项的相互作用)。例如，本文中提供的是结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体包含(a)轻链可变域(VL)，该VL包含(i)包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的高变区-L1(HVR-L1)，(ii)包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的HVR-L3，和(b)重链可变域(VH)，该VH包含(i)包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的HVR-H3。在一些实施方案中，该抗体包含(a)SEQIDNO：105的VL序列和SEQIDNO：106的VH序列。在一些实施方案中，该抗体抑制RSPO2与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项或多项的相互作用。例如，本文中提供的是结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体包含：(a)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：60的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：61的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH包含(i)包含SEQIDNO：62的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：63的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：64的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL，该VL包含(i)包含SE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体抑制RSPO2与跨膜E3遍在蛋白酶(ubiquitinase)的相互作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.18 US 61/893,141;2014.09.26 US 62/056,3241.一种结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体抑制RSPO2与跨膜E3遍在蛋白酶
(ubiquitinase)的相互作用。
2.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体不抑制RSPO2与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项
或多项的相互作用(例如增强RSPO2与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项或多项的相互作用)。
3.一种结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体包含(a)轻链可变域(VL)，该VL包含(i)包
含SEQIDNO：53的氨基酸序列的高变区-L1(HVR-L1)，(ii)包含SEQIDNO：54的氨基酸序
列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的HVR-L3，和(b)重链可变域(VH)，该
VH包含(i)包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：57的氨基酸序
列的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的HVR-H3。
4.权利要求3的分离的抗体，其中该抗体包含(a)SEQIDNO：105的VL序列和SEQID
NO：106的VH序列。
5.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体抑制RSPO2与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项或
多项的相互作用。
6.一种结合RSPO2的分离的抗体，其中该抗体包含：
(a)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
60的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：61的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：62的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：63的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：64的氨基酸序列的HVR-H3；
(b)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：65的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
66的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：67的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：68的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：69的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：70的氨基酸序列的HVR-H3；或
(c)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：71的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
72的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：73的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：74的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：75的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：76的氨基酸序列的HVR-H3。
7.权利要求6的分离的抗体，其中该抗体包含
(a)SEQIDNO：107的VL序列和SEQIDNO：108的VH序列；
(b)SEQIDNO：109的VL序列和SEQIDNO：110的VH序列；或
(c)SEQIDNO：111的VL序列和SEQIDNO：112的VH序列。
8.一种结合RSPO3的分离的抗体，其中该抗体抑制RSPO3与跨膜E3遍在蛋白酶的相互作
用。
9.权利要求8的分离的抗体，其中该抗体抑制RSPO3与LGR4，LGR5，和/或LGR6中一项或
多项的相互作用。
10.一种结合RSPO3的分离的抗体，其中该抗体包含：
(a)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：5的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：6
的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：7的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH包含
(i)包含SEQIDNO：8的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：9的氨基酸序列的HVR-
H2，和(iii)包含SEQIDNO：10的氨基酸序列的HVR-H3；
(b)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：11的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
12的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：13的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：14的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：15的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：16的氨基酸序列的HVR-H3；
(c)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：17的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
18的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：19的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：20的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：21的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：22的氨基酸序列的HVR-H3；
(d)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：23的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
24的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：27的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的HVR-H3；
(e)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
30的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：33的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的HVR-H3；
(f)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
36的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：39的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的HVR-H3；
(g)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
42的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：45的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的HVR-H3；
(h)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：23的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
24的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：27的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：188的氨基酸序列的HVR-H3；或
(i)VL，该VL包含(i)包含SEQIDNO：23的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO：
24的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的HVR-L3；和VH，该VH
包含(i)包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO：27的氨基酸序列
的HVR-H2，和(iii)包含SEQIDNO：189的氨基酸序列的HVR-H3。
11.权利要求10的分离的抗体，其中该抗体包含
(a)SEQIDNO：89的VL序列和SEQIDNO：90的VH序列；
(b)SEQIDNO：91的VL序列和SEQIDNO：92的VH序列；
(c)SEQIDNO：93的VL序列和SEQIDNO：94的VH序列；
(d)SEQIDNO：95的VL序列和SEQIDNO：96的VH序列；
(e)SEQIDNO：97的VL序列和SEQIDNO：98的VH序列；
(f)SEQIDNO：99的VL序列和SEQIDNO：100的VH序列；
(g)SEQIDNO：101的VL序列和SEQIDNO：102的VH序列；
(h)SEQIDNO：190的VL序列和SEQIDNO：191的VH序列；
(i)SEQIDNO：192的VL序列和SEQIDNO：193的VH序列；
(j)SEQIDNO：194的VL序列和SEQIDNO：195的VH序列；
(k)SEQIDNO：196的VL序列和SEQIDNO：197的VH序列；
(l)SEQIDNO：198的VL序列和SEQIDNO：199的VH序列；
(m)SEQIDNO：200的VL序列和SEQIDNO：201的VH序列；
(n)SEQIDNO：202的VL序列和SEQIDNO：...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·斯托姆，F·J·德索瓦热，J·M·默里，C·L·诺兰，Y·吴，C·谭，JA·弘戈，Y·陈，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH