一种血小板生成素或其变体或衍生物的纯化方法技术

本发明专利技术属生物制药领域，涉及一种血小板生成素或其变体或衍生物的纯化方法，其包括至少一个应用阴离子交换的柱层析步骤，具体包括下列步骤：(1)将部分纯化后或未纯化的血小板生成素或其变体或衍生物与含有季胺基或二乙氨乙基基团的阴离子交换层析填料的层析柱结合；(2)先用含有NaCl、低pH和低电导率的尿素溶液冲洗层析柱来洗脱杂蛋白；(3)再用高pH和高电导率的缓冲溶液冲洗层析柱，由此将血小板生成素从层析柱上分离下来。阴离子交换层析经含有NaCl、低pH和低电导率的尿素溶液洗脱后，杂蛋白明显减少，可有效提高中间体纯度，后续步骤综合收率提高明显。采用本发明专利技术的纯化方法纯化的血小板生成素，具有较高的纯度、活性及稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药领域，尤其涉及糖基化蛋白的纯化，特别涉及用低pH和低电 导率的尿素溶液洗脱制备糖基化蛋白，例如血小板生成素或其变体或衍生物的方法。
技术介绍
血小板生成素（thrombopoietin，ΤΡ0)是主要由肝脏和由骨髓调节血小板生成的 肾脏产生的糖蛋白激素。它刺激巨核细胞的产生和分化，使骨髓细胞分裂为大量的血小板， 从而升高血小板数目。 TPO分子由332个氨基酸组成。TPO分子内有两对二硫键，6个N-键糖基化位点，N连 接糖基化出现在176、185、213、234、319、327位的天冬酰胺残基<^?0的变体包括了?01-163， 丁?01-232，了?01-1514端缺失1-6个氨基酸的了?0，了?0的衍生物包括聚乙醇化的了?0等。参见 中国专利申请No. 95190305.5、公开号CNl 131438A，在此一并引入本申请，作为申请文件的 一部分内容。 真核细胞产生的许多细胞表面蛋白和分泌蛋白，都被一个或更多寡糖基团修饰。 这种称为糖基化的修饰能强烈影响蛋白质的理化性质，对蛋白质的稳定性、分泌和亚细胞 定位也会起重要作用。正确的糖基化有时是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血小板生成素或其变体或衍生物的纯化方法，其特征在于：该方法包括至少一个应用阴离子交换的柱层析步骤，其中该步骤包括低pH、低电导率的尿素溶液洗脱过程。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：娄竞，张波，苏冬梅，靳征，
申请(专利权)人：沈阳三生制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21