一株赖氨酸芽孢杆菌及其应用、含有该赖氨酸芽孢杆菌的脱胶助剂及其制备方法技术

一株赖氨酸芽孢杆菌及其应用、含有该赖氨酸芽孢杆菌的脱胶助剂及其制备方法，属于大麻脱胶的技术领域。本发明专利技术为了解决目前大麻雨露脱胶中耗时长、纤维损伤大等问题。本发明专利技术赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)Z39ay1保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年12月20日，保藏编号为CGMCC No.5618。方法：一、挑取赖氨酸芽孢杆菌dqly-2及束状刺盘孢分别培养得一级种子液；二、将一级种子液分别培养得两种发酵液；三、将两种发酵液混合，加入5～8倍体积自来水。本发明专利技术用于大麻雨露脱胶。本发明专利技术具有价格低廉，起效快，无污染等优点，加快大麻雨露脱胶进程，提高大麻纤维质量及产量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于大麻脱胶的
;具体涉及一株赖氨酸芽孢杆菌及其应用、含有 该赖氨酸芽孢杆菌的脱胶助剂及其制备方法。
技术介绍
大麻又称为线麻、火麻、汉麻等，属大麻科大麻属一年生草本植物，为我国古老的 纤维作物之一。大麻是重要的纤维作物，其纤维性能优异，具有卫生耐用、抗菌防臭、吸汗透 气、防静电及防紫外线等功能，被广泛应用于服装、汽车、建筑等行业中，是一种环保型的纤 维原料，有巨大的应用前景。新鲜大麻茎需经过脱胶获得纤维后方可进行下一步加工，雨露 怄麻是指大麻收割后，平铺在地上自然环境下经过雨露浸润，一些微生物开始在麻茎上生 长使韧皮部与木质部之间失去粘连而分开，从而释放大麻纤维。但是，天然雨露怄麻耗时较 长，生产效率低，易损伤大麻纤维的质量，这在一定程度上影响了麻类产业的发展。另外，天 然雨露怄麻易受环境及气候的制约，怄麻时间越长气温越低，易出现怄麻不足或无法完成 的情况，致使出麻率低，影响经济效益。因此缩短天然雨露怄麻周期，提高出麻率十分重要。
技术实现思路
本专利技术要解决目前天然雨露怄麻耗时较长，生产效率低，易损伤大麻纤维质量等 问题;而提供了一株赖氨酸芽孢杆菌及其应用、含有该赖氨酸芽孢杆菌的脱胶助剂及其制 备方法。本专利技术缩短大麻雨露脱胶周期，价格低廉，起效快，无污染，提高纤维质量，用于加 快大麻雨露脱胶进程、提高大麻纤维质量及产量，促进相关产业的发展。 本专利技术中的一株赖氨酸芽孢杆菌为赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus sp.) Z39ayl保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年12月20日，保藏编号为CGMCC No.5618。 本专利技术中细菌Z39ayl，从大庆石化废水中分离获得，革兰氏阴性好氧细菌，菌落圆 形乳白色，表面湿润，中间凸起，四周放射状。能发酵蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和乳糖;柠檬酸盐 试验、过氧化氢酶试验、淀粉水解试验、明胶液化试验，显阳性反应。根据《伯杰细菌鉴定手 册》和菌株生理生化生物学特性鉴定为赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus sp.)。果胶是 大麻胶的主要成份，大麻脱胶主要指果胶的降解，本专利技术中赖氨酸芽孢杆菌 (Lysinibacillus sp. )Z39ayl有产果胶酶活性，培养24h果胶酶活性达到170U/mL。加入大 麻脱胶助剂中有助缩短大麻雨露怄麻时间，提高大麻纤维质量。 本专利技术赖氨酸芽孢杆菌(1^8；[11；^3(^11118 8口.）239371的分离方法按以下步骤进 行： 一、硫化物降解菌的富集培养 取废水10mL，接入200ml初筛培养基中，30°C，培养48h静置30分钟。取上清液40mL， 倒入40ml初筛培养基中，加入似23'9出0(0.248/1)1.21111，以后每隔4811重复上述步骤，使培 养液中Na2S·9H20的含量最后增加至4.8g，然后继续培养三天，静置30min，吸取上清25ml，转 入25ml新鲜的初筛培养基(含4.8g Na2S'9H20)30°C160r/min振荡培养24h，从中取出20ml加 到200ml新鲜的初筛培养基中，30°C160r/min振荡培养24h，得混合菌液。采用碘量法测定培 养液中[S 21，并将[S21降解率高的菌液用于硫化物耐受敏感菌的初步分离。 二、硫化物降解菌的初筛及复筛 取lmL步骤一获得的混合菌液1 .OmL，注入99.0mL装有玻璃珠的无菌生理盐水中， 30°C振荡30min，并按梯度稀释后取0.1 mL，分别涂布于复筛培养基平板上30°C培养48h，3 个重复。挑取生长快速的不同形态独立菌落，划线纯化，编号培养后进行下一步硫化物降解 能力研究。三、硫化物降解菌对硫化钠降解能力的测定本实验的负二价硫离子测定采用国家环保总局标准HJ/T 60-2000"水质硫化物 的测定碘量法"，此法适用于含硫化物0.4 mg/L以上的水和废水的测定。取硫化物降解效果 最好的菌株，即为本专利技术赖氨酸芽孢杆菌Z39ay 1。初筛培养基配方（L):蛋白胨15.0g、牛肉膏3.0g、酵母膏3.0g、KH2P〇42.0g、 NaC13 · Og、Na2S2〇3lO · Og、Na2HP〇42 · 0g、Na2S·9H20( 1 · 2~4 · 8g)、KC1 0 · 5g、MgS〇4〇 · 5g。（pH = 7.0,于121°C，0.1 IMpa灭菌30min。固体培养基加琼脂粉10.0 g) 复筛培养基配方(L):牛肉膏 2.0g、蛋白胨 10.0g、NaCl 5.0g、Na2S'9H20 1.6g。（调 pH值7.0到7.2之间，于121°C，0.1 IMpa灭菌30min，固体培养基加琼脂粉10.0 g)对分离得到 的赖氨酸芽孢杆菌Z39ayl进行分子鉴定，按以下步骤进行： 采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株DNA，采用以下引物，以菌株DNA为模板进 行PCR扩增，引物序列如下： 上游引物F(5-AGAGITTGATCCTGGCTCAG-3)， PCR反应条件：94°C变性3min后进入循环；94°C变性45s ; 55°C退火45s，72°C延伸 9〇8,30个循环后72°(3终延伸511^11。 PCR产物电泳结果如图1所示。测序工作委托上海生工生物工程技术有限公司完 成。 赖氨酸芽孢杆菌Z39ayl的16SrDNA序列长度为1439bp测序结果与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比对，BLAST对比结果如表1，构建的系统发育树如图2所示，以确定菌 株的种属关系。 同源性分析结果表明，该序列与赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus sp)内各种 之间有极高的同源性，相似度可达1〇〇%。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定 结果确定赖氨酸芽孢杆菌Z39ayl属于赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus sp)。 表1 BLAST对比结果 步骤一、挑取权利要求1所述的赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp. )Z39ayl接 种到100mL牛肉膏蛋白胨培养基中，在120r/min、28°C条件下培养16~24h，获得一级种子液 1，将束状刺盘孢(Colletotrichum dematium)接种到100mL液体马铃薯葡萄糖培养基中，在 28°C条件下静止培养4~5d，获得一级种子液2。步骤二、将步骤一获得的一级种子液1，按体积百分含量0.5%~1.0%的接种量加 入到牛肉膏蛋白胨发酵培养基中，于120~140r/min、28°C培养24~48h，得发酵液1;将步骤 一获得的一级种子液2，按体积百分含量1.0 %~2.0 %的接种量加入到发酵培养基中，于28 °C，静止培养4~5d，得发酵液2;步骤三、将步骤二获得的发酵液1和发酵液2按体积比1:1~1.5比例混合，得混合 物，向混合物中加入5~8倍(v/v)自来水，混合均匀后即得到大麻雨露脱胶助剂。步骤二中制备发酵液2的发酵培养基的配方为:蛋白胨5g/L，葡萄糖20g/L，硝酸铵 lg/L，七水硫酸镁0.5g/L，磷酸氢二钾lg/L，加蒸馏水定容至1L，pH为7.0。 本专利技术可采用蔗糖或可溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株赖氨酸芽孢杆菌，其特征在于该菌株为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)Z39ay1保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年12月20日，保藏编号为CGMCC No.5618。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨庆丽，姬妍茹，刘宇峰，孙宇峰，夏尊民，石杰，李秋芝，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院大庆分院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23