本发明专利技术公开了一种利用紫外分光光度法测定草豆蔻主要活性成分含量的方法，该方法利用超声波作为辅助工具，包括取样、样品制备、溶剂超声波辅助浸提、紫外检测、主要活性成分含量的计算等步骤。能够完全快速的提取草豆蔻主要活性成分并加以测定。该方法应用草豆蔻的紫外光谱测试体系，实现了对草豆蔻的主要活性成分山姜素和小豆蔻明浓度的快速定量检测。该方法操作简单，测定结果准确，不易受到其它物质成分的干扰。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及测定草豆蔻主要活性成分含量的方法，属于分析化学领域，特别涉及 紫外光谱法测定草豆蔻主要活性成分含量的相关技术。
技术介绍
草豆寇为姜科（Zingiberaceae)山姜属植物草豆蔻（Alpiniakatsumadai Hayata)的干燥种子团，为较常用中药，主产于广东、广西和云南等地，具有燥湿，健脾， 温胃止呕的功能，主治寒湿内阻，肮腹胀满冷痛，暖气呕逆，不思饮食等病症。草豆蔻是 傣药品种之一，根茎可治因风湿引起的各种酸痛。草豆蔻的提取物具有明显的抗氧化性作 用。 草豆蔻的成分主要含挥发油与黄酮类成分，山姜素和小豆蔻明是其 的有效成分。山姜素，分子式：C16H1404。化学名称：7-羟基-5甲氧基二氢黄酮 (7-hydroxy-5_methoxy-flavanone)，小豆蔻明，分子式：C16H1404。化学名称：2'，4' -二轻 基-6' -甲氧基查耳酮（2'，4' -dihydroxy-6'methoxy-chalcone)。而目前常米用于测定 草豆蔻主要成分山姜素和小豆蔻明含量的技术方法为：高效液相色谱，薄层色谱法和胶束 电动毛细管色谱法。这几种方法中，高效液相色谱法操作条件不易控制且较繁琐，时间过 长。薄层色谱法样品用量较大，分离手续麻烦，分离时间较长，并可能有杂质干扰。而胶束 电动毛细管色谱法容易产生气泡，柱子易断，检测灵敏度低，填料种类有限等。为了解决这 些问题，就必须改善现有的技术，使其具备操作简单，准确快速可行的方法。并且在将草豆 蔻制成现代化中药制剂的生产过程中，快速准确的测定其浓度是非常重要的一个步骤，所 以本专利技术提供的方法就可以快速的完成这个检测任务。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对以上现有技术的不足，提供一种方法简单、准确性高，易操 作的紫外光谱法测定草豆蔻主要活性成分山姜素和小豆蔻明的含量测定的方法。 本专利技术的技术方案是： 一种，包括标准样品溶液的 制备，标准曲线线性回归方程的获得，待测样品的制备，紫外检测及浓度的计算，所述的待 测样品的制备，紫外检测及浓度的计算包括如下步骤： a. 待测样品的制备：将草豆蔻样品烘干，分别用粉碎机粉碎后过目筛，精确称取草豆 蔻粉末5g，置于试剂瓶中加95%乙醇定容100mL，超声溶解，再放置过夜，过滤，取续滤液过 微孔滤膜，最后的滤液分装备用； b. 待测样品的紫外检测：采用紫外分光光度法测定草豆蔻溶于95%乙醇的样品提取 液在286nm和346nm处的吸光度； c. 待测样品浓度的计算：将"b"步骤测得的草豆蔻样品溶液分别在286nm和346nm处 的吸光度平均值作为山姜素和小豆蔻明含量的测定值，代入标准曲线线性回归方程，计算 出待测样品中山姜素和小豆蔻明的含量。 待测样品溶液用紫外分光光度计测定样品在286nm和346nm处的吸光度，取平均 值代入山姜素和小豆蔻明的标准曲线方程求出回归值，即为样品溶液山姜素和小豆蔻明的 浓度C，草豆蔻样品中山姜素和小豆蔻明的含量为（CXV/W)X100%，其中V是草豆蔻粉 末加入95%乙醇定容的体积，W是待测草豆蔻样品的干重。 本专利技术方法中所诉的超声波作为辅助工具超声溶解即为将定容好的待测样品放 置于超声波仪中，超声消解30~50min。 本专利技术所述的标准样品溶液的制备包括以下步骤：用95%乙醇分别配制1. 0X10 3 mol吨1的山姜素和小豆蔻明标准溶液，再用95%乙醇分别稀释成多个不同浓度的标准样品 溶液，即山姜素与小豆蔻明的线性范围分别为1. 61~10. 8lPg.mL1和0. 82~8.llPg.mL、 配制呈浓度梯度的标准样品溶液。 所述的标准曲线线性回归方程的获得是将线性范围内的以95%乙醇作溶剂的山 姜素与小豆蔻明的浓度范围分别为1.61~10.SlPg.mL1和0. 82~8.llPg.mL1。配制的 多个不同浓度的标准样品溶液分别采用紫外分光光度法进行检测，检测波长为山姜素是 286nm，小豆蔻明是346nm，将所得的吸光度值及对应的浓度绘制标准曲线，并根据郎伯-比 尔定律A=kcb计算获得标准曲线回归方程 A:吸光度K:摩尔吸收系数 C:待测物质的浓度，单位可为g/L，mol/L B:吸收介质的厚度，一般以cm为单位。 本专利技术所述的待测物为姜科植物草豆蔻，所测的部位可以是茎，叶，根，果实皮和 种子等。所述的待测物优选海南白沙草豆蔻和霸王岭草豆蔻近成熟的干燥种子团，测定其 中的山姜素和小豆蔻明含量。并且根据紫外光谱的"吸收最大，干扰最小"测定原则，而山 姜素和小豆蔻明的最大紫外吸收波长相差达60nm，故可同时测定草豆蔻中山姜素和小豆蔻 明成分的含量。 山姜素和小豆蔻明属于黄酮类，具有以下结构式：山姜素 小豆蔻明。 本专利技术采用紫外分光光度法建立了一种操作简单的测定植物中主要成分含量的 方法。该方法不需要用到复杂的仪器设备、昂贵和有毒的药品，只需要常规的紫外分光光度 计和常规药品即可完成。 具体地，样品溶液的溶剂是水、乙醇、甲醇、异丙醇、正丁醇中的至少一种。 优选地，所述待测样品和标准样品溶液的溶剂是乙醇。 优选地，所述样品烘干温度为50 ~70°C。 优选地，所述样品烘干时间为4 ~6h。 优选地，所述过目筛粒度为40 ~60目。 优选地，所述样品超声溶解时间为30 ~50min。 优选地，所述微孔滤膜直径为0· 25~0· 45μm。 优选地，所述待测样品溶液原始浓度为5X10 2g/mL，紫外检测时稀释按与溶剂比 为 10μL:3mL。 优选地，所述标准溶液的浓度为1· 0X10 3mol/L。 优选地，所述山姜素标准溶液浓度梯度为0. 20X10 5mol/L~10. 0X10 5mol/L。 优选地，所述小豆蔻明标准溶液浓度梯度为0. 10X10 5mol/L~8. 0X10 5mol/L。 优选地，所述测定待测物吸光度时紫外波长为286±lnm和346±lnm〇 本专利技术提供的草豆蔻主要活性成分山姜素和小豆蔻明的含量测定方法的回收率 高，结果准确。实验结果表明回收率的范围在84. 28~117.41%。另外，本专利技术提供的方法 具有良好的精密度、稳定性和重复性。 精密度：准确移取样品溶液60μL，按紫外条件重复测定3次，得到相对标准偏差 RSD值分别为0. 42%、0. 29%，表明仪器的精密度良好。 稳定性：取同一样品溶液10μL，按紫外条件在24h内测定。白沙草豆蔻以95%乙 醇为溶剂的山姜素与小豆蔻明吸光度的RSD分别为0. 21%，0. 59%。霸王岭草豆蔻以95%乙 醇为溶剂的山姜素和小豆蔻明吸光度的RSD分别为0. 11%，0. 25%。结果表明样品溶液在24h 内稳定。 重现性：白沙草豆蔻以95%乙醇为溶剂的山姜素与小豆蔻明吸光度的RSD分别为 1. 91%，1. 75%。霸王岭草豆蔻以95%乙醇为溶剂的山姜素和小豆蔻明吸光度的RSD分别为 2. 46%，4. 70%。表明重现性好。【附图说明】： 图1为本专利技术实施例1山姜素标准溶液浓度与吸光度的线性关系图； 图2为本专利技术实施例2小豆蔻明标准溶液浓度与吸光度的线性关系图； 图3为本专利技术实施例3标准溶液与不同草豆蔻样品紫外光谱图；【具体实施方式】 以下通过具体实例进一步本文档来自技高网...
【技术保护点】
利用紫外分光光度法测定草豆蔻主要活性成分含量的方法，包括标准样品溶液的制备，标准曲线线性回归方程的获得、待测样品的制备、紫外检测及浓度计算，其特征在于所述的待测样品的制备、紫外检测及浓度计算包含如下步骤：a.待测样品的制备：将草豆蔻样品烘干，用粉碎机粉碎后过目筛，精确称取草豆蔻粉末5g,置于试剂瓶中加95%乙醇定容100mL，超声溶解，再放置过夜，过滤，取续滤液过微孔滤膜，最后的滤液分装备用；b.待测样品的紫外检测：采用紫外光谱法测定草豆蔻样品提取液在286nm和346nm处的吸光度；c.待测样品浓度的计算：将“b”步骤测得的草豆蔻样品溶液分别在286nm和346nm处的吸光度平均值作为山姜素和小豆蔻明含量的测定值，代入标准曲线线性回归方程，计算出待测样品中山姜素和小豆蔻明的含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何文英，陈昱学，吴秀丽，吴禄勇，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南;66
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