伯克霍尔德氏菌属的分离细菌菌株及其农药代谢物制造技术

本发明专利技术涉及伯克霍尔德氏菌属的分离细菌菌株及其农药代谢物。本发明专利技术提供一种伯克霍尔德氏菌的物种，其对脊椎动物无已知的致病性，但具有农药活性(如植物、昆虫、真菌、杂草和线虫)。本发明专利技术还提供源自所述物种的培养物的天然产物，以及使用所述天然产物来控制有害生物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是申请日为2011年2月24日、申请号为201180011161. 5、专利技术名称为"伯 克霍尔德氏菌属的分离细菌菌株及其农药代谢物"的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术提供一种伯克霍尔德氏菌（Burkholderia sp)的物种，其对脊椎动物如哺 乳动物、鱼类和鸟类无已知的致病性，但对植物、昆虫、真菌和线虫具有农药活性。本专利技术还 提供源自所述物种的培养物的天然产物，以及利用所述天然产物来控制双子叶、单子叶和 苔草杂草的萌发和生长，调节真菌的生长以及控制诸如昆虫和线虫的有害生物（pest)的 方法。
技术介绍
天然产物为微生物、植物或其他生物体产生的物质。微生物天然产物提供了丰 富的化学多样性来源，而且将天然产物用于药用目的历史悠久。一种这样的化合物为 FR901228,其分离自色杆菌属（Chromobacterium)，并且据发现可以用作抗菌剂和抗肿瘤剂 (参见，例如Ueda et al.，美国专利第7, 396, 665号）。 但微生物产生的次生代谢物据发现也可成功用于农业上的杂草和有害生物控制 (参见，例如 Nakajima et al. 1991 ;Duke et al.，2000 ;Lydon&Duke, 1999 ;Gerwick et al.，美国专利第7,393,812号）。微生物天然产物已成功开发为农业杀虫剂（参见，例如 Salama et al. 1981 !Thompson et al·，2000 ;Krieg et al. 1983)。有时候，这样的天然产 物与化学农药组合使用（参见，例如Gottlieb，美国专利第4, 808,207号）。 伯克霍尔德氏菌 伯克霍尔德氏菌属是蛋白菌（proteobacteria)的β -分支，包括生存于多种生态 位的多于40种物种（Compant et al.，2008)。伯克霍尔德氏菌属的细菌物种是广泛分布 于土壤和根际的生物体（Coenye and Vandamme, 2003 ;Parke and Gurian-Sherman, 2001) 〇 传统上，它们已知为植物病原体。洋葱伯克霍尔德氏菌（B. c印acia)是第一种发现并鉴 定导致洋葱疾病的病原体（Burkholder, 1950)。一些伯克霍尔德氏菌物种已经发展与 其植物宿主有益的相互作用（参见，例如Cabballero-Mellado et al·，2004, Chen et al.，2007)。还发现一些伯克霍尔德氏菌物种是可能的人病原体（参见，例如Cheng and Currie, 2005和Nierman et al.，2004)。此外，还发现一些伯克霍尔德氏菌物种具有 作为生物控制产品的潜力（参见，例如Burkhead et al·，1994 ;Knudsen et al·，1987; Jansiewicz et al·，1988 ;Gouge et al·，美国专利申请第 2003/0082147 号；Parke et al·，美国专利第 6, 077, 505 号；Casida et al·，美国专利第 6, 689, 357 号；Jeddeloh et al.，W02001055398 ;Zhang et al.，美国专利第7, 141，407号）。该属的一些物种有效地用 于生物修复以净化污染的土壤或地下水（参见，例如Leahy et al. 1996)。此外，还发现一 些伯克霍尔德氏菌物种分泌各种具有蛋白水解、脂质分解和溶血活性的胞外酶以及毒素、 抗生素和铁载体（参见，例如 Ludovic et al.，2007 ;Nagamatsu, 2001)。 噁唑、噻唑和吲哚 噁唑、噻唑和吲哚广泛分布于植物、藻类、海绵和微生物中。大量的天然产物包含 一个或多个五元噁唑、噻唑和吲哚核心/部分。这些天然产物表现出广谱的可证实的治疗 价值的生物活性。例如，博来霉素 A(Tomohisa et al.)是广泛使用抗癌药物，其引起DNA的 氧化降解，并且使用二噻唑部分以结合其靶DNA序列（Vanderwall et al.，1997)。枯草菌 肽（Ming et al.，2002)是含噻唑啉的肽抗生素，通过与C55-细菌萜醇焦磷酸酯的复合来 抑制细菌细胞壁新生物合成。Thiangazole (Kunze et al.，1993)包含一个噁唑和三个噻唑 啉的串联排列，并且表现出抗病毒活性（Jansen et al.，1992)。不过，其他含噁唑/噻唑的 天然产物如硫链丝菌肽（Anderson et al.，1970)和 GE2270A (Selva et al.，1997)抑制细 菌蛋白合成的翻译步骤。已经报导了多于1000种的来自微生物的具有吲哚骨架的生物碱。 三分之一的这些化合物是肽，质量超过500Da，其中吲哚是色氨酸衍生的。其余三分之二的 结构多样性更高，并且其生物活性似乎涵盖更大的范围，包括抗微生物、抗病毒、细胞毒性、 杀虫、抗血栓形成或酶抑制活性。
技术实现思路
本文提供一种非洋葱伯克霍尔德氏菌（non-Burkholderia cepacia)、非植物伯克 霍尔德氏菌（non-Burkholderia plantari)、非唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（non-Burkholderia gladioli)、伯克霍尔德氏菌的分离菌株，其具有以下特征： a.具有16S rRNA基因序列，其包含正向序列和反向序列，所述正向序列与SEQ ID N0:8、ll和12所示的序列具有至少99. 0%的相同性，所述反向序列与SEQ ID N0:9、10、 13-15所示的序列具有至少99. 0%的相同性； b.具有农药活性，尤其是除草、杀虫、杀真菌和杀线虫活性； c.产生至少一种选自以下的化合物： ⑴化合物，所述化合物具有以下性质：（a)通过液相色谱/质谱（LC/MS)测定的 分子量为约 525-555 ; (b) 1H NMR 值为 6. 22, 5. 81，5. 69, 5. 66, 5. 65, 4. 64, 4. 31，3. 93, 3. 22， 3. 21，3. 15, 3. 10, 2. 69, 2. 62, 2. 26, 2. 23. 1. 74, 1. 15, 1. 12, 1. 05, 1. 02 ; (c) 13C NMR 值为 172 .99, 172. 93, 169. 57, 169. 23, 167. 59, 130. 74, 130. 12, 129. 93, 128. 32, 73. 49, 62. 95, 59. 42 ,57. 73, 38. 39, 38. 00, 35. 49, 30. 90, 30. 36, 29. 26, 18. 59, 18. 38, 18. 09, 17. 93, 12. 51 ;并且 (c)利用水：乙腈（CH3CN)梯度，在反相C-18HPLC柱上进行的高压液相色谱（HPLC)的保留 时间为约10-15分钟； (ii)化合物，所述化合物具有噁唑基-吲哚结构，其包含至少1个吲哚部分、至少 1个噁唑部分、至少1个取代的烷基和至少1个羧酸酯基团；至少17个碳以及至少3个氧 和2个氮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种除草组合物，其包括伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)A396、NRRL登录号B‑50319的全细胞培养液、滤液或上清液。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：R·阿索卡，M·科伊武宁，P·马罗内，黄华章，A·L·科多瓦克雷罗斯，
申请(专利权)人：马罗内生物创新公司，
类型：发明
国别省市：美国;US