本发明专利技术公开了一种地枫皮的质量控制方法，具体是以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚作为指标性成分，采用高效液相色谱法对地枫皮中这些指标性成分进行分析从而实现对地枫皮质量的检测。本发明专利技术以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚作为指标性成分，利用高效液相色谱法建立对地枫皮质量的检测方法和质量鉴别方法，各成分含量检测结果准确，检测方法的精密度高、稳定性及重复性好，对保证药材的质量更为有效，能有效确保中药地枫皮质量的均一稳定。
【技术实现步骤摘要】
一种地枫皮的检测方法
本专利技术涉及一种地枫皮的检测方法，属于药物质量控制
技术介绍
中药地枫皮为八角属植物地枫皮IlliciumdifengpiK.I.BetK.I.M.的干燥树皮，为中国药典收录品种(原属壮药品种)，具有祛风除湿，行气止痛的疗效，在广西民间地枫皮主要用于治疗风湿关节炎、腰肌劳损和跌打损伤等症。该植物生长于石灰岩地区，是广西岩溶石山上一种特有中药材，属于国家Ⅱ级重点保护野生植物，自然分布于广西的西南部、中部和西北部的岩溶地区，其中以龙州、靖西、都安、马山分布最多。据文献报道，目前从地枫皮中分离得到的化学成分主要有苯丙素、木脂素、黄酮、酚酸、萜类、甾醇等结构类型，其中以苯丙素、木脂素和黄酮为主，并且这些类型化合物在药理实验中表现出较好的抗炎活性。鉴于民间用药疗效及现代物质基础和药理等方面的研究结果，已研制出多种以地枫皮为主药或辅以相关药材制成的制剂，如：风湿关节炎片、桂龙药膏、风寒双离拐片、风湿安泰片、追风舒经活血片等等，可见中药地枫皮在医药领域上具有广阔的应用前景。但地枫皮因特殊的生长环境持续恶化，连年无序采挖，致使地枫皮面临着严峻的资源问题，因此造成药材来源混乱，以次充好现象时有发生，以致曾出现“桂林地枫皮”的伪品，在临床使用中发生中毒事故。造成目前这种局面，主要原因是缺少药材质量控制方法和模式，在2010版《中国药典》对地枫皮也只作形态观察和化学鉴别的要求。为了解决这一问题，就是建立一种简单、快速、有效的分析方法，实现区别中药地枫皮的真伪和评价质量的好坏。中药的本质是多种化学物质按照特定的相对含量比例组合而成的复杂体系，若在规范的操作程序下，采用适当的提取分离方法将获得化学成分具体的，特征的和含量相对稳定的中药特征性化学成分总提取物，同时利用现代分析手段去表征其相对组成和结构，这种具有高度的重现性和特征性的分析方法非常适用于药材的质量控制。目前尚未见有通过高压液相色谱法对中药地枫皮多指标性成分的分析以实现其药材质量的检测方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种准确度高、稳定性和重复性好的地枫皮的检测方法。本专利技术提供的地枫皮的检测方法，是以槲皮苷、芦丁、S1-3[4-O-(2'-hydroxy-l'-hydroxymethylethyl)dihydroconiferylalcoholp-hydroxybenzoyl-glucoside]和厚朴酚作为指标性成分，采用高效液相色谱法对地枫皮中上述指标性成分进行分析从而实现对地枫皮质量的检测，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚为对照品，用体积分数为60～80％乙醇或体积分数为60～80％甲醇溶解配制得到混合对照品溶液，其中，混合对照品溶液中槲皮苷的浓度为2.00×10-2～6.00×10-1mg/ml，芦丁的浓度为6.60×10-3～1.98×10-1mg/ml，S1-3的浓度为4.10×10-3～1.23×10-1mg/ml，厚朴酚的浓度为6.00×10-3～1.80×10-1mg/ml；(2)供试品溶液的制备取地枫皮，粉碎，以体积分数为60～80％乙醇或体积分数为60～80％甲醇为提取溶剂进行提取，所述地枫皮与提取溶剂的用量比为：1g：35～45ml，提取完成后，冷却，当所得提取物的重量少于提取前地枫皮与提取溶剂的总重量时，补加提取溶剂直至重量刚好与提取前地枫皮与提取溶剂的总重量相等，过滤，得到供试品溶液；(3)色谱条件C18色谱柱，流速：0.5～1ml/min，柱温：20～30℃，波长：254nm或280nm，流动相由A液和B液组成，其中A液为乙腈或甲醇，B液为体积分数为0.1％甲酸水溶液或体积分数为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序如下：0min时，A液：B液＝5～10％：95～90％；30min时，A液：B液＝15～20％：85～80％；40min时，A液：B液＝20～25％：80～75％；65min时，A液：B液＝45～50％：55～50％；85min时，A液：B液＝75～80％：25～20％；(4)测定精密吸取一定量上述混合对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定。上述质量控制方法的步骤(1)中，优选采用体积分数为65～75％乙醇或体积分数为65～75％甲醇溶解配制得到混合对照品溶液，更优选采用用体积分数为70％乙醇或体积分数为70％甲醇溶解配制得到混合对照品溶液。上述质量控制方法的步骤(1)中，配制的混合对照品溶液中槲皮苷的浓度优选控制在8.00×10-2～4.00×10-1mg/ml，更优选为2.00×10-1mg/ml；芦丁的浓度优选控制在1.32×10-2～1.32×10-1mg/ml，更优选为6.60×10-2mg/ml；S1-3的浓度优选控制在8.20×10-3～6.56×10-2mg/ml，更优选为4.10×10-2mg/ml；厚朴酚的浓度优选控制在6.00×10-3～1.5×10-1mg/ml，更优选为7.20×10-2mg/ml。上述质量控制方法的步骤(2)中，提取溶剂优选为体积分数为65～75％乙醇或体积分数为65～75％甲醇，更优选为体积分数为70％乙醇或体积分数为70％甲醇。该步骤中的提取溶剂最好是与步骤(1)中配制混合对照品溶液的溶剂相同。上述质量控制方法的步骤(2)中，在对地枫皮提取时，提取的方式可以是现有技术中的常规提取方式，如浸提、加热提取、回流提取、超声提取等。优选采用超声提取(工作频率优选为30～100KHz)，提取的时间通常为0.5～2h，通常选择1h。上述质量控制方法的步骤(3)中，在梯度洗脱时，优选的洗脱程序如下：0min时，A液：B液＝10％：90％；30min时，A液：B液＝18％：82％；40min时，A液：B液＝24％：76％；65min时，A液：B液＝45％：55％；85min时，A液：B液＝75％：25％。上述质量控制方法的步骤(3)中，进样量根据需要确定，通常为10μL或20μL。按上述方法进行检测，测定结果中，地枫皮药材按干燥品计算，含槲皮苷不低于0.2％，含芦丁不低于0.018％，含S1-3不低于0.017％，含厚朴酚不低于0.007％。在上述研究的基础上，还可以进一步制定标准指纹图谱，之后将地枫皮待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，通过计算相似度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量来鉴别地枫皮的质量，其中待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱比对，其相似度应为0.88以上，通常为0.9～1.0。与现有技术相比，本专利技术以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚作为指标性成分，利用高效液相色谱法建立对地枫皮质量的检测方法和质量鉴别方法，各成分含量检测结果准确，检测方法的精密度高、稳定性及重复性好，对保证药材的质量更为有效，能有效确保中药地枫皮质量的均一稳定。以下是申请人确定最优色谱条件的实验部分：1.仪器、试剂药品：Agilent1200型高效液相色谱仪(真空在线脱气系统、四元泵、自动进样器、VWD检测器，美国安捷伦公司)；LC/MS-IT-TOFSystem质谱仪，(Shimadzu,Tokyo,Japan)；XS205型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海本文档来自技高网...
【技术保护点】
地枫皮的质量控制方法，其特征在于：以槲皮苷、芦丁、S1‑3和厚朴酚作为指标性成分，采用高效液相色谱法对地枫皮中这些指标性成分进行分析从而实现对地枫皮质量的检测，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备以槲皮苷、芦丁、S1‑3和厚朴酚为对照品，用体积分数为60～80％乙醇或体积分数为60～80％甲醇溶解配制得到混合对照品溶液，其中，混合对照品溶液中槲皮苷的浓度为2.00×10‑2～6.00×10‑1mg/ml，芦丁的浓度为6.60×10‑3～1.98×10‑1mg/ml，S1‑3的浓度为4.10×10‑3～1.23×10‑1mg/ml，厚朴酚的浓度为6.00×10‑3～1.80×10‑1mg/ml；(2)供试品溶液的制备取地枫皮，粉碎，以体积分数为60～80％乙醇或体积分数为60～80％甲醇为提取溶剂进行提取，所述地枫皮与提取溶剂的用量比为：1g：35～45ml，提取完成后，冷却，当所得提取物的重量少于提取前地枫皮与提取溶剂的总重量时，补加提取溶剂直至重量刚好与提取前地枫皮与提取溶剂的总重量相等，过滤，得到供试品溶液；(3)色谱条件C18色谱柱，流速：0.5～1ml/min，柱温：20～30℃，波长：254nm或280nm，流动相由A液和B液组成，其中A液为乙腈或甲醇，B液为体积分数为0.1％甲酸水溶液或体积分数为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序如下：0min时，A液：B液＝5～10％：95～90％；30min时，A液：B液＝15～20％：85～80％；40min时，A液：B液＝20～25％：80～75％；65min时，A液：B液＝45～50％：55～50％；85min时，A液：B液＝75～80％：25～20％；(4)测定精密吸取一定量上述混合对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定。...
【技术特征摘要】
1.一种地枫皮的检测方法，其特征在于：以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚作为指标性成分，采用高效液相色谱法对地枫皮中这些指标性成分进行分析从而实现对地枫皮质量的检测，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚为对照品，用体积分数为60～80％乙醇或体积分数为60～80％甲醇溶解配制得到混合对照品溶液，其中，混合对照品溶液中槲皮苷的浓度为2.00×10-2～6.00×10-1mg/ml，芦丁的浓度为6.60×10-3～1.98×10-1mg/ml，S1-3的浓度为4.10×10-3～1.23×10-1mg/ml，厚朴酚的浓度为6.00×10-3～1.80×10-1mg/ml；(2)供试品溶液的制备取地枫皮，粉碎，以体积分数为60～80％乙醇或体积分数为60～80％甲醇为提取溶剂进行提取，所述地枫皮与提取溶剂的用量比为：1g：35～45ml，提取完成后，冷却，当所得提取物的重量少于提取前地枫皮与提取溶剂的总重量时，补加提取溶剂直至重量刚好与提取前地枫皮与提取溶剂的总重量相等，过滤，得到供试品溶液；(3)色谱条件C18色谱柱，流速：0.5～1ml/min，柱温：20～30℃，波长：254nm或280nm，流动相由A液和B液组成，其中A液为乙腈或甲醇，B液为体积分数为0.1％甲酸水溶液或体积分数为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序如下：0min时，A液：B液＝5～10％：95～90％；30min时，A液：B液＝15～20％：85～80％；40min时，A液：B液＝20～25％：80～75％；65min时，A液：B液＝45～50％：55～50％；85min时，A液：B液＝75～80％：25～20％；(4)测定精密吸取一定量上述混合对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定。2.根据权利要求1所述的地枫皮的检测方法，其特征在于：步骤(1)...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘争红，宁德生，黄思思，李典鹏，唐辉，
申请(专利权)人：广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45
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