一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法和应用，使用合成的亲水性功能单体在水相中制备分子印迹聚合物。将聚合物用做柱层析填料装柱，然后用中药复方制剂提取液上柱，再用体积比10：1的环己烷/乙醇混合溶液淋洗，层析柱最后用醇洗脱，流出液为栀子苷及其结构类似物，其中所述醇为乙醇、异丙醇、正丙醇或正丁醇。本发明专利技术通过分子印迹-固相萃取柱的靶向分离富集特性，降低中药复杂基质影响，快速纯化、富集成方制剂中的栀子苷，为中药复方制剂质量控制建立了一种新的样品前处理方法，展现出良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法和应用
本专利技术属于分离分析
，具体涉及是一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法和应用。
技术介绍
栀子金花丸、清火栀麦丸、茵栀黄颗粒和清开灵颗粒等药剂具有清热解毒、凉血消肿等功效，这些制剂均收录在2015版中国药典中，是市场上较为畅销的中药复方制剂，对于这些制剂的质量把控十分重要。2015版中国药典明确规定将栀子苷作为上述四种制剂质量控制指标成分，以高效液相色谱法进行分析检测。众所周知，中药药材本身基质非常复杂，结构相类似的化合物更是繁多，而上述复方制剂由多味天然药材混制而成，基质更为复杂，分离纯化较为困难，若能以高选择性填料对其提取液进行前处理，降低基质影响，建立新型的分析技术，将极利于其质量把控。分子印迹技术能够制备“预构化”的分子印迹聚合物(MIPs)，MIPs对于目标分子具有特异识别性。因MIPs材料极高的选择性及卓越的分子识别性能，很快在固相萃取、手性拆分、生物传感器等方面得到了广泛的应用。分子印迹-固相萃取技术将MIPs用作固相萃取填料从样品中纯化、富集目标分子及其结构类似物，能够克服分析过程中因基质复杂所带来的内源性干扰难题，在中药及其制剂质量控制方向展现出极大应用前景。Hu等首次实现了直接从中药岑树皮水提物中进行有效成分七叶亭的固相萃取。何江川等以NIPA作为温度响应性单体,制备了热敏性甘草酸印迹凝胶,可以富集水溶液中的甘草酸,分配系数约为非模板聚合水凝胶的11倍。分子印迹对于在天然产物中含量低、药效高的成分的鉴定分析和分离纯化提供了方法借鉴,但是其特异选择性有待提高。传统的分子印迹聚合物具有机械稳定性好、化学选择性高、成本低、制备容易等优点，然而，用这种方法得到的分子印迹聚合物通常存在以下缺陷：由于研磨过程的可控性差，会产生大量不规则粒子，同时破坏部分印迹空腔；所制备的是高度交联的聚合物，致使内部模板分子的洗脱比较困难，残留的模板分子在使用过程中发生缓慢脱吸，给痕量分析等应用带来较大误差；印迹位点分布不均一，一部分处于粒子孔壁上，模板分子向这部分位点的传质速率较快，而另一些则包埋在聚合物本体之中，受位阻影响，这部分印迹空穴可接近性差，再结合模板分子的速率慢，从而降低了印迹位点的利用率，尤其对生物大分子而言，影响更为严重。MIPs内有致密的交联网络，虽然经过脱出模板分子过程，但是仍然存在“模板泄露”的问题，这将会极大的影响分析结果的准确性，采用假模版分子印迹技术则会避免这个问题。此外，含栀子苷的提取液以水作为介质，必须制备亲水性的分子印迹聚合物才能实现对水介质中栀子苷的高选择性吸附，继而对提取液进行分析前的预处理。但是利用分子印迹技术，选择性检测中药提取物中栀子苷含量的技术未见报道。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术以葡萄糖为结构单元，合成修饰有印迹作用位点的亲水性烯基苷型功能单体。采用假模版分子印迹技术，通过亲水性功能单体在水相中制备分子印迹聚合物，通过研磨、筛选聚合物颗粒装填层析柱。制备的分子印迹聚合物特异选择性高、亲水性强、在水介质中具有较好的吸附性能，能够用于中药复方制剂质量控制，满足中药制剂提取液样品前处理，继而经液相色谱系统分析检测及定量分析，建立了用于复杂样品前处理的萃取体系。本专利技术的目的在于提供一种适用于水相中印迹的亲水性功能单体的合成方法。本专利技术的另一目的在于提供一种亲水性栀子苷假模板分子印迹聚合物的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供一种分子印迹-固相萃取样品前处理方法用于检测中药复方制剂中栀子苷含量。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法，以栀子苷类似物为假模板，通过烯基苷型功能单体在水相中制备分子印迹聚合物，其中，所述分子印迹聚合物包含至少一个针对所述栀子苷的特异性结合空腔。亲水性烯基苷型功能单体与分子印迹相结合可使水相识别更容易实现。其外部是亲水的表面,内部则是具有一定尺寸的疏水空腔,可以依据空腔大小,利用疏水作用、氢键和范德华力等进行分子识别,非常适于水相应用。优选的，所述栀子苷类似物为京尼平苷、京尼平苷酸、马钱苷或莫诺苷。优选的，上述烯基苷型功能单体的结构通式如下：具体合成方法如下：(1)将丙烯醇加入反应釜中，冰浴下在反应釜中逐滴加入乙酰氯，充分搅拌0.5～1小时；(2)将步骤1)中反应釜升温加热，分批加入无水葡萄糖，继续加热直至回流；(3)反应结束后加入碳酸氢钠调pH＝6～7，抽滤后将滤液旋干。(4)将步骤3)中得到的产物经柱色谱纯化得到烯基苷型功能单体。更优选的，步骤(1)和(2)中，所述的无水葡萄糖、丙烯醇、乙酰氯按质量比1～1.5:10～20:1～3投入反应釜中。优选的，上述水相中制备分子印迹聚合物的步骤为：a)在水性溶剂体系中，提供烯基苷型功能单体以及假模板分子，其中，所述单体以及所述假模板分子通过可逆的自组装形成一种共价的模板-单体络合物；b)可任选地提供一种交联的单体；c)使所述混合物聚合；d)除去所述至少一个模板分子；e)可任选地，在没有分离所述模板-单体络合物的情况下，在聚合反应之前在一个反应容器中至少进行步骤a)-c)；其中，所述水性溶剂体系使得能够形成所述可逆的自组装体；其中，存在促进形成所述可逆的自组装体的一种试剂。优选的，上述聚合方法是选自下组，其构成为：溶液聚合、本体聚合、沉淀聚合、乳液聚合、悬浮聚合、复合材料形成和接枝法、膜乳化、以及溶胀技术。优选的，上述促进形成所述可逆的自组装体的试剂为偶氮二异戊腈或偶氮二异丁腈。为消除水相结合中产生的非特异吸附,本方明引入水溶性交联剂。经优选后发现：就本专利技术的分子印迹聚合物而言，当所述交联的单体为N,N-亚甲基二丙烯酰胺时，能够得到强亲水性及高选择性的印迹聚合物。根据Sherrington等提出的聚合物准相图，可以通过调整聚合体系中致孔剂及交联剂的含量与比例来制备不同形态的聚合物,但具体体系的实验方法及条件仍需要在实践中摸索。本专利技术在充分考虑了水环境下的影响因素后，对交联剂的用量进行优化，结果表明：交联剂的质量份比为0.05以上时，大部分MIPs都有较高的交联度(一般在80％以上),聚合物网络中印迹位点的空间结构和识别效果较好,然而过多的交联剂(质量份比大于0.10后)会使水溶性分子的结合及脱除更加困难。因此，优选的交联剂配比为0.05～0.10。由于水分子的水合能强,氢键的作用往往被削弱,而实际上氢键的方向性使其具有较好的选择识别性。因此，为加强水环境中氢键的效能,本专利技术希望通过反应物间的协同作用来克服周围水分子的不利影响；实验中偶然专利技术当假模板、功能单体、交联剂、引发剂、致孔剂的质量比为1～3:2～6:15～30:0.05～0.10:20～70时，作用位点附近的局部微环境有所改变,创造出了有利于氢键发挥作用的外部氛围。在水环境中进行分子识别,要求聚合物具有足够的亲水性。有机相合成通常采用丙烯酸衍生物(如甲基丙烯酸MAA)及乙烯基吡啶(4-VP)为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)为交联剂；而在水相合成中,聚合前的预组织过程要求印迹分子与单体之间要有充分的接触机会和作用环境,以便各相关基团能为将来的特定识别作用取得必要的空间排列和组合方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，以栀子苷类似物为假模板，通过烯基苷型功能单体在水相中制备分子印迹聚合物，其中，所述分子印迹聚合物包含至少一个针对所述栀子苷的特异性结合空腔。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测栀子苷的亲水性假模版分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，以栀子苷类似物为假模板，通过烯基苷型功能单体在水相中制备分子印迹聚合物，其中，所述分子印迹聚合物包含至少一个针对所述栀子苷的特异性结合空腔。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述栀子苷类似物为京尼平苷、京尼平苷酸、马钱苷或莫诺苷。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烯基苷型功能单体的结构通式如下：4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水相中制备分子印迹聚合物的步骤为：a)在水性溶剂体系中，提供烯基苷型功能单体以及假模板分子，其中，所述单体以及所述假模板分子通过可逆的自组装形成一种共价的假模板-单体络合物；b)可任选地提供一种交联的单体；c)使所述混合物聚合；d)除去所述至少一个假模板分子；e)可任选地，在没有分离所述假模板-单体络合物的情况下，在聚合反应之前...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪文华，王晓，高乾善，耿岩玲，赵恒强，段文娟，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东;37