α-淀粉酶组合变体制造技术

本发明专利技术公开了与α-淀粉酶变体相关的组合物和方法。所述α-淀粉酶变体可用于例如淀粉液化和糖化，用于在衣物洗涤、餐具洗涤和其它应用中清洁含淀粉的污渍，用于纺织物加工(例如退浆)，用于动物饲料中以改善消化率，以及用于烘培和酿造。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】α-淀粉酶组合变体相关专利申请的交叉引用本专利申请要求2013年3月11日提交的美国临时申请案USSN61/776,699、2013年11月20日提交的USSN61/906,617和2013年11月21日提交的USSN61/907,131的优先权，其全文以引用方式并入本文中。
本专利技术公开了与包含多种可组合突变的α-淀粉酶变体相关的组合物和方法。该α-淀粉酶变体可用于例如淀粉液化和糖化、清洁含淀粉的污渍、纺织物退浆、烘培、和酿造。
技术介绍
淀粉由直链淀粉(15-30％w/w)和支链淀粉(70-85％w/w)的混合物组成。直链淀粉由α-1,4-键连接的葡萄糖单元的直链组成，其分子量(MW)为约60,000至约800,000。支链淀粉是每24-30个葡萄糖单元包含α-1,6分支点的支链聚合物；其分子量(MW)可高达1亿。当前通过酶催化方法由淀粉制备浓缩右旋糖糖浆形式的糖，该方法包括：(1)用α-淀粉酶液化固体淀粉成平均聚合度为约7-10的糊精(降低粘度)，以及(2)将所得的液化淀粉(即淀粉水解产物)用淀粉葡糖苷酶(也称为葡糖淀粉酶或GA)糖化。所得的糖浆具有高葡萄糖含量。随后将商业化生产的葡萄糖浆用酶促方法同分异构成右旋糖/果糖混合物(被称为异糖浆)。所得的糖浆也可用微生物(诸如酵母)发酵以制备商业产品，例如包括乙醇、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、衣康酸、谷氨酸一钠、葡糖酸盐、赖氨酸、其它有机酸、其它氨基酸、以及其它生化物品。发酵与糖化可同时进行(即SSF处理)以实现更经济和更高效。α-淀粉酶通过随机剪切内部α-1,4-糖苷键来水解淀粉、糖元和相关的多糖。α-淀粉酶，特别是来自杆菌(Bacilli)的α-淀粉酶，已被用于多种不同的目的，包括淀粉液化和糖化、纺织物退浆、在造纸和纸浆工业中的淀粉改性、酿造、烘培、制备用于食品工业的糖浆、制备用于发酵过程的原料以及在动物饲料中增加消化率。这些酶也可用于在餐具洗涤和衣物洗涤方法中去除含淀粉的污垢和污渍。多个出版物已经描述了α-淀粉酶中的突变。然而，并非所有突变在不同分子中产生相同的效应，并且并非所有突变都能组合。此外，许多突变产生的具有某些期望的特性的分子是以其它性能为代价的。对稳健工程化的α-淀粉酶分子的需求仍然存在。
技术实现思路
本专利技术的组合物和方法涉及多种淀粉酶变体多肽及其使用方法。本专利技术的组合物和方法的方面和实施例方案汇总在下列单独编号的段落中：1.在一个方面，提供了亲本α-淀粉酶的重组变体，其包含：在对应于E187或S241的氨基酸残基处的突变；以及在对应于选自N126、Y150、F153、L171、T180、和I203的氨基酸残基的氨基酸残基处的至少一个突变；其中所述α-淀粉酶变体或亲本α-淀粉酶相对于SEQIDNO:1(其用于编号)具有至少60％的氨基酸序列同一性；并且其中所述变体与亲本α-淀粉酶或参考α-淀粉酶(与α-淀粉酶变体差别仅为不存在所述突变)相比具有增强的热稳定性、洗涤剂稳定性、淀粉液化活性、和/或清洁性能。2.在一些实施方案中，根据段落1所述的α-淀粉酶变体包含在对应于N126、Y150、F153、L171、和I203的氨基酸残基处的至少两个突变，使用SEQIDNO:1来编号。3.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于R178、G179、T180、和G181的至少一个氨基酸残基处的缺失，使用SEQIDNO:1来编号。4.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含对应于R178和G179、或者T180和G181的氨基酸残基的缺失。5.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于G476和/或G477的氨基酸残基处的突变，使用SEQIDNO:1来编号。6.在一些实施方案中，根据前述前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于选自E132、Q167、T180、和A277的氨基酸残基的氨基酸残基中的突变，使用SEQIDNO:1来编号。7.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于选自R458、T459、和D460的氨基酸残基的氨基酸残基中的突变，使用SEQIDNO:1来编号。8.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于T180的氨基酸残基中的突变，使用SEQIDNO:1来编号。9.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于N205的氨基酸残基中的突变，使用SEQIDNO:3来编号。10.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于选自T333G、A335S、和Q337E的氨基酸残基的氨基酸残基中的突变，使用SEQIDNO:3来编号。11.在一些实施方案中，根据前述段落中任一个所述的α-淀粉酶变体还包含在对应于选自下列的氨基酸残基位置的氨基酸残基中的突变，使用SEQIDNO:1来编号：6，7，8，11，14，15，20，L1，23，26，27，28，37，38，39，40，42，45，46，48，49，50，51，52，53，54，58，61，62，68，70，71，72，73，79，80，81，82，84，85，87，88，89，92，93，94，95，96，97，98，101，108，111，112，113，114，115，116，117，118，120，122，123，124，126，127，129，130，131，132，133，134，136，137，138，140，142，143，144，147，148，149，150，151，152，153，154，155，156，158，159，165，167，168，170，171，172，175，176，177，180，181，182，187，190，191，193，199，200，201，203，206，208，210，211，212，214，215，216，219，221，223，225，226，227，235，238，239，240，241，242，243，245，246，247，248，249，250，252，253，254，256，257，258，260，261，262，266，267，268，269，270，271，273，276，277，279，280，282，284，285，286，288，296，299，300，301，302，303，304，307，308，310，311，312，313，316，317，318，320，321，325，327，335，338，342，348，349，352，356，357，360，362，363，368，369，377，381，382，383，384，385，388，390，392，394，395，396，397，398，400，401，402，403，404，405，407，408，410，414，415，416，418，419，420，421，422，423，424，426，428，429，430，431，434，435，436，439，441，442，444，445，446，447，448，449，450，451，454，4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种亲本α‑淀粉酶的重组变体，其包含：在对应于E187或S241的氨基酸残基处的突变；和在对应于选自N126、Y150、F153、L171、T180、和I203的氨基酸残基的氨基酸残基处的至少一个突变；其中所述α‑淀粉酶变体或所述亲本α‑淀粉酶相对于SEQ ID NO:1具有至少60％的氨基酸序列同一性，使用SEQ ID NO:1来编号；并且其中所述变体与所述亲本α‑淀粉酶或参考α‑淀粉酶相比具有增强的热稳定性、洗涤剂稳定性、淀粉液化活性、和/或清洁性能，所述参考α‑淀粉酶与所述α‑淀粉酶变体的差别仅为不存在所述突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.11 US 61/776,699;2013.11.20 US 61/906,617;1.一种亲本α-淀粉酶的重组变体，其包含突变E187P+I203Y+G476K并缺失氨基酸残基R178和G179，或突变E187P+I203Y+G476K+R458N+T459S+D460T并缺失氨基酸残基R178和G179，其中所述亲本α-淀粉酶如SEQIDNO:1所示并使用SEQIDNO:1来编号；并且其中所述变体与所述亲本α-淀粉酶或参考α-淀粉酶相比具有增强的热稳定性、洗涤剂稳定性、淀粉液化活性、和/或清洁性能，所述参考α-淀粉酶与所述α-淀粉酶变体的差别仅为不存在所述突变。2.一种组合物，其包含根据权利要求1所述的α-淀粉酶变体。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物有效用于从餐具或纺织物中去除含淀粉的污渍。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述所述纺织物是衣物。5.根据权利要求2或3所述的组合物，其还包含表面活性剂。6.根据权利要求2或3所述的组合物，其中所述组合物是洗涤剂组合物。7.根据权利要求2或3所述的组合物，其中所述组合物是衣物洗涤剂或衣物洗涤剂添加剂。8.根据权利要求2或3所述的组合物，其中所述组合物是手动餐具洗涤剂或自动餐具洗涤剂。9.根据权利要求2或3所述的组合物，其还包含一种或多种其他的酶，所述其他的酶选自蛋白酶、半纤维素酶、纤维素酶、脂解酶、木聚糖酶、酯酶、过水解酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、还原酶、氧化酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麦拉宁酶、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、阿马多里酶、葡糖淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、植酸酶、异构酶、转移酶、以及根据权利要求1所述的淀粉酶之外的淀粉酶。10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述蛋白酶是角蛋白酶、金属蛋白酶。11.根据权利要求9所述的组合物，其中所述氧化酶是过氧化物酶、酚氧化酶、脂氧合酶。12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述酚氧化酶是漆酶。13.根据权利要求9所述的组合物，其中所述脂解酶是金属脂解酶。14.根据权利要求9所述的组合物，其中所述酯酶是脂肪酶。15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述脂肪酶是磷脂酶。16.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物用于液化淀粉。17.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物用于糖化包含淀粉的组合物、用于SSF后液化、或用于无在先液化的直接SSF。18.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物用于制备发酵饮料。19.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物用于制备烘培的食物产品。20.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物用于纺织物退浆。21.一种用于从表面去除含淀粉的污渍或污垢的方法，该方法包括：在包含有效量的根据权利要求1所述的α-淀粉酶重组变体的组合物存在下，接触所述表面，以及使所述α-淀粉酶重组变体水解含淀粉的污渍中存在的淀粉组分以生成溶解在含水组合物中的更小的淀粉衍生分子，从而从所述表面去除所述含淀粉的污渍。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述含水组合物还包含表面活性剂。23.根据权利要求21或22所述的方法，其中所述表面是纺织物表面或餐具表面。24.根据权利要求21或22所述的方法，其中所述组合物还包含至少一种其他的酶，所述其他的酶选自蛋白酶、半纤维素酶、纤维素酶、脂解酶、木聚糖酶、酯酶、过水解酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、还原酶、氧化酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麦拉宁酶、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、阿马多里酶、葡糖淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、植酸酶、异构酶、转移酶、以及根据权利要求1所述的淀粉酶之外的淀粉酶。25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述蛋白酶是角蛋白酶、金属蛋白酶。26.根据权利要求24所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·G·卡斯康佩雷拉，D·芬南，D·E·维尔德斯，M·科尔克曼，R·R·博特，P·奥古斯丁，R·赫曼特，M·O·鲁伊斯，D·范托尔，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US