一种用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的强化剂，在双蒸馏水中添加有葡萄糖和谷氨酞胺、天冬酞胺、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、组氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、四甲基戊二酸、α-酮戊二酸、2-巯基乙醇，以强化和丰富细胞培养基中的重要营养物质。添加到培养基中后能有效提高细胞在培养基中的活细胞密度，延长活细胞在培养基中的维持时间，延缓细胞的死亡；能有效提高动物细胞的毒理学评价效果稳定性和可靠性；本发明专利技术组分明确，具有较强的通用性，能适用于多种动物细胞培养基；本发明专利技术成分简单，不含动物来源成分，产品品质能保证；本发明专利技术成本较低，配制及使用方便，适于大规模使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种动物细胞培养技术，特别是一种用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的强化剂。
技术介绍
利用动物细胞培养技术来验证化合物毒理学实验测试目前为止最为高效和可行的方法。随着生物技术在化合物毒理学安全评价应用领域和市场需求量的不断扩大，提高动物细胞培养和毒理学试验、延长维持时间以获得可靠结果，成为优化动物细胞培养过程和毒理学实验的核心。众所周知，动物细胞培养及毒理学试验的效果的经济性和效率起决定性作用的是培养基，培养基的优化是建立高效的动物细胞培养和毒理学试验过程的核心环节。因此，根据细胞在生长、代谢和毒理学试验表达过程中的营养需求，设计动物细胞培养基中营养物的成分、含量和配比是工作的重要内容。国内外许多商业化的培养基一般由基础培养基和血清或替代物组成，显著影响细胞生长、代谢和毒理试验现象表达这些培养基一般仅能确保细胞的稳定传代，并不能较好地支持细胞生长和毒理试验效果的表达，因而阻碍了细胞毒理学实验的普及和应用。市售的商业无血清培养基在血清替代方面多具有良好的表现，但在支持细胞培养和高效表达毒理学效果方面仍有诸多缺陷。因此，在进行动物细胞培养和毒理学实验时，多数无血清培养基难以充分、平衡地向细胞提供所需的营养物质。培养基利用率很低，造成极大的浪费。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提出了一种提高培养基利用率的用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的强化剂，以强化和丰富细胞培养基中的重要营养物质，能有效促进细胞在培养基中的生长和被试物加快进入细胞液表达，延长活细胞维持时间。本专利技术要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的，一种用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的强化剂，其特点是:在双蒸馏水中添加有葡萄糖和氨基酸， 其中每升双蒸馏水中葡萄糖和氨基酸的添加量为: 葡萄糖320— 500克、 谷氨酞胺20— 80克、 天冬酞胺2 —10克、脯氨酸10 — 20克、 苏氨酸20— 40克、丝氨酸2—6克、 组氨酸2—6克、赖氨酸8—15克、 半胱氨酸2— 5克、四甲基戊二酸0.1—0.5克、 α _酬戊二酸0.1一2克、2_疏基乙醇0.1一 1.0克。本专利技术要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述的双蒸馏水为无热源双蒸馏水。本专利技术要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，每升双蒸馏水中葡萄糖和氨基酸的含量为: 葡萄糖300克； 谷氨酞胺25克； 天冬酞胺2克； 脯氨酸6克； 苏氨酸15克；丝氨酸2克； 组氨酸2克；赖氨酸20克； 半胱氨酸2克； 四甲基戊二酸.0.5克； α-酮戊二酸2克；2-巯基乙醇0.5克。本专利技术提供一种用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的营养强化剂，以强化培养基中的重要营养物质，提高细胞培养及其在毒理学试验中表达效率。满足动物细胞培养和细胞毒理学实验的需要。所述营养物添加剂中含有葡萄糖以作为细胞获取营养的主要碳源物质，为细胞生长和毒理学表达提供必要的能量供给；含有的氨基酸以作为细胞合成自身蛋白和蛋白产物的重要元素，能决定细胞在培养过程中所能达到的最大活细胞密度以及细胞活性的维持时间。 本专利技术与现有技术相比，本专利技术的强化剂添加到培养基中后能有效提高细胞在培养基中的活细胞密度，延长活细胞在培养基中的维持时间，延缓细胞的死亡；添加到培养基中后能有效提高动物细胞的毒理学评价效果稳定性和可靠性；本专利技术组分明确，具有较强的通用性，能适用于多种动物细胞培养基；添加到培养基中后细胞在做毒理学暴露试验时提高细胞染毒效率；本专利技术成分简单，不含动物来源成分，产品品质能保证；本专利技术成本较低，配制及使用方便，适于大规模使用。【具体实施方式】一种用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的强化剂，在双蒸馏水中添加有葡萄糖和氨基酸， 其中每升双蒸馏水中葡萄糖和氨基酸的添加量为: 葡萄糖320— 500克、 谷氨酞胺20— 80克、 天冬酞胺2 —10克、脯氨酸10 — 20克、 苏氨酸20— 40克、丝氨酸2—6克、 组氨酸2—6克、赖氨酸8—15克、 半胱氨酸2— 5克、四甲基戊二酸0.1—0.5克、 α _酬戊二酸0.1一2克、2_疏基乙醇0.1一 1.0克。所述的双蒸馏水为无热源双蒸馏水。用于每升培养基的添加量为10mL。动物细胞的培养基成分复杂，其中除了对细胞的存活起维持作用的血清替代物、维生素、无机盐和微量元素之外，葡萄糖、氨基酸等主要营养物质对细胞的生长、代谢和毒理试验结果起着至关重要的作用。其中，葡萄糖是动物细胞最为重要的碳源和能源物质，是细胞进行糖酵解和TCA循环的重要底物。而氨基酸作为蛋白质合成的重要元件，在动物细胞生长代谢和产物表达过程中起到了不可替代的作用。氨基酸是蛋白质和多肤合成的前体，可合成细胞自身所需的结构蛋白以及生化反应中必不可少的生物酶，还直接参与抗体的生物合成，同时也是合成其他生物分子的代谢中间体，还可作为底物提供细胞生理活动所必需的能量，是细胞生长、代谢和产物生产的重要营养物质。研究发现，氨基酸对细胞的生理、代谢状态具有显著影响。如1997年Buckland等人发现流加培养过程中一些必需氨基酸的缺乏会引起细胞凋亡；1998年Bavister等人发现氨基酸能作为一种缓冲剂调节细胞内PH，从而缓解因氨浓度累积而造成的毒害作用；2002年deZengotita等人的研究证明甘氨酸和苏氨酸能保护细胞免受培养环境中累积的二氧化碳和渗透压的不利影响；随着对氨基酸重要性认识的深化，培养基氨基酸的强化越来越受到重视，通过合理添加氨基酸可提高细胞的生长。例如文献中显示1994年Bibila等人通过提高流加培养基中的氨基酸浓度使最终产物浓度比批培养提高了 7倍；2005年Kuwae等人通过提高培养基中谷氨酞胺的浓度使细胞的生产速率提高了 1.7倍；2010年Rustandi等人通过改变培养基中的氨基酸浓度使产物浓度提高至13克/升，细胞的比生产速率达到了 45皮克/细胞.天。综上所述，葡萄糖和氨基酸作为关键的营养物质在动物细胞培养基中起着至关重要的作用。国内外许多商业化的培养基一般由基础培养基和血清或替代物组成，显著影响细胞生长、代谢和毒理试验现象表达这些培养基一般仅能确保细胞的稳定传代，并不能较好地支持细胞生长和毒理试验效果的表达，因而阻碍了细胞毒理学实验的普及和应用。以下具体介绍本专利技术适于动物细胞细胞毒理实验改良培养基强化剂的【具体实施方式】，提供I个实施例，但是，本专利技术的实施不限于以下的实施例。实施例应用于商业无血清培养基EX-CELL ? 302对已获得的CHO细胞株采用本研究的动物细胞培养和细胞细胞毒理实验改良培养基强化剂。其使用如下: 一种适于动物细胞细胞毒理实验改良培养基强化剂，含有葡萄糖和氨基酸，在一升无热源双蒸馏水中葡萄糖和氨基酸的含量为(重量为克): 葡萄糖300 ; 谷氨酞胺25 ; 天冬酞胺2 ； 脯氨酸6 ； 苏氨酸15 ;丝氨酸2 ; 组氨酸2 ；赖氨酸20 ； 半胱氨酸2; 四甲基戊二酸.0.5; α -酮戊二酸2 ； 2-巯基乙醇0.5 ； 将所述葡萄糖和氨基酸组分充分溶解于无热源双蒸馏水中，配制成所述的营养物添加剂。本专利技术适于动物细胞细胞毒理实验改良培养基强化剂的配制本文档来自技高网...
【技术保护点】
—种用于人体肝细胞毒理试验改良培养基的强化剂，其特征在于：在双蒸馏水中添加有葡萄糖和氨基酸，其中每升双蒸馏水中葡萄糖和氨基酸的添加量为: 葡萄糖320—500克、 谷氨酞胺20—80克、 天冬酞胺2—10克、 脯氨酸10—20克、 苏氨酸20—40克、 丝氨酸2—6克、 组氨酸2—6克、 赖氨酸8—15克、半胱氨酸2—5克、 四甲基戊二酸0.1—0.5克、α‑酮戊二酸0.1—2克、 2‑巯基乙醇0.1—1.0克。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周翔，陈进，郭瑛，钱亮亮，祁燕凌，王爱媛，
申请(专利权)人：连云港市产品质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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