本发明专利技术公开了一种改良的Neurobasal B27培养基，每升Neurobasal培养液中含有以下组分：生物素0.09-0.11g、皮质酮18-22μg、L-肉毒碱1-3g、亚油酸0.9-1.1g、乙醇胺0.9-1.1g、亚麻酸0.9-1.1g、D(+)-半乳糖13-17g、孕酮6-7μg、腐胺二盐酸盐15-17g、视黄醇乙酸酯0.08-0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.2-2.8g、DL-α-生育酚0.8-1.5g、过氧化氢酶2-3g、DL-α-生育酚乙酸酯0.9-1.2g、还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸42-52μg、超氧化物歧化酶2-3g、转铁蛋白4-6g、人胰岛素3-5g、亚硒酸钠0.12-0.16mg。本发明专利技术还公开了一种改良的Neurobasal B27培养基的制备方法及应用。本发明专利技术可以用于研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种改良的NeurobasalB27培养基，本专利技术还涉及一种改良的Neurobasal B27培养基的制备方法及应用。
技术介绍
胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell，ES细胞)源于着床前囊胚期内细胞团(InnerCell Mass，ICM)，具有自我更新能力和发育全能性，胚胎干细胞的体外分化为研究胚胎早期发育的细胞和分子机制提供了良好的模型。甲状腺激素是胎儿脑发育的必需激素，在碘缺乏地区，由于碘缺乏导致的母体妊娠期甲状腺激素缺乏，可以导致胎儿生长发育停滞、智力低下、运动失调，严重者发生呆小症。因此，研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响，以及探讨甲状腺激素对胎儿早期的大脑皮层发育的影响，具有重要的意义。现有技术中，培养胚胎干细胞时主要采用的是市售的NeurobasalB27培养基，然而市售的Neurobasal B27培养基中含有甲状腺激素，无法用于研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响。
技术实现思路
本专利技术提供的一种改良的NeurobasalB27培养基、制备方法及应用，可以用于研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响。本专利技术的第一个目的是提供一种改良的Neurobasal B27培养基，每升Neurobasal培养液中含有以下组分:生物素0.09-0.11g、皮质酮18-22μg、L-肉毒碱l-3g、亚油酸0.9-l.lg、乙醇胺0.9-1.lg、亚麻酸0.9-1.lg、D( + )_半乳糖13-17g、孕酮6-7yg、腐胺二盐酸盐15-17g、视黄醇乙酸酯0.08-0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.2-2.8g、DL-a-生育酚0.8-1.5g、过氧化氢酶2-3g、DL-a-生育酚乙酸酯0.9-1.2g、还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸42-52yg、超氧化物歧化酶2-3g、转铁蛋白4_6g、人胰岛素3_5g、亚砸酸钠0.12-0.16mg。优选的，本专利技术一种改良的Neurobasal B27培养基，每升Neurobasal培养液中含有以下组分:生物素0.lg、皮质酮20yg、L-肉毒碱2g、亚油酸lg、乙醇胺lg、亚麻酸lg、D( + )_半乳糖15g、孕酮6.3yg、腐胺二盐酸盐16.lg、视黄醇乙酸酯0.lg、去甲状腺激素牛血清蛋白2.58、0卜€[-生育酚18、过氧化氢酶2.58、01^€[-生育酚乙酸酯18、还原型谷胱甘肽18、硫辛酸47yg、超氧化物歧化酶2.5g、转铁蛋白5g、人胰岛素4g、亚砸酸钠0.y46mg。优选的，本专利技术一种改良的Neurobasal B27培养基，每升Neurobasal培养液中含有以下组分:生物素0.09g、皮质酮18yg、L-肉毒碱lg、亚油酸1.lg、乙醇胺1.lg、亚麻酸1.lg、D( + )_半乳糖17g、孕酮6.lyg、腐胺二盐酸盐15g、视黄醇乙酸酯0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.8g、DL-a-生育酚1.5g、过氧化氢酶3g、DL-a-生育酚乙酸酯1.2g、还原型谷胱甘肽1.3g、硫辛酸51yg、超氧化物歧化酶2.8g、转铁蛋白5g、人胰岛素4g、亚砸酸钠0.15mg。优选的，本专利技术一种改良的Neurobasal B27培养基，每升Neurobasal培养液中含有以下组分:生物素0.llg、皮质酮22yg、L-肉毒碱3g、亚油酸0.9g、乙醇胺0.9g、亚麻酸lg、D( + )_半乳糖14g、孕酮7yg、腐胺二盐酸盐17g、视黄醇乙酸酯0.09g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.2g、DL-a-生育酚0.9g、过氧化氢酶2.2g、DL_a-生育酚乙酸酯lg、还原型谷胱甘肽0.8g、硫辛酸43yg、超氧化物歧化酶2.3g、转铁蛋白4.2g、人胰岛素3.2g、亚砸酸钠0.12mg。本专利技术的第二个目的是提供一种改良的Neurobasal B27培养基的制备方法，每升改良的Neurobasal B27培养基按照以下步骤制备: 步骤I，称取0.09-0.I Ig的生物素、18-22yg的皮质酮、l_3g的L-肉毒碱、0.9-1.Ig的亚油酸、0.9-1.1g的乙醇胺、0.9-1.1g的亚麻酸、13-17g的D( + )_半乳糖、6_7yg的孕酮、15_17g的腐胺二盐酸盐、0.08-0.12g的视黄醇乙酸酯、2.2-2.Sg的去甲状腺激素牛血清蛋白、0.8-1.5g的DL-α-生育酚、2_3g的过氧化氢酶、0.9-1.2g的DL-a-生育酚乙酸酯、0.8_1.3g的还原型谷胱甘肽、42-52yg的硫辛酸、2-3g的超氧化物歧化酶、4-6g的转铁蛋白、3-5g的人胰岛素、0.12-0.16mg的亚砸酸钠；步骤2，将步骤I中各组分混合后加入到100mL的Neurobasal培养液中，震荡搅拌，充分溶化各组分，获得溶液；步骤3，将步骤2中获得的溶液，以孔径为0.22μπι的滤菌膜过滤除菌，得到改良的Neurobasal Β27培养基。本专利技术的第三个目的是提供一种改良的Β27的培养基，在胚胎干细胞培养中的应用。本专利技术一种改良的Neurobasal Β27培养基，可以用于研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响。【附图说明】图1为本专利技术中小鼠胚胎干细胞的200倍显微视图；图2为本专利技术中神经元前体细胞的200倍显微视图；图3为本专利技术中神经细胞的200倍的显微视图；图4为采用对照组神经细胞培养基获得的神经细胞的200倍显微视图；图5为采用实验组神经细胞培养基获得的神经细胞的200倍显微视图。【具体实施方式】下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。下面实施例中未注明具体条件的实验方法，均按照本领域的常规方法和条件进行，或按照商品说明书选择;下面实施例中，小鼠胚胎干细胞购自美国ATCC公司，10%明胶包被培养皿和多聚鸟氨酸/层粘连蛋白/明胶(polylysine/laminin/gelatin)包被培养皿均购自美国life invitrogen，其余所有的试剂和原料购自Sigma公司或者美国life invitrogen公司。本专利技术一种改良的Neurobasal B27培养基，每升Neurobasal培养液中含有以下组分:生物素(B1tin)0.09_0.11g、皮质醇(Corticosterone)18-22yg、L-肉毒喊(L-carnitine)l_3g、亚油酸(LinoIeic acid)0.9-1.lg、乙醇胺(Ethanolamine)0.9-1.lg、亚麻酸(Linolenic acid)0.9_l.lg、D( + )_半乳糖(D( + )- galactose)13_17g、孕酬(Progesterone)6_7yg、腐胺二盐酸盐(Putrescine dihydrochloride) 15-17g、视黄醇乙酸酯(Re tiny I acetate )0.08-0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白(Albumine，bovine)2.2_2.8-1.5g、过氧化氢酶(Cata lase) 2_3g、DL-α-生育酸乙酸酯(DL-a-tocopherol acetate)0.9-1.2g、还原型谷I光甘肽(Gl本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种改良的Neurobasal B27培养基，其特征在于，每升Neurobasal培养液中含有以下组分：生物素0.09‑0.11g、皮质酮18‑22μg、L‑肉毒碱1‑3g、亚油酸0.9‑1.1g、乙醇胺0.9‑1.1g、亚麻酸0.9‑1.1g、D(+)‑半乳糖13‑17g、孕酮6‑7μg、腐胺二盐酸盐15‑17g、视黄醇乙酸酯0.08‑0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.2‑2.8g、DL‑α‑生育酚0.8‑1.5g、过氧化氢酶2‑3g、DL‑α‑生育酚乙酸酯0.9‑1.2g、还原型谷胱甘肽0.8‑1.3g、硫辛酸42‑52μg、超氧化物歧化酶2‑3g、转铁蛋白4‑6g、人胰岛素3‑5g、亚硒酸钠0.12‑0.16mg。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：滕晓春，滕卫平，单忠艳，张涵祎，奚月，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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