用于染色和样品处理的方法和组合物技术

本公开涉及一种染色方法，所述染色方法利用能够在单个步骤中快速将细胞染色的颗粒造影剂组合物。所述颗粒造影剂组合物可由一种或多种颗粒造影剂的组合、一种或多种渗透剂以及一种或多种固定剂构成。所述颗粒造影剂组合物可包括结晶紫、新亚甲蓝、皂草苷和戊二醛。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于染色和样品处理的方法和组合物相关专利申请的交叉引用本专利申请要求2013年3月15日提交的、名称为“AnalysisofParticlesinFluidSamples(流体样品中的颗粒分析)”的美国专利申请第61/799,152号的权益，所述专利申请的全文以引用方式并入本文中。
本公开总体涉及颗粒造影剂，更具体地，涉及颗粒造影剂组合物，所述颗粒造影剂组合物用于完全自动或部分自动装置中以鉴别和量化颗粒，如样品中的血细胞。
技术介绍
血细胞分析是用于提供患者大致健康状况最常进行的医学检验之一。血液样品可从患者的身体抽取并保存在含有抗凝血剂以防止凝结的试管中。全血样品通常包括血细胞的三个主要类别，包括红血细胞(红细胞)、白血细胞(白细胞)和血小板(凝血细胞)。每一类可进一步分为具有多个成员的子类。例如，白血细胞(WBC)的五个主要类型或子类具有不同的形状和功能。白血细胞可包括嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。也有红血细胞类型的子类。样品中的颗粒外观可根据病理状况、细胞成熟度和其它原因而不同。红血细胞子类可包括网织红细胞和有核红血细胞。估算RBC、WBC或血小板浓度的血细胞计数可手动进行或使用自动分析仪进行。当血细胞计数手动完成时，将一滴血施加到显微镜载片作为薄涂片。传统上，一直使用显微镜载片上的经干燥、染色的血液涂片的手工检查来确定五种白血细胞的数目或相对量。已使用组织学染料和染色剂(stain)来将细胞或细胞结构染色。例如，瑞氏染色剂(Wright'sstain)是已用来将在光学显微镜下检查的血涂片染色的组织学染色剂。将样品染色包括以适当的顺序使用多种溶液和步骤以确保染色剂正确施用，并且细胞结构被适当地保留。在第一步骤中，可将固定剂(fixingagent)施用于样品以保护样品不降解并保持细胞结构。随后，在第二步骤中，可将渗透剂施用于样品来溶解细胞膜，以允许染色剂进入细胞。在第三步骤中，可将染色剂施用于样品以将适当的结构染色。可将样品进一步漂洗用于观察，或可进行另外的步骤来施用另外的染色剂、复染色剂，或执行其它操作。以适当的顺序持续适量的时间执行所述步骤是重要的。如果样品在被固色之前被渗透，则样品中的细胞结构可在被固色之前被降解，而且辨别原始细胞形态的任何能力都丧失。此外，染色不能先于渗透步骤发生，否则染色剂将无法正常穿透细胞并使细胞内的结构染色。此外，如果任何一个步骤，如固色、渗透和染色执行过快，则细胞形态可能丧失和/或细胞和其内部结构可能无法被正常染色。现有的染色技术需要多个步骤和大量时间。现有的染色技术需要样品以通常约1:500或1:5000稀释于造影剂中。因此，现有的染色技术下正常的染色导致自动分析仪正在变得越来越普及。全血细胞计数(CBC)可使用自动分析仪获得，其中的一种类型基于当颗粒或细胞沿小管通过感测区域时的阻抗或动态光散射来对血液样品中的不同颗粒或细胞计数。自动CBC可采用仪器或方法来区分不同类型的细胞(包括RBC、WBC和血小板(PLT))，所述不同类型的细胞可被独立地计数。例如，需要最小粒度或体积的计数技术可用来只对大细胞计数。血液中的某些细胞(如异常细胞)可能未被计数或正确识别。彼此附着的小细胞可能被错误地作为一个大细胞而计数。当怀疑错误计数时，可能需要手动复查仪器结果以验证和识别细胞。自动血细胞计数技术可涉及流式细胞术。流式细胞术涉及提供狭窄流道，并对各个血细胞的通过进行感测和计数。流式细胞术方法已被用于检测悬浮在流体中的颗粒，如血液样品中的细胞，以及用于分析颗粒的类型、尺寸和体积分布，以推断出血液样品中相应颗粒类型的浓度或颗粒体积。用于分析悬浮于流体中的颗粒的合适方法的例子包括沉淀、微观表征、基于阻抗计数以及动态光散射。这些工具都会有测试误差。另一方面，颗粒的类型和浓度的准确表征在例如医疗诊断的应用中可能至关重要。在基于成像的计数技术中，使用连接到数字照相机的显微镜物镜镜头捕捉可能正通过查看区域的制备样品的像素数据图像。像素图像数据可使用数据处理技术进行分析，并且还可显示在监视器上。利用流动池(flowcell)的自动诊断系统的方面在Turner等人的美国专利第6,825,926号和Kasdan等人的美国专利第6,184,978号、第6,424,415号以及第6,590,646号中公开，这些专利均以引用方式并入，犹如在本文中充分阐述一样。采用动态光散射或阻抗的自动系统已被用于获得全血细胞计数(CBC)：总的白血细胞计数(WBC)、总的红血细胞的细胞体积(RBC分布)、血红蛋白HGB(血液中血红蛋白的量)；平均细胞体积(MCV)(红细胞的平均体积)；MPV(平均PLT体积)；血细胞比容(HCT)；MCH(HGB/RBC)(每个红血细胞的血红蛋白的平均量)；以及MCHC(HGB/HCT)(细胞中血红蛋白的平均浓度)。已使用自动或部分自动工艺以有利于白血细胞五部分分类计数和血液样品分析。以上所述的各种自动系统依赖于样品的快速分析。染色过程的步骤数和持续时间可能是自动颗粒分析系统的速度和功效的限制因素。如果染色过程缩短，则自动颗粒分析系统可能更有效率，并且如果染色过程以单一步骤进行，则自动颗粒分析系统会进一步更有效率。另外，如果样品的总大小被保持在最小，则自动颗粒分析系统可能更有效率。
技术实现思路
本专利技术公开了一种用于对在自动颗粒分析系统中成像的血液流体样品染色的颗粒造影剂组合物。所述颗粒造影剂组合物可包括选自结晶紫、新亚甲蓝、甲基绿、伊红Y以及番红O的至少一种颗粒造影剂。所述颗粒造影剂组合物可进一步包括选自表面活性剂、皂草苷、季铵盐、非离子表面活性剂、洗涤剂和两性离子表面活性剂的渗透剂。所述颗粒造影剂组合物可进一步包括选自戊二醛和甲醛的固定剂。在一个实施例中，渗透剂可为皂草苷，所述皂草苷存在的量为在染色条件下足以得到介于约50mg/L和约750mg/L之间的浓度。固定剂可为戊二醛，所述戊二醛存在的量为在染色条件下足以得到0.1％或低于0.1％的浓度。在一个实施例中，所述至少一种颗粒造影剂可包括结晶紫、新亚甲蓝以及伊红-Y。在染色条件下结晶紫与新亚甲蓝的比率可介于约1:90至约1:110之间。伊红-Y可以在染色条件下足以得到约3μM至约300μM的浓度的量存在。在一个实施例中，结晶紫可以在染色条件下足以得到约6μM至约10μM的浓度的量存在。新亚甲蓝可以在染色条件下足以得到约70μM至约2.4mM的浓度的量存在。伊红-Y可以在染色条件下足以得到约10μM至约50μM的浓度的量存在。在一些实施例中，结晶紫为大约90％的纯度或更纯。新亚甲蓝可为大约70％的纯度或更纯。伊红-Y可为大约80％的纯度或更纯。在一些实施例中，结晶紫以在染色条件下足以得到约7.8μM的浓度的量存在。新亚甲蓝以在染色条件下足以得到约735μM的浓度的量存在。伊红-Y可以在染色条件下足以得到约27μM的浓度的量存在。在一些实施例中，颗粒造影剂组合物可另外包括缓冲组分。本专利技术公开了一种用于处理血液流体样品的颗粒的方法，所述颗粒将使用自动颗粒分析系统成像。所述方法可包括将血液流体样品与颗粒造影剂组合物组合以获得样品混合物，以及将所述样品混合物在约37℃和约60℃之间的温度下温育少于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于对在自动颗粒分析系统中成像的血液流体样品染色的颗粒造影剂组合物，包括：至少一种颗粒造影剂，所述颗粒造影剂选自结晶紫、新亚甲蓝、甲基绿、伊红Y和番红O；渗透剂，所述渗透剂选自表面活性剂、皂草苷、季铵盐、非离子表面活性剂、洗涤剂和两性离子表面活性剂；以及固定剂，所述固定剂选自戊二醛和甲醛。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.15 US 61/799,1521.一种用于对在自动颗粒分析系统中成像的血液流体样品染色的颗粒造影剂组合物，包括：结晶紫、新亚甲蓝和伊红-Y；渗透剂，所述渗透剂包括皂草苷，所述皂草苷存在的量在染色条件下足以得到介于50mg/L与750mg/L之间的浓度；以及固定剂，所述固定剂包括戊二醛，所述戊二醛存在的量在染色条件下足以得到0.1％或低于0.1％的浓度；所述结晶紫与所述新亚甲蓝的比率在染色条件下介于1:90至1:110之间；并且所述伊红-Y以在染色条件下足以得到3μM至300μM的浓度的量存在。2.根据权利要求1所述的组合物，其中：所述结晶紫以在染色条件下足以得到6μM至10μM的浓度的量存在；所述新亚甲蓝以在染色条件下足以得到70μM至2.4mM的浓度的量存在；并且所述伊红-Y以在染色条件下足以得到10μM至50μM的浓度的量存在。3.根据权利要求2所述的组合物，其中：所述结晶紫具有90％的纯度或更纯；所述新亚甲蓝具有70％的纯度或更纯；并且所述伊红-Y具有80％的纯度或更纯。4.根据权利要求3所述的组合物，其中：所述结晶紫以在染色条件下足以得到7.8μM的浓度的量存在；所述新亚甲蓝以在染色条件下足以得到735μM的浓度的量存在；以及所述伊红-Y以在染色条件下足以得到27μM的浓度的量存在。5.根据权利要求2所述的组合物，还包括：缓冲组分。6.一种处理血液流体样品的颗粒的方法，所述血液流体样品将使用自动颗粒分析系统成像，所述方法包括：将所述血液流体样品与颗粒造影剂组合物组合以获得样品混合物；以及将所述样品混合物在介于37℃与60℃之间的温度下温育少于90秒；其中所述颗粒造影剂组合物包括：结晶紫、新亚甲蓝和伊红-Y；渗透剂，所述渗透剂包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·科瑞明斯，C·库翁，
申请(专利权)人：艾瑞思国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US