人抗VEGFR-2/KDR抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合于VEGFR-2的抗体。所述抗体用于治疗肿瘤性疾病、过度增生病症和血管生成病症，并且可将其单独使用或与其它药剂组合使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】人抗VEGFR-2/KDR抗体 专利
本专利技术涉及结合VEGFR-2的抗体。所述抗体被用于治疗肿瘤性疾病和过度增生病 症，并且可将其单独使用或与其它药剂组合使用。 相关申请的交叉引用 本申请要求2012年10月5日提交的美国申请No. 61/710,420的优先权，该美国 申请通过引用以其整体并入本文。 专利技术背景 血管生成是高度复杂的形成新血管的过程，其牵涉毛细血管内皮细胞的增生，以 及其从预先存在的血管的迀移和组织浸润，细胞至管状结构的组配，新形成的管状组装体 形成闭路循环血管系统的联接或新形成的毛细血管的成熟。 血管生成在正常生理过程包括胚胎发育、卵泡生长和伤口愈合中是非常重要的。 过度的血管生成还导致肿瘤性疾病和非肿瘤性疾病诸如年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视 网膜病和新生血管性青光眼中的新血管形成。利用雷珠单抗（乐明睛，LucentiS)靶向血管 内皮细胞生长因子（VEGF)的抗血管生成疗法已被证明在延缓AMD的进展中是有效的。然 而，新血管形成是复杂的，并且多血管生成机制有可能作出贡献。但仍然需要开发用于治疗 与新血管形成相关的疾病的药剂和疗法。 专利技术概述 本专利技术提供了结合VEGFR-2 (KDR)的人抗体及其片段。在一些实施方案中，所述抗 体阻断配体（例如，VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D或VEGF-E的一种或多种）对VEGFR-2的结合。 在一些实施方案中，所述抗体中和VEGFR-2的激活。所述抗体用于治疗肿瘤性疾病，包括， 例如实体瘤和非实体瘤，以及过度增生病症。因此，本专利技术提供了中和KDR的激活的方法， 抑制肿瘤生长（包括抑制肿瘤相关血管生成）的抑制的方法，以及治疗血管生成相关病症 的方法。本专利技术提供了具有结合于VEGR受体的人抗体或抗体片段的试剂盒。 在一个实施方案中，本专利技术提供了包含⑶R-1H、⑶R-2H和⑶R-3H序列的分离的重 链可变区，其中：⑴cdr-ih序列为Gftfswyx1MX2(seq id no: 185)，其中 V或 I，X2SgSl, (ii)CDR-2H 序列为 SixiX2Sggx3Tx4YADSVKG (SEQ ID NO: 186)，其中 X1SySGJ2 为P或S，&为A或F，X 4为N或D，以及 (iii)CDR-3H 序列为 GNYFDY(SEQ ID N0:3)或 GLAAPRS(SEQ ID N0:11)。 在一个实施方案中，本专利技术提供了包含⑶R-1L、⑶R-2L和⑶R-3L的分离的轻链可 变区，其中 (i)CDR-lL序列为 AGXALXAXeXASGEQ ID NO :187)，其中 X1SsajSIX2* D、E 或 Q，X3为 K、S、N、I 或 A，X 4为 G 或 R，X 5为 D、S、H、E 或 N，X 6为 E、Y、Q、R 或 N，X 7为 Y、 F 或 S 以及父8为 A 或 S ;或 SGSX !SNX2X3X4X5X6X 7X8 (SEQ ID NO : 188)，其中 X1S S 或 T，X 2为 I 或L，父3为E或G，X 4为T、S或N，X 5为N或Y，X 6为T、P、A或Y，X 7为V或L以及X 8为N、I 或 Y ;或 X1Gx2Sx3DX4GX5YDYVS (SEQ ID NO: 189)，其中 n，x4Si 或V 以及X5Ss或A， (ii)CDR-2L 序列为 X1X2X3X4X5PS (SEQ ID NO :190)，其中 X1Sq'D、T、Y、S 或 A，X2 为D、N、S、T、V或V，父3为D、N、S、T或Y，X 4为Q、K、N或L以及X 5为R或L，以及 (iii)其中 CDR-3L 序列为 AX1WX2X3X4X5X 6X7X8 (SEQ ID NO: 191)，其中 X1S 厶或丁， 父2为D或G，X 3为R或无氨基酸，X 4为S、F或N，X 5为S、T或N，X 6为S、T或P，X 7为A、V、 UI 或 Y 以及 Xi^V或 L ;或 AX WDDX2LX3X4X5X6 (SEQ ID NO: 192)，其中 X1SAJSTJ2S N或 s，X3为n、I 或g，乂4为G或 s，X5Sp、w或 V 以及Xf^v或 L;或Mystitx1LUseq id NO :193)，其中 X1Sa 或 τ。 在一个实施方案中，本专利技术提供了包含⑶R-1L、⑶R-2L和⑶R-3L的分离的轻链可 变区，其中 (i) CDR-IL 序列为 RASX1X2X3X4X5X 6X7YX8X9 (SEQ ID NO : 194)，其中父!为 Q、E 或 H，X2 为S、R或N，X3为V、I或L，X4S S、R、G或N，X 5为S或N，X 6为S、N、W或D，X 7为G或无氨 基酸，乂8为L或F以及X 9为A、G、M或S， (ii)cDR-2L 序列为 Gasx1RM^seq id no :195)，其中 X1Ssjj 或 N，以及 (iii)CDR-3L序列为 QQXAXAXsXf^XjSEQ ID NO :196)，其中 X1SfSYJ2SDi G或Y，X3S S、T或N，X 4为S、L或W，X 5为P或无氨基酸，X 6为P或T，X 7为L、I、V、P、W或 Y以及Xi^T或S。 在本专利技术的实施方案中，所述抗体为表2中显示的抗体。在本专利技术的实施方案中， 所述抗体包含具有SEQ ID NO :4的重链可变结构域。在本专利技术的实施方案中，所述抗体包 含具有SEQ ID NO :28的轻链可变结构域。在本专利技术的另一个实施方案中，所述抗体包含具 有SEQ ID NO :32的轻链可变结构域。 在本专利技术的实施方案中，所述抗体用于中和VEGFR2的激活的方法，包括将细胞有 有效量的所述抗体接触。 在本专利技术的另一个实施方案中，所述抗体用于抑制受试者的血管生成的方法，包 括施用有效量的抗体。在某些这样的实施方案中，将所述抗体与有效量的rho相关激酶 2(R0CK2)拮抗剂一起施用。 在本专利技术的另一个实施方案中，所述抗体用于治疗受试者的赘生物或减少肿瘤生 长的方法，所述方法包括施用有效量的所述抗体。在某些这样的实施方案中，将所述抗体与 有效量的表皮生长因子受体（EGFR)拮抗剂一起施用。在某些这样的实施方案中，将所述抗 体与有效量的fms-样酪氨酸激酶受体（flt-1)拮抗剂一起施用。在其它这样的实施方案 中，将所述抗体与有效量的rho相关激酶（ROCK)拮抗剂一起施用。在其它这样的施用方案 中，将所述抗体与有效量的基质金属蛋白酶拮抗剂一起施用。 附图简述 图IA-C分别显示通过噬菌体展示鉴定的本专利技术的抗VEGFR2抗体的人重链、λ轻 链和κ轻链可变区序列。 图2显示本专利技术的抗体对hVEGFR2 (顶）的结合以及含有hVEGFR2的结构域2和 3的构建体（中）。底图框显示配体（VEGF165)阻断。 图3显示本专利技术的Mab 101和102抑制过表达KDR(人VEGFR2)的猪主动脉内皮 (PAE)细胞中的VEGFR2、AKT和MAPK的VEGFA-刺激的磷酸化。 图4显示Mab 104、105、106和108阻断hVEGFR2和VEGF165配体的结合。在单独 的实验中对于Mab 103、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合于人VEGFR2的分离的抗体或其片段，其包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含CDR‑1H、CDR‑2H和CDR‑3H序列，其中：(i)所述CDR‑1H序列为GFTFSWYX1MX2(SEQ ID NO：185)，其中X1为V或I，X2为G或L，(ii)所述CDR‑2H序列为SIX1X2SGGX3TX4YADSVKG(SEQ ID NO：186)，其中X1为Y或G，X2为P或S，X3为A或F，X4为N或D，以及(iii)所述CDR‑3H序列为GNYFDY(SEQ ID NO：3)或GLAAPRS(SEQ ID NO：11)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z朱，D卢，
申请(专利权)人：卡德门企业有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US