一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，包括如下步骤：①从新鲜猪血中分离出血细胞；②从血细胞只能怪提取出血红蛋白粗提液；③纯化血红蛋白，并测定其纯度：在步骤②中得到的血红蛋白粗提液中加入抗氧化剂真空脱气，并通入N2保护，于60℃水浴加热30min使杂蛋白沉淀，然后离心取上清液；纯化后的血红蛋白溶液加入10mg/ml甘油后置于4℃冰箱中保存备用；最后再测定血红蛋白含量；④合成亚硝基血红蛋白：在纯化后的血红蛋白中加入NaOH，同时加入亚硝酸钠、维生素C，调节pH为酸性，加热至50-70℃保持25-45min，真空冷冻干燥后生成红色粉状物即为亚硝基血红蛋白。该方法工艺简单、所需设备要求较低，适合工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种食品添加剂的生产方法，特别涉及。
技术介绍
亚硝基亚铁血色原通常被认为是能使腌肉发色的物质。肉经亚硝酸盐(或硝酸盐)腌制后产生红色的一氧化氮血红蛋白(HbNO)，在盐和加热的作用下又会因珠蛋白变性而转变成比较稳定的色素一亚硝基亚铁血色原，是一种粉红色的色素。亚硝基血红蛋白与亚硝基亚铁血色原结构的一致性决定了它将是一种很安全无污染的肉制品添加剂。作为合成亚硝基血红蛋白原料之一的血红蛋白来源广泛且安全可靠。据资料显示,猪血占猪活体总重的5%，屠宰后所能收集到的血液约占总量的60% -70%，猪血中蛋白质含量约19%，其中主要为血红蛋白，占全血蛋白质总量的2/3。中国从1993年以来，肉类生产量一直居于世界第一的位置。因此，用猪血作为原料合成亚硝基血红蛋白在经济上是切实可行的。而且，猪血营养丰富，全血含有17%-21%的蛋白质，从氨基酸组成来看，血液蛋白质是一种优质蛋白质，尤其是赖氨酸含量很高，接近9.0%，其必需氨基酸含量也高于人乳和全蛋。从蛋白质互补的角度来看，由于谷物蛋白质中赖氨酸含量低，蛋氨酸和肮氨酸含量高，异亮氨酸含量适当，血液的高赖氨酸含量使其成为很好的谷物蛋白互补物且易吸收。因此，用猪血合成亚硝基血红蛋白不仅不会破坏血液的营养价值，而且能够提高动物血资源综合利用率和提高产品附加值。故亚硝基血红蛋白将是一种多功能的食品添加剂，具有广泛的开发和应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的提供，该方法利用溶胀、离心相结合的方法从猪血中分离纯化血红蛋白，然后将血红蛋白与亚硝酸钠反应合成亚硝酸血红蛋白。该方法工艺简单、所需设备要求较低，适合工业化生产。如上构思，本专利技术的技术方案是:，其特征在于:包括如下步骤:①从新鲜猪血中分离出血细胞；②从血细胞只能怪提取出血红蛋白粗提液；③纯化血红蛋白，并测定其纯度:在步骤②中得到的血红蛋白粗提液中加入抗氧化剂真空脱气，并通入N2保护，于60°C水浴加热30min使杂蛋白沉淀，然后离心取上清液；纯化后的血红蛋白溶液加入10mg/ml甘油后直于4 C冰箱中保存备用；最后再测定血红蛋白含量；④合成亚硝基血红蛋白:在纯化后的血红蛋白中加入NaOH，同时加入亚硝酸钠、维生素C，调节pH为酸性，加热至50-70°C保持25-45min，真空冷冻干燥后生成红色粉状物即为亚硝基血红蛋白。上述步骤②的具体方法是:加入血红蛋白体积1.5倍的蒸馏水，混合均匀后电磁搅拌30min ;当溶液由暗红转为鲜红时，将溶液以3000r / min离心15min，弃去沉淀，得血红蛋白粗提液。上述步骤③测定血红蛋白含量的方法是:①AHD-575试剂的配制:准确称取聚乙二醇辛基苯基醚25.0g，加入0.1moI/LNaOH溶液定容至1L，过滤，室温下保存备用；②标准曲线的制作:将猪血红蛋白标准品配制成不同浓度的溶液，分别吸取0.1ml加入到30mLAHD-575试剂中，静置反应5min，于575m波长下，以AHD-575试剂为空白，测定吸光度；以猪血红蛋白标准品的浓度(g/L)为横坐标，以吸光度为纵坐标，得出血红蛋白溶液浓度X与吸光度值Y的关系的标准线及回归方程；③于洁净的烧杯中，吸取血红蛋白提取液样品0.1ml,以AHD-575的方法测定吸光度A575，查标准曲线求得血红蛋白含量(g/L)。上述步骤④血红蛋白:亚硝酸钠:维生素C按照摩尔比=1:1?3:4?8的比例配制。上述步骤④中调节pH为5.0?6.0。上述步骤④中加入0.5gNa0H。本专利技术具有如下的优点和积极效果:①本专利技术利用溶胀、离心相结合的方法从猪血中分离纯化血红蛋白，然后将血红蛋白与亚硝酸钠反应合成亚硝酸血红蛋白。该方法工艺简单、所需设备要求较低，适合工业化生产。②本专利技术采用原料之一猪血，来源丰富且成本低。③本专利技术的原料猪血含有丰富的营养价值，因此合成的亚硝基蛋白中携带了多种人体所需的营养物质。④本专利技术制备的产品亚硝基血红蛋白是一种安全无污染的食品添加剂。【附图说明】:图1是血红蛋白标准曲线图；图2是硝基血红蛋白丙酮提取液紫外扫描图。【具体实施方式】:下面结合实施例对本专利技术做进一步说明:实施例1:，包括如下步骤:1.血细胞的分离:取100mL新鲜猪血快速添加Ig柠檬酸钠抗凝剂，用玻璃棒沿一个方向搅拌与猪血充分混勻，低温运回实验室。搅拌5min后过滤,3000r/min离心30min,弃上层血清；加入0.9%的生理盐，搅拌均匀，3000r/min离心lOmin、弃上清(重复两次)，收集红血球并记录体积。2.提取血红蛋白:加入血细胞体积1.5倍的蒸馏水，混合均匀后电磁搅拌30min ；当溶液由暗红转为鲜红时，将溶液以3000r / min离心15min，弃去沉淀，得血红蛋白粗提液。3.血红蛋白纯化:将血红蛋白粗提液中加入适量抗氧化剂Vc，真空脱气，并通入N2保护，于60°C水浴加热30min使杂蛋白沉淀，3000r / min离心15min，取上清液。纯化后的血红蛋白溶液加入10mg/ml甘油后直于4 C冰箱中保存备用。血红蛋白纯度测定:将猪血红蛋白标准品配制成不同浓度的溶液，分别吸取0.1ml加入到30mLAHD-575试剂中，静置反应5min，于575m波长下，以AHD-575试剂为空白，测定吸光度。以猪血红蛋白标准品的浓度(g/L)为横坐标，以吸光度为纵坐标，得出血红蛋白溶液浓度X与吸当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：①从新鲜猪血中分离出血细胞；②从血细胞只能怪提取出血红蛋白粗提液；③纯化血红蛋白，并测定其纯度：在步骤②中得到的血红蛋白粗提液中加入抗氧化剂真空脱气，并通入N2保护，于60℃水浴加热30min使杂蛋白沉淀，然后离心取上清液；纯化后的血红蛋白溶液加入10mg/ml甘油后置于4℃冰箱中保存备用；最后再测定血红蛋白含量；④合成亚硝基血红蛋白：在纯化后的血红蛋白中加入NaOH，同时加入亚硝酸钠、维生素C，调节pH为酸性，加热至50‑70℃保持25‑45min，真空冷冻干燥后生成红色粉状物即为亚硝基血红蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：程燕，李煜，符绍辉，程榆茗，
申请(专利权)人：天津宝迪农业科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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