一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用技术

本发明专利技术公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤：（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，超临界CO2萃取；（2）萃取物通过经D101大孔树脂柱层析，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化，收集栗木鞣花素组分；（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，即得栗木鞣花素。本发明专利技术首先在国内建立了栗木鞣花素的提纯工艺，得到高纯度的栗木鞣花素，而且本发明专利技术采用超临界萃取和高速逆流色谱法结合，较制备液相色谱等方法具有环保、制备量大、安全稳定、易于工业化等优点。栗木鞣花素具有抗肿瘤促进作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种栗木鞣花素的制 备方法及抗肿瘤应用。
技术介绍
栗木親花素（Castalagin)，是从使君子科（Combretaceae)榆绿木变种 Anogeissusacuminata{Roxb.exDC. )Guill. &Pers.var.IanceolataWall,exC.B.Clarke 的莖分离出的一种親质类化合物，为类白色粉末，分子式为C19H18O4，分子量为934. 34,结构 式为药理研究表明，栗木鞣花素具有抗高血压活性，静注本品降低自发性高血压大i的 血压，这是由于抑制交感神经的活性和直接扩张血管所致；具有细胞毒活性，对黑色素瘤 RPMI- 7951 的ED50 为 0? 79yg/ml。目前，国内对栗木鞣花素的研宄较少，尚处于起步阶段。因此，研宄出一种制备栗 木鞣花素的方法是非常必要的，对于扩大药源以及榆绿木茎皮的综合利用具有很重要的意 义。
技术实现思路
为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种栗木鞣花素的制备 方法及抗肿瘤应用。 为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案： 一种栗木鞣花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1)取榆绿木茎皮，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界〇)2萃 取，解析，收集榆绿木茎皮萃取物； (2) 萃取物与DlOl大孔树脂按重量比1:1-2. 5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90% 乙醇洗脱，流速为〇. 8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品； (3) 采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的栗木鞣花素，其两相溶剂系统为石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动 相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分； (4) 将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素。 所述步骤（1)中超临界萃取温度为45-55°C，萃取压力为30-43MPa，解析温度为 25-42°C，解析压力为 6-10MPa，CO2流量为 15-20L/h。 所述步骤（3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为 5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相为流动相，主机转速700-1000rpm，流速为l-3ml/ min〇 所述制备的栗木鞣花素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、 胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。 (1)采用超临界提取技术对环境无污染；（2)通过DlOl大孔树脂对乙酰精宁类化 合物的吸附和洗脱，操作简单、分离效果好；（3)采用高速逆流色谱制备工艺，较制备液相 色谱制备工艺而言，克服了样品吸附、损失和峰形拖尾等缺点，且具有制备量大、易于工业 推广等优点；（4)添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。【具体实施方式】 实施例1 : 栗木鞣花素的制备 取榆绿木茎皮，经粉碎处理，称取lkg，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，通入超临界CO2流体，CO2流量为18L/h，超临界萃取温度为48°C，萃取压力为32MPa，解析温度为29°C， 解析压力为7MPa，进行超临界CO2萃取lh，解析，收集萃取物，与DlOl大孔树脂按重量比 1:1. 5充分混匀，装入层析柱，依次用去离子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脱，流速为 0. 8BV/h，收集高浓度乙醇洗脱液，减压浓缩，得粗品；采用高速逆流色谱法分离纯化粗品中 的栗木鞣花素，以体积比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满 高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，主机转速lOOOrpm，泵入下相做流动相，流速为3ml/ min，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分，进行真 空浓缩，析出结晶，滤出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素，含量97. 6%。 实施例2: 栗木鞣花素的抗肿瘤应用 1、材料 动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。 细胞株：Sarc〇ma180腹水型瘤株（S180)，由中国科学院上海药物研宄所提供。 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S18tl瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生 理盐水对照组（NS组)、阳性对照组、栗木鞣花素低剂量组（lmg/kg)、中剂量组（2mg/kg)、高 剂量组（4mg/kg)。接种24h后栗木鞣花素给药组灌胃给药，连续7,阳性对照组试验期间腹 腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药 24h后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。 3、结果 本专利技术植物提取组合物对小鼠S18tl皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为 68. 32-76. 29%，结果见表 1。 抑瘤率（％)=( 1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）X% 注：与阳性对照组相比，#P< 0. 01。【主权项】1. 一种栗木鞣花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取榆绿木茎皮，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界〇)2萃 取，解析，收集榆绿木茎皮萃取物； (2) 萃取物与DlOl大孔树脂按重量比1:1-2. 5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90% 乙醇洗脱，流速为〇. 8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品； (3) 采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的栗木鞣花素，其两相溶剂系统为石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动 相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分； (4) 将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素。2. 根据权利要求1所述的栗木鞣花素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1冲超临界 萃取温度为45-55°C，萃取压力为30-43MPa，解析温度为25-42°C，解析压力为6-10MPa，CO2 流量为15-20L/h。3. 根据权利要求1所述的栗木鞣花素的制备方法，其特征在于：所述步骤（3)中石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8 :3-5:4-6:2-3,取上相做固定相，下相为 流动相，主机转速700-1000rpm，流速为l-3ml/min。4. 根据权利要求1~3所述方法制备的栗木鞣花素，在其口服配方中添加肠吸收促进 剂。5. 根据权利要求4所述的栗木鞣花素，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、 胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。【专利摘要】本专利技术公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及。制备方法包括以下步骤：（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，超临界CO2萃取；（2）萃取物通过经D101大孔树脂柱层析，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化，收集栗木鞣花素组分；（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，即得栗木鞣花素。本专利技术首先在国内建立了栗木鞣花素的提纯工艺，得到高纯度的栗木鞣花素，而且本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种栗木鞣花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界CO2萃取，解析，收集榆绿木茎皮萃取物；（2）萃取物与D101大孔树脂按重量比1:1‑2.5充分混匀，装入层析柱，然后用30‑90%乙醇洗脱，流速为0.8‑2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的栗木鞣花素，其两相溶剂系统为石油醚‑乙酸乙酯‑甲醇‑水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分；（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，杨成东，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32