一种银杏内酯B制备方法及其制备得到的银杏内酯B技术

本发明专利技术提供一种银杏内酯B的制备方法及其制备得到的银杏内酯B。本发明专利技术摒弃了有毒的有机溶剂，代之以乙醇和水并配合分离柱、水处理以及中低浓度乙醇重结晶技术用于银杏内酯B的分离纯化，得到高纯度的银杏内酯B，杂质含量少且未检出白果内酯和致敏性成分银杏酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然药物化学领域，具体涉及一种银杏内酯B的制备方法及其制备得 到的银杏内酯B。
技术介绍
银杏内酯属于萜类化合物，是银杏叶中一类重要的活性成分，均具有拮抗血小板 活化因子（PAF)受体、甘氨酸（Gly)受体、y-氨基丁酸（GABA)受体的作用，其中拮抗PAF 受体作用表现为能高度选择性地拮抗由PAF诱导的血小板聚集，从而防止血栓的形成，拮 抗Gly受体、GABA受体作用表现为对中枢神经系统的保护作用；诘抗PAF受体活性研宄表 明，银杏内酯B(GB)的活性最强，其次为银杏内酯A(GA)，再次为银杏内酯C，最后为银杏内 酯M(仅存在于银杏根皮中，叶中不含）。 银杏内酯B在银杏叶中的含量较低，约为0.2%，在银杏叶提取物中含量在1%~ 2%，且银杏各内酯成分结构相似、性质差异小，因而从银杏叶、银杏叶提取物中分离银杏内 酯B具有很大的困难。现有的银杏内酯B的分离纯化报道较多，但绝大部分都用到乙酸乙 酯、丙酮、甲醇等有机溶剂，对工业化生产带来诸多不便和安全隐患。 银杏内酯B分离纯化方法已经报道很多，如专利200510063407.X、200310104958、 200710050245. 5、200810046162. 3中所提到的方法，分离纯化过程中均用到有机溶剂，如 正丁醇、甲醇、乙酸乙酯、正己烷，且所得银杏内酯B的收率普遍很低，溶剂消耗量较大， 不具备工业应用价值；再如专利200910184916. 6中所提到的方法，以纯度>95%的银杏 总内酯为原料，采用重结晶_超临界〇)2萃取组合工艺进行纯化，得到纯度>99. 5 %的单 体GA、GB，该方法对起始原料要求较高，且采用超临界0)2萃取对设备要求较高；又如专利 00117758. 3采用制备型高效液相色谱分离制备GA、GB，且液相流动相为乙酸乙酯和石油醚 的混合液，不适宜工业化大生产。 为了解决现有问题，本专利技术摒弃了有毒的有机溶剂，代之以乙醇和水并配合分离 柱、水处理以及中低浓度乙醇重结晶技术用于银杏内酯B的分离纯化，得到高纯度的银杏 内酯B，杂质含量少且未检出白果内酯和致敏性成分银杏酸。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的一个目的在于提供一种银杏内酯B的制备方法及其制备 得到的银杏内酯B。本专利技术所述的银杏内酯B制备方法，摒弃了有毒的有机溶剂，仅应用乙 醇和水，并配合分离柱和重结晶技术即可得到高纯度的银杏内酯B，含量多98%，并且白果 内酯和银杏酸均未检出。 所述制备方法包括如下步骤： (1)以银杏叶为原料，中高浓度乙醇热回流提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，过 分离柱，纯水、乙醇分别洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得银杏叶提取物； (2)高浓度乙醇溶解银杏叶提取物，过酸性氧化铝柱，高浓度乙醇洗脱，收集洗脱 液，浓缩，得总银杏内酯粗品； ⑶向总银杏内酯粗品加入纯水，30~90°C下溶解搅拌，过滤，收集滤饼，浓缩，干 燥，得干品； (4)向干品加中低浓度乙醇，重结晶，得银杏内酯B。 优选的， 所述步骤⑴中，以银杏叶为原料，粉碎，8-12倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量 (g)比值，V/W) 50%~90%乙醇热回流提取1-2次，每次1-2小时； 更优选的，10倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/W) 60% -80%的乙醇 热回流提取，提取2次，每次2小时。 优选的，所述步骤（1)中，乙醇热回流提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩体积至 3-5倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/W); 更优选的，浓缩体积至4倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/W)。 优选的，所述步骤（1)中，分离柱为HPD450、DM130或HPD700大孔树脂柱，洗脱液 乙醇的体积百分浓度为60 %~80%; 更优选的，分离柱为HPD450大孔树脂柱，乙醇洗脱浓度为70%。 所述步骤⑴的优选技术方案为： 以银杏叶为原料，粉碎，8-12倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/W) 50 %~90 %乙醇热回流提取1~2次，每次1-2小时，合并提取液，浓缩至乙醇尽，且浓缩 体积至3-5倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/W)，置于0°C_5°C冷藏12-24小 时，取出，过滤，滤液中缓慢滴加95 %乙醇至溶液醇浓度达75 %，置于0°C_5°C冷藏12-24 小时，取出，过滤，浓缩至乙醇尽，滤液加入HPD450或DM130或HPD700大孔树脂柱，先用纯 水洗脱，弃去洗脱液，再用60-80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得银杏叶提取物。 所述步骤（1)更优选的技术方案为： 以银杏叶为原料，粉碎，用10倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/ W) 60% -80%乙醇加热回流，提取2次，每次2小时，合并提取液，低温减压浓缩至乙醇尽，且 浓缩体积至4倍（乙醇体积（ml)与银杏叶重量（g)比值，V/W)，置于0°C_5°C冷藏12-24 小时，取出，过滤，滤液中缓慢滴加95 %乙醇至溶液醇浓度达75 %，置于0°C-5 °C冷藏12-24 小时，取出，过滤，浓缩至乙醇尽，滤液加入HPD450大孔树脂柱，先用纯水洗脱，弃去洗脱 液，再用70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得银杏叶提取物。 还优选的，所述步骤（2)中，银杏叶提取物，用95%乙醇溶解1~2次，合并溶解 液，加至重量是银杏叶提取物10~30倍的酸性氧化铝（100-300目）层析柱，用2-4倍（乙 醇体积（ml)与银杏叶提取物重量（g)比值，V/W) 95%乙醇洗脱，收集洗脱液； 更优选的，酸性氧化铝的重量是银杏叶提取物重量的20倍，用3倍（乙醇体积 (ml)与银杏叶提取物重量（g)比值，V/W)95%乙醇洗脱。 还优选的，所述步骤（3)中，总银杏内酯粗品中加入40-80倍（纯水体积（ml)与 总银杏内酯粗品重量（g)比值，V/W)纯水，40-90°C搅拌溶解0.5-1小时，趁热过滤，收集滤 饼，浓缩至干，得干品； 更优选的，加入50-70倍（纯水体积（ml)与总银杏内酯粗品重量（g)比值，V/W) 纯水，于50°C-80°C搅拌溶解0. 5小时。 还优选的，所述步骤（4)中，向步骤（3)所述得到的干品中加20-50倍（乙醇体积 (ml)与干品重量（g)比值，V/W)5% -50%乙醇； 更优选的，加入40倍（乙醇体积（ml)与干品重量（g)比值，V/W) 15% -30 %乙醇。 所述步骤（4)的优选技术方案为： 向步骤（3)得到的干品中，加入20-50倍（乙醇体积（ml)与干品重量（g)比值，V/ W)5%-50%的乙醇，加热搅拌溶解，过滤，收集滤液，放置室温后继续于0-10°C冷藏12-24 小时析晶，过滤，得湿晶，所得湿晶重复上述过程1-3次，收集湿晶，于50°C真空干燥，得银 杏内酯B ; 所述步骤（4)更优选的技术方案为： 向步骤（3)得到的干品中，加入40倍（乙醇体积（ml)与干品重量（g)比值，V/ W) 15% -30%的乙醇，加热搅拌溶解，过滤，收集滤液，放置室温后继续于0-10°C冷藏当前第1页1 2 3 4 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种银杏内酯B的制备方法，其特征在于：该银杏内酯B由以下步骤制备：(1)以银杏叶为原料，中高浓度乙醇热回流提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩，过分离柱，纯水、乙醇分别洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得银杏叶提取物；(2)高浓度乙醇溶解银杏叶提取物，过酸性氧化铝柱，高浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，得总银杏内酯粗品；(3)向总银杏内酯粗品加入纯水，30～90℃下溶解搅拌，过滤，收集滤饼，浓缩，干燥，得干品；(4)向干品加中低浓度乙醇，重结晶，得银杏内酯B。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林德良，
申请(专利权)人：北京汉典制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11