本发明专利技术公开了一种利用固体核磁共振内标法测定三类新药甘油磷酸胆碱(GPC)中GPC含量的方法。主要步骤如下：在试样中添加内标六甲基苯，采用Bruker Avance III 400MHz核磁共振波谱仪及宽带固体CP/MAS探头，采集样品的13C NMR谱图，进行谱峰归属，通过GPC、六甲基苯所含的甲基基团的13C峰面积进行计算GPC的含量。本发明专利技术对GPC的结构鉴定和定量分析同步完成，解决了我国三类新药GPC基准物质含量测定的技术问题，对于三类新药GPC开发及维护消费者利益，促进我国GPC药业健康发展，具有十分重要的意义，也可为后续研究核磁定量分析其他药物提供参考。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于S类新药甘油磯酸胆碱（Glycero地OS地ocholine，GPC，W下简称 GPC)开发
；具体设及一种利用固体核磁共振内标法测定GPC药物中GPC含量的方 法。
技术介绍
随着世界人口老龄化的速度加快，老年痴呆症已成为危及老年人生命的第四大病 因，严重威胁中老年人的身体健康和生活质量。因此老年性痴呆症的预防和治疗已成为医 药研究的重大课题。甘油磯酸胆碱（简称GPC)是机体内磯脂代谢的产物之一，也是重要 的神经传递介质己酷胆碱（Acetylcholine)的生物合成前体。在体内，GPC最重要的生理 功能在于穿过血脑屏障，为己酷胆碱和磯脂酷胆碱的生物合成提供必要的胆碱。在GPC的 生产和使用方面，国外W大豆磯脂为原料，通过酶解磯脂酷胆碱制备出甘油磯酸胆碱，并将 GPC作为一种脑缺血型中风、阿尔茨海默式痴呆W及多发性脑梗死性痴呆的药物应用于临 床上，同时在保健市场上，50%含量的GPC的产品也已经面世。在我国，目前还没有国家标 准的制剂申请注册。开发S类新药GPC，可W降低其生产成本，减低药价，从而为患者提供更 好的治疗。在新药的研制开发过程中，确定基准物质的含量是该过程的重要环节。赵艳艳 等通过化学鉴别法、薄层色谱法W及红外吸收光谱图建立了GPC的鉴别标准，并建立了测 定其含量的HPLC-ELSD法。利用HPLC测定其含量，前期处理复杂，需要保证GPC从药物中 完全解离出来，测试步骤较多，耗时较长，定量时需要高纯度物质做对照。因此，开发一种简 易可行，能够有效进行GPC含量测定的技术方法对于药物开发及维护消费者利益，促进我 国=类新药行业健康发展，具有十分重要的意义。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术是针对GPC定量分析方面存在的技术难题，提供 一种采用固体核磁共振内标法对GPC药物中GPC含量进行分析的方法。 本专利技术是通过W下技术方案实现的： 一种检测甘油磯酸胆碱中甘油磯酸胆碱含量的方法，其包括如下步骤： 步骤一、选择内标物； 步骤二、对待测物及内标物的各个"C峰进行归属，与有机化合物核磁共振碳谱数 据库中相应的核磁共振碳谱进行比对确认，并明确每个"C峰所对应的原子个数；[000引步骤=、准确称取待测物及内标物，为保证积分的准确性，待测物中甘油磯酸胆碱 的甲基与内标物的甲基的摩尔比控制在1 ;1，W保证待测物的甲基峰和内标的甲基峰面积 相差不大，减少测定误差；研磨混匀后，进行固体"CNMR检测；步骤四、记录试样的固体"CNMR谱，并在傅立叶变换、相位调整、基线校正及化学 位移定标后积分，记录甘油磯酸胆碱甲基基团的峰面积\和内标物六甲基苯的甲基基团的 峰面积Ah。对每一信号进行多次（不少于5次）积分，取平均值或去掉极值后取平均值进 行后面的计算，w提高积分的准确性和重现性； 步骤五、利用所记录的固体"CNMR谱，计算甘油磯酸胆碱的含量，公式为： 扣'抑c=舞X哉X策X100 ....................................(1) 式（1)中：Wwc-待测药品中GPC的质量分数； 一试样中GPC药品的质量分数； Wh-试样中内标物六甲基苯的质量分数；Ae- GPC的甲基基团峰面积；Ah-六甲基苯的甲基基团峰面积；[001引 6-六甲基苯中甲基基团数；3-GPC中甲基基团数；Mg- GPC的摩尔质量，Mg= 257. 5g/mol; Mh-六甲基苯的摩尔质量，Mh= 162. 2g/mol; 实验结果精确至0. 1% (按质量分数计）。 所述内标物的选择标准为；纯度不低于99. 7%，至少含有一个甲基，并在"CNMR 谱图中表现为尖锐的单峰，且与所测样品的谱峰之间不产生干扰。 作为优选方案，所述固体"CNMR检测实验条件如下；"C观察频率为100. 62MHz， 谱宽为38265. 30甜z，"C90°脉冲宽度为3.30ys，质子去禪脉冲宽度为100ys，采样时间 为0. 0134s，弛豫延迟时间为25s，转速为5000化，采样次数为1428次，"C化学位移W甘氨 酸幾基碳信号（相对于TMS5 176. 03)为标准设定。 作为优选方案，进行固体"CNMR检测前，将样品过800ym筛后备用。 作为优选方案，所述内标物为六甲基苯，也可W使用3-(S甲基娃基）-1-丙横酸 钢盐、丙氨酸等。 作为优选方案，对于过筛后样品中不能通过筛子的部分先进行研磨后，再次过筛。 [002引核磁共振内标法用于定量分析的基础是各化学环境中不同"C的吸收面积只与所 包含的"C原子数有关，不需要引入任何校正因子就可直接根据各共振峰的积分值推算所 代表的自旋核的数量。由于NMR法测定药品含量时通常无需专用的药品基准物质，而仅W 已知含量的普通化学物质做参比，就可得到药品的绝对含量，所W特别适用于对新药基准 物质的含量测定。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果： 本专利技术的方法无需复杂的样品前处理，无需分离，直接固体进样，定量时无需化合 物的纯品作为对照标准，可W对无对照品的药品进行含量分析和质量控制，结构鉴定和定 量分析可同步完成，操作简单，分析速度快，成本低，解决了基准物质含量测定的技术问题， 对于S类新药GPC开发及维护消费者利益，促进我国GPC药业健康发展，具有十分重要的意 义，也可为后续研究核磁定量分析其他药物提供参考。【附图说明】[003U图1为实施例1试样的固体"CNMR谱图。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。W下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本专利技术，但不W任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可W做出若干变形和改进。该些都属于本专利技术 的保护范围。当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测甘油磷酸胆碱药物中甘油磷酸胆碱含量的方法，其特征在于，步骤一、选择内标物；步骤二、对待测物及内标物的各个13C峰进行归属，与有机化合物核磁共振碳谱数据库中相应的核磁共振碳谱进行比对确认，并明确每个13C峰所对应的原子个数；步骤三、准确称取待测物及内标物，为保证积分的准确性，待测物中甘油磷酸胆碱的甲基与内标物的甲基的摩尔比控制在1：1，以保证待测物的甲基峰和内标的甲基峰面积相差不大，减少测定误差；研磨混匀后，进行固体13C NMR检测；步骤四、记录试样的固体13C NMR谱，并在傅立叶变换、相位调整、基线校正及化学位移定标后积分，记录甘油磷酸胆碱甲基基团的峰面积AG和内标物六甲基苯的甲基基团的峰面积AH。对每一信号进行不少于5次积分，取平均值或去掉极值后取平均值进行后面的计算，以提高积分的准确性和重现性；步骤五、利用所记录的13C NMR谱，计算甘油磷酸胆碱的含量，公式为：wGPC=wHwG×6AG3AH×MGMH×100...(1)]]>式(1)中：wGPC—待测药品中GPC的质量分数；wG—试样中GPC药品的质量分数；wH—试样中内标物六甲基苯的质量分数；AG—GPC的甲基基团峰面积；AH—六甲基苯的甲基基团峰面积；6—六甲基苯中甲基基团数；3—GPC中甲基基团数；MG—GPC的摩尔质量，MG＝257.5g/mol；MH—六甲基苯的摩尔质量，MH＝162.2g/mol；实验结果精确至0.1％(按质量分数计)；所述内标物的选择标准为：纯度不低于99.7％，至少含有1个甲基；内标物的甲基基团在13C NMR谱图中表现为尖锐的单峰，与所测样品的谱峰之间不产生干扰。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：代博娜，吴节莉，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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