一种脆弱类杆菌选择培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种脆弱类杆菌培养基。属于检验微生物培养领域，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化钠；琼脂；升麻甙；猪胆粉；缬氨酸，蒸馏水加至1000ml。本发明专利技术与现有技术相比较，具有检出可靠，脆弱类杆菌分离率高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物检验领域，具体涉及一种脆弱类杆菌培养基。
技术介绍
脆弱类杆菌（Bacterooides Fragilis，BF）为革兰阴性短杆菌有荚膜，无芽胞，部分有菌毛，专性厌氧。BF是人体正常菌群的组成部分，也是临床上重要的条件致病菌，可引起人体很多部位感染，感染症状遍及临床各科，检出率高，占临床厌氧菌分离株的25%、类杆菌分离株的50%，其中腹泻患者BF分离率达9.2%~26.8%。BF的临床测定主要为PCR和细胞培养，PCR的敏感度高，5小时既可以获得结果，具有快速和敏感的特性，但是存在以下缺陷：①粪便标本中含有PCR抑制物，易造成假阴性结果；②需要复杂的实验条件，费用较高。而细胞培养是BF目前最可靠的检验方法，但BF的专性厌氧和苛养性质，导致其培养时间较长，在绝对无氧的情况下，使用2d开始有个别样本开始生长，7d无阳性菌落出现方能达到阴性检验标准。由于鉴定时间长，所以上述的检验很难指导临床治疗，延误时机。目前BF培养的使用的培养基多为胆汁七叶苷（BBE）琼脂，其成分含有胆汁，胆汁用以抑制对之敏感的厌氧菌，只有耐胆汁的脆弱类杆菌和可变梭杆菌、死亡梭杆菌不被抑制，从而起到选择性培养的目的。但是BBE培养基存在下述缺陷：①不能抑制可变梭杆菌、死亡梭杆菌的生长；②对于需氧菌和兼性厌氧菌的灭杀效果不了，因此要加入庆大霉素100mg/L，但庆大霉素对于BF同样产生微弱的抑制作业，导致其生长缓慢；③如果不加入庆大霉素，就需要严格的无氧环境，由于基层医院检验科大多缺乏绝对无氧检验设备，因此大多用“厌氧缸培养法”，所谓的厌氧缸即干燥缸，通过物理化学的方法耗尽缸内氧气，造成厌氧环境。厌氧缸法的氧气耗尽需要时间，影响了专性厌氧杆菌BF的生长和分离。故寻找一种新的培养基，能够在“厌氧缸培养”的环境下快速检测，对于基层临床医院尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于粪便标本的脆弱类杆菌生长的选择培养基。本专利技术解决其技术问题的技术方案是：一种脆弱类杆菌选择培养基，其特征在于，每升培养基中含有：胰酪蛋白胨10.0g；葡萄糖2.0g；酵母粉5.0g；氯化钠5.0g；琼脂15.0g；升麻甙3g；猪胆粉20g；缬氨酸0.1g；无菌小牛血清100ml；蒸馏水加至1000ml。上述培养基的制备方法为：称取胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化钠；琼脂；升麻甙；猪胆粉；缬氨酸，用蒸馏水溶解、混匀，121℃下灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌小牛血清混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。本专利技术与现有技术相比较，具有检出可靠、脆弱类杆菌分离率高的特点。1、所述的胰酪蛋白胨含有多种糖类、氨基酸、维生素和微量元素为脆弱类杆菌生长提供能量，葡萄糖提供碳源，酵母粉富含蛋白质、氨基酸、多肽、核苷酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，促进脆弱类杆菌的繁殖和生长；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂为培养基的凝固剂；2、缬氨酸为厌氧菌营养剂；L-高精氨酸为激活剂，促进缬氨酸的吸收；γ-氨基丁酸为营养增强剂，促进脆弱类杆菌生长。3、猪胆粉和升麻甙（Cimicifugoside）的使用：猪胆粉中的胆汁成分用以抑制对之敏感的厌氧菌，而升麻甙用以分离脆弱类杆菌和可变梭杆菌、死亡梭杆菌，其分离作用在于可以选择性抑制厌氧梭杆菌属核苷透膜转运，作用途径为梭杆菌属细胞壁上的外膜蛋白OMP和fadA黏附蛋白，而由于脆弱类杆菌无上述特异性蛋白，因此升麻甙对于脆弱类杆菌无杀灭作用。基础实验证实：将脆弱类杆菌和可变梭杆菌、死亡梭杆菌菌株分别接种到含有3g/L升麻甙的胆汁琼脂培养基和普通胆汁琼脂培养基，于37℃厌氧培养7d，脆弱类杆菌阳性检出率100%，而可变梭杆菌、死亡梭杆菌菌株阳性检出率为0%。由此证实，升麻甙对于可变梭杆菌、死亡梭杆菌具有较好的灭菌作用，且对于脆弱类杆菌无明显影响。4、热变形小牛血清具有选择性的抗菌效果，其热变形方法为：取无菌小牛血清80℃下加热10min，在45℃下加入灭菌胰蛋白酶酶解90min，酶与底物的质量比为1:150。普通的无菌小牛血清仅仅起到营养基质的作用，并无选择性的抗菌效果，而热变形小牛血清抗菌性质针对需氧菌，一方面改变需氧菌细胞壁结构，造成通透性增加而死亡，另一方面可以降低培养基的氧化还原电势，促进无氧环境而加速需氧菌死亡，而该种抗菌作用仅针对于需氧菌，对于厌氧菌则无效。通过实验将同一需氧的大肠杆菌菌株和厌氧的梭杆菌菌株分别接种到厌氧培养基和配方中添加了80ml/L的热变形小牛血清的优化厌氧培养基上，于密封干燥缸环境37℃下培养，24h、48h鉴定，24h时添加热变形小牛血清大肠杆菌阳性检出率为50%，没有添加热变形小牛血清的培养基上大肠杆菌阳性检出率为80%；48h检测结果为添加热变形小牛血清的培养基梭杆菌阳性检出率70%，没有添加热变形小牛血清的培养基上梭杆菌阳性检出率20%；由此证实热变形小牛血清在厌氧缸内对需氧菌有较好的抑制效果，且能通过加速无氧环境而促进厌氧菌生长。5、石菖蒲（Acorus gramineus）属菖蒲科，为禾草状的多年生草本植物，药用部分为根茎部位。现代医学研究表明，石菖蒲含α-细辛醚等挥发油及糖类、有机酸、氨基酸、无机元素等成分，有消肿止痛、化痰开窍、痈疽疥癣等作用，石菖蒲水提液是良好的营养强化剂，石菖蒲水浸剂（1:3），在试管内对堇色毛癣菌、同心性毛癣菌、星形奴卡菌等皮肤真菌均有不同程度的抑制作用。有报告指出，石菖蒲煎剂有杀死腹水癌细胞的作用。Masuda T等研究发现石菖蒲中的α-细辛醚对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌等均有抑制作用。实验证实，200g/L浓度下的石菖蒲水煮液对于厌氧菌并无杀灭作用，以厌氧培养基为对照，以厌氧培养基配方中加入200g/L石菖蒲水煮液为实验组，接种脆弱类杆菌菌株，96h的阳性检出率分别为70%和60%，二者比较无明显差异（P>0.05）。具体实施方式以下结合实际情况，对本专利技术的具体实施方式作详细说明。实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有：胰酪蛋白胨10g；葡萄糖2g；酵母粉5g；氯化钠5g；琼脂15g；升麻甙3g；猪胆粉20g；缬氨酸0.1g；无菌小牛血清100ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法：称取胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化钠；琼脂；升麻甙；猪胆粉；缬氨酸，用蒸馏水溶解、混匀，121℃下灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌小牛血清混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。本实施例中的无菌小牛血清仅仅起到营养基质的作用，并无选择性的抗菌效果。实施例2，配制1000ml培养基的配方中含有：胰酪蛋白胨8g；葡萄糖5g；酵母粉8g；氯化钠5g；琼脂15g；升麻甙2.5g；猪胆粉20g；缬氨酸0.3g；无菌热变形小牛血清50ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法：称取胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化钠；琼脂；升麻甙；猪胆粉；缬氨酸；用蒸馏水溶解、混匀，121℃下灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌热变形小牛血清混匀，灭菌蒸馏水定容本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脆弱类杆菌选择培养基，其特征在于，每升培养基中含有：胰酪蛋白胨10g；葡萄糖2g；酵母粉5g；氯化钠5g；琼脂15g；升麻甙3g；猪胆粉20g；缬氨酸0.1g；无菌小牛血清100ml；蒸馏水加至1000ml。

【技术特征摘要】
1.一种脆弱类杆菌选择培养基，其特征在于，每升培养基中含有：胰酪蛋白胨10g；葡萄糖2g；酵母粉5g；氯化钠5g...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟伟萍，
申请(专利权)人：钟伟萍，
类型：发明
国别省市：山东;37