纤维二糖水解酶的变体制造技术

本发明专利技术公开了红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)Cel7A(原为里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I或CBH1)的许多同源物和变体，编码其的核酸以及其产生方法。所述同源物和变体纤维素酶具有家族7A的糖基水解酶的氨基酸序列，其中一个或多个氨基酸残基被置换和/或缺失。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2012年12月12日提交的美国临时专利申请序列No.61/736,344的优先权权益，并且以引用的方式全文并入本文中。
本公开总体上涉及糖苷水解酶变体，特别是纤维二糖水解酶(CBH)的变体。还描述了编码CBH变体的核酸、包含CBH变体的组合物、产生CBH变体的方法以及使用所述变体的方法。政府权利本专利技术是在由美国能源部授予的基金号DE-FC36-08GO18078下、在政府支持下进行的。政府具有本专利技术的某些权利。专利技术背景纤维素和半纤维素是通过光合作用产生的最丰富的植物材料。它们能被许多会产生能够将聚合物底物水解成单体糖的胞外酶的微生物(包括细菌、酵母和真菌)降解并且用作能源(Aro等人，2001)。由于对非可再生资源途径的限制，所以纤维素成为主要可再生能源的潜能是巨大的(Krishna等人，2001)。通过生物过程对纤维素的有效利用是克服食品、饲料和燃料短缺的一种途径(Ohmiya等人，1997)。r>纤维素酶是水解纤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的亲本纤维二糖水解酶(CBH)变体，其中所述变体具有纤维素酶活性，与SEQ ID NO:3具有至少80％的序列同一性，并且在磷酸溶胀纤维素(PASC)测定中具有显著改进的性能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.12.12 US 61/736,3441.一种分离的亲本纤维二糖水解酶(CBH)变体，其中所述变体具有纤维
素酶活性，与SEQ ID NO:3具有至少80％的序列同一性，并且在磷
酸溶胀纤维素(PASC)测定中具有显著改进的性能。
2.根据权利要求1所述的分离的变体，其中所述变体包含氨基酸置
换，所述氨基酸置换选自由以下各项组成的组：Y247D、N49P、
T246V、N200G和其组合，其中每种氨基酸置换的位置对应于SEQ 
ID NO:3。
3.根据权利要求2所述的分离的变体，其中所述变体包含Y247D置
换。
4.根据权利要求2或3所述的分离的变体，其中所述变体包含N49P置
换。
5.根据权利要求2、3或4所述的分离的变体，其中所述变体包含
T246V置换。
6.根据权利要求2、3、4或5所述的分离的变体，其中所述变体包含
N200G置换。
7.根据权利要求2、3、4或6所述的分离的变体，其中所述变体进一
步包含氨基酸置换，所述氨基酸置换选自由以下各项组成的组：
T246S和T246P。
8.根据权利要求2、3、4、5或7所述的分离的变体，其中所述变体进
一步包含N200R氨基酸置换。
9.根据权利要求2至8中任一项所述的分离的变体，其中所述变体进
一步包含氨基酸置换，所述氨基酸置换选自由以下各项组成的组：
F418M、T255D或T255I或T255K或T255P或T255R或T255V、
D241N、G234D、P194V、T356L、S92T、T41I和其组合。
10.根据前述权利要求中任一项所述的分离的变体，其中所述亲本CBH
多肽为真菌纤维二糖水解酶1(CBH1)。
11.根据权利要求10所述的分离的变体，其中所述真菌CBH1是来自红
褐肉座菌(Hypocrea jecorina)、施韦尼兹肉座菌(Hypocrea 

\tschweinitzii)、东方肉座菌(Hypocrea orientalis)、拟康氏木霉
(Trichoderma pseudokoningii)、康长木霉(Trichoderma konilangbra)、
桔绿木霉(Trichoderma citrinoviride)、哈茨木霉(Trichoderma 
harzanium)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、黑曲霉(Aspergillus 
niger)、微紫青霉菌(Penicillium janthinellum)、灰腐质霉(Humicola 
grisea)、嗜热色串孢(Scytalidium thermophilum)或柄孢霉(Podospora
anderina)。
12.根据前述权利要求中任一项所述的分离的变体，其中所述亲本CBH
多肽与SEQ ID NO:3具有至少90％的序列同一性。
13.一种分离的多核苷酸，其包含编码根据前述权利要求中任一项所述
的亲本CBH多肽变体的多核苷酸序列。
14.一种载体，其包含根据权利要求13所述的分离的多核苷酸。
15.根据权利要求14所述的载体，其中所述载体为表达载体。
16.一种宿主细胞，其包含根据权利要求13所述的分离的多核苷酸、根
据权利要求14所述的载体或根据权利要求15所述的表达载体。
17.根据权利要求16所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为真菌细胞或
细菌细胞。
18.根据权利要求17所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自由以下各
项组成的组：
丝状真菌细胞，其选自以下各项组成的组：里氏木霉(Trichoderma 
reesei)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、绿色木霉
(Trichoderma viride)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、哈茨木霉、
青霉属(Penicillium)、腐质霉属(Humicola)、特异腐质霉(Humicola 
insolens)、灰腐质霉(Humicola grisea)、金孢子菌属(Chrysosporium)、
鲁克文金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、嗜热毁丝菌
(Myceliophthora thermophila)、粘帚霉属(Glio...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·R·博特，M·福卡拉基，R·霍梅斯，T·卡佩尔，B·R·凯莱门，S·克拉利，I·尼古拉耶夫，M·桑德格伦，J·范里朔特，S·范斯提格桑斯，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US