本发明专利技术涉及一种简单茶黄素单体的制备方法，所述方法包括如下步骤：1)向含有茶黄素提取物的溶液中添加鞣酸酶和果胶酶的混合物，在25℃-30℃下搅拌20-60min，得酶解液；2)将酶解液迅速升温到85-90℃，保持5-10min，待酶解液降至室温后，离心，取上清液；将上清液通入装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇洗脱剂进行分级洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩至16～18波美度，得浓缩液；将浓缩液在0～4℃温度下放置48～72h，添加少量茶黄素单体结晶，离心、干燥得到简单茶黄素(TF)单体。本发明专利技术所述方法使用复合酶对茶黄素进行酶解，具较好的转化效果，是一种转化率高，产品纯度高的制备方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于茶黄素的制备领域，具体涉及一种简单茶素单体的制备方法。
技术介绍
茶黄素（Theaflavins，TFs)是红茶加工过程中儿茶素类酶促氧化缩合形成的、与 红茶品质高度相关的一类色素，红茶中茶黄素的质量分数达0.5% -2%。TFs是一类能溶 于乙酸乙酯、具有苯并卓酚酮结构的化合物的总称。茶黄素（TF)、茶黄素-3-没食子酸酯 (TF-3-G)、茶黄素-3'-没食子酯（TF-3' -G)和茶黄素双没食子酸酯（TFDG)是4种主要 的茶黄素。其中TF由于化学结构中不含没食子酰基，被称为简单茶黄素，后三种茶黄素的 化学结构中含有一个或两个没食子酰基，被称为酯型茶黄素。现已证实，茶黄素具有较好的 抗氧化、抗菌和抗肿瘤作用。不同的茶黄素组分其功能活性不同，但酯型茶黄素由于其结构 特点，在水中的溶解度比简单茶黄素（TF)低。红茶饮料，尤其是以茶黄素为主要原料的功 能饮料，过高比例的酯型茶黄素会导致产品贮存期间产生沉淀严重、生理活性降低。
技术实现思路
针对酯型茶黄素溶解度低，添加在红茶饮料中易出现沉淀、生理活性下降的缺陷， 本专利技术提出一种简单茶黄素（TF)的制备方法，其具体步骤如下： 1)向含有茶黄素提取物的溶液中添加鞣酸酶和果胶酶的混合物，在25°C -30°c下 搅拌30-50min进行酶解，得酶解液；2)将所述酶解液迅速升温到85-90°C，保持5-10min，待酶解液降至室温后，离心， 取上清液，并过滤； 3)将步骤2)中过滤后的上清液通过装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇洗脱剂进 行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16~18波美度，得浓缩液； 4)将所述浓缩液在0~4°C温度下放置48~72h，添加少量茶黄素单体对浓缩液 进行结晶，离心、干燥得到简单茶黄素（TF)单体。 本专利技术中，所述含茶黄素提取物的溶液中茶黄素的浓度为6~8mg/mL，在这种较 低的浓度下，茶黄素可充分溶解，有利于酯型茶黄素的的进一步水解。 本专利技术中，选择鞣酸酶和果胶酶的混合物，同选择单一的酶相比，两种酶复合使用 可协同提高酯型茶黄素的水解效率。 本专利技术中，所述鞣酸酶和果胶酶混合物与茶黄素的质量比为3:200~1:40 ;，选择 这种比例范围，在保证实现良好的催化效果的前提下，可减少酶的浪费。 本专利技术中，所述鞣酸酶和果胶酶的混合物中，鞣酸酶和果胶酶的质量比为4~ 6:1。这种比例是果胶酶和鞣酸酶协同作用的最佳比例，既可协同提高酯型茶黄素的水解效 率，还可减少鞣酸酶和果胶酶的用量。 本专利技术中，所述离心条件为：在8000-10000r/min转速下离心10_20min。 本专利技术中，所述吸附树脂优选DM130、D140,这两种树脂可以有效吸附简单茶黄素 (TF)，对酯型茶黄素的水解产物没食子酸和其它杂质吸附率低，可以有效分离简单茶黄素 (TF)。 本专利技术中，所述乙醇洗脱剂为10-60%的乙醇溶液。 本专利技术进一步对提取方法进行了优化，具体包括如下步骤： 1)在浓度为8mg/mL的茶黄素溶液中添加与茶黄素质量比为3 :200的鞣酸酶果胶 酶的混合物，其中鞣酸酶和果胶酶的质量比为5 :1，在30°C下搅拌40-50分钟进行酶解，得 酶解液。 2)将所述酶解液迅速升温到85-90°，保持5-10分钟，待酶解液降温至室温后在 9000-10000r/min离心15_20min，取上清液，并过滤。 3)将步骤2中过滤后的上清液缓慢通过装有D140吸附树脂的层析柱，并分别用 20 %、40 %、60 %的乙醇水溶液洗脱，收集60 %的乙醇洗脱液，洗脱液浓缩至16-18波美度， 得浓缩液。 4)将所述浓缩液在0~4°C温度下放置48~72小时，添加少量茶黄素单体对浓 缩液进行结晶，然后离心、干燥得到简单茶黄素（TF)单体。 本专利技术所述的制备简单茶黄素（TF)的方法，采用由鞣酸酶和果胶酶组成的复合 酶直接对酯型茶黄素进行酶解，使得酯型茶黄素水解为简单茶黄素（TF)，成功解决了简单 茶黄素（TF)与酯型茶黄素难以分离的技术难题。同时，采用优选的吸附树脂DM130和D140 可以有效吸附简单茶黄素（TF)，对酯型茶黄素的水解产物没食子酸和其它杂质吸附率低， 解决了简单茶黄素（TF)与其它杂质的分离，从而成功实现了简单茶黄素（TF)单体的制备。【具体实施方式】 以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。本专利技术中所述茶黄素 提取物购自长沙飞拓植物制品有限公司、鞣酸酶和果胶酶均购自诺维信酶制剂公司。 实施例1 1、取40%茶黄素提取物10克，配成500ml茶黄素溶液，向所述溶液中添加80mg鞣 酸酶和20mg果胶酶，在25°C下搅拌30分钟进行酶解，得到酶解液。 2、将所述酶解液迅速升温到90°C，保持5分钟，待酶解液降温至室温后在8000r/ min离心10min，取上清液，并过滤。 3、将步骤2中过滤后的上清液缓慢通过装有DM130吸附树脂的层析柱，并分别用 10 %、30 %、50 %的乙醇水溶液洗脱，收集50 %的乙醇洗脱液，并将所述洗脱液浓缩至16~ 18波美度，得浓缩液。 4、将所述浓缩液在0~4°C温度下放置48小时，添加少量茶黄素单体对浓缩液进 行结晶，然后离心、干燥得到简单茶黄素2. 13g。经过HPLC方法检测，其中简单茶黄素（TF) 单体的含量为96. 36%。经UV、FTIR、HPLC-MS^H-NMR和13C-NMR鉴定分析，其结构式为： 实施例2【主权项】1. ，其特征在于，包括如下步骤： 1)向含有茶黄素提取物的溶液中添加鞣酸酶和果胶酶的混合物，在25°C -30°C下搅拌 30-50min进行酶解，得酶解液； 2)将所述酶解液迅速升温到85-90°C，保持5-10min，待酶解液降至室温后，离心，取上 清液并过滤； 3) 将步骤2)中过滤后的上清液通入装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇洗脱剂对所述 层析柱进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16~18波美度，得浓缩液； 4)将所述浓缩液在O~4°C温度下放置48~72h，添加茶黄素单体对浓缩液进行结晶， 离心、干燥得到简单茶黄素单体。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含茶黄素提取物的溶液中茶黄 素的浓度为6~8mg/mL。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述鞣酸酶和果胶酶混合物与所述 茶黄素的质量比为3:200~1:40。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述鞣酸酶和果胶酶的混合物中，鞣 酸酶和果胶酶的质量比为4~6:1。5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述离心条件为：在8000-10000r/ min转速下离心10-20min。6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述吸附树脂优选DM130、D140。7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇洗脱剂为10-60%的乙醇溶 液。8. 权利要求1-7任一项所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 在浓度为8mg/mL的茶黄素溶液中添加与茶黄素质量比为3 :200的鞣酸酶果胶酶的 混合物，其中鞣酸酶和果胶酶的质量比为5 :1，在30°C下搅拌40-50分钟进行酶解，得酶解 液； 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种简单茶黄素单体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)向含有茶黄素提取物的溶液中添加鞣酸酶和果胶酶的混合物，在25℃‑30℃下搅拌30‑50min进行酶解，得酶解液；2)将所述酶解液迅速升温到85‑90℃，保持5‑10min，待酶解液降至室温后，离心，取上清液并过滤；3)将步骤2)中过滤后的上清液通入装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇洗脱剂对所述层析柱进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16～18波美度，得浓缩液；4)将所述浓缩液在0～4℃温度下放置48～72h，添加茶黄素单体对浓缩液进行结晶，离心、干燥得到简单茶黄素单体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘仲华，王坤波，黄建安，林勇，林海燕，李娟，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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