本发明专利技术公开了一种黄曲霉毒素B1的制备方法，将接种培养后的菌种3.6156置于发酵培养基中进行培养，再用提取液提取AFB1，然后将含有AFB1的提取液减压浓缩，所得浓缩液经处理后得黄曲霉毒素B1（AFB1），在霉菌培养箱内通过变温培养，提高了真菌毒素产量，达到0.53%，采用含有甲酸的乙酸乙酯、乙腈混合提取液，提取彻底并稳定，通过氮气吹干AFB1结晶产品纯度提高到98.0%以上。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】一种黄曲霉毒素B1的制备方法 专利
本专利技术涉及一种黄曲霉毒素，具体地说，涉及一种黄曲霉毒素B1 (AFB1)的制备方 法，属于生物
技术介绍
霉菌毒素（mycotoxin)是霉菌产生的次级代谢产物，广泛污染农作物、食品及饲料 等植物源性产品。霉菌毒素可以引起人类和动物的急性或慢性中毒，可损害机体的肝脏、 肾脏、神经组织、造血组织及皮肤组织等，更为严重的是，部分真菌毒素已被证实具有致癌、 致畸、致细胞突变的"三致"作用。其中，AFB1被认为是目前致癌力最强的天然物质，其毒 性是氰化钾的10倍，是砒霜的68倍。2014年5月在北京召开的"2014年国际真菌毒素大 会"上，来自农产品安全领域的专家学者报道，肉眼看不见的真菌毒素，比显性的霉变要量 大面广得多，而且具有隐蔽性强、潜伏期长的特性，霉菌毒素对食品安全的威胁要远远大于 公众关注的农药残留超标、有害添加剂污染等；在我国食品安全监管的执行层面，真菌毒素 防控仅仅处于起步阶段。全世界每年由于霉变、污染霉菌毒素引起的农产品和工业原料的 直接损失达数百亿美元。目前为止，我国在2011年新修订《食品中真菌毒素限量》国家标准 (GB2761-2011)，专家呼吁把真菌毒素防控当作食品安全监管的重中之重，已经刻不容缓。 黄曲霉毒素AFB1是一类化学结构类似的化合物，主要结构为二氢呋喃环和香豆 素。AFB1分子式为C17H1206。在紫外线下AFB1发蓝色荧光，难溶于水易溶于油、甲醇、丙 酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚己烷和乙醚中。一般在中性溶液中较稳定，但在强酸 性溶液中稍有分解。在PJ19-10的强碱溶液中分解迅速，其纯品为无色结晶，耐高温，AFB1的 分解温度为268°C，结构式如下：【主权项】1. 一种黄曲霉毒素B1的制备方法，其特征在于：将接种培养后的菌种3. 6156置于发酵 培养基中进行培养，再用提取液提取AFB1，然后将含有AFB1的提取液减压浓缩，所得浓缩液 经处理后得黄曲霉毒素B1 (AFB1X2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括发酵培养基的制备 步骤： 发酵培养基包括花生壳、花生渣、蔗糖、麸皮、尿素和水，先将尿素和蔗糖溶解在水中， 然后加入花生壳、花生渣和麸皮，搅拌均匀，高温高压灭菌。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括接种培养步骤： 取4°C保藏的菌种3. 6156放置至室温，无菌操作接种到PDA液体培养基； 将接种后的PDA培养基放置到摇床培养，温度控制在30°C，转速160转/分钟，培养时 间3天。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括发酵接种步骤： 将接种培养后的菌种全部转移到发酵培养基，搅拌均匀。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括AFBi毒素培养步 骤： 将含有菌种的发酵培养基放置在霉菌培养箱，在30°C下培养3天，降低温度到26°C培 养3天，再降低温度到22°C继续培养10天。6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括灭菌步骤： 将经AFB1毒素培养步骤后的发酵培养基经KKTC高压灭菌30min。7. 如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括提取步骤： 将乙酸乙酯、乙腈和甲酸按照体积比799:200:1混匀为混合提取液； 分两次取混合提取液并置于灭菌后的发酵培养基，振荡摇匀，过滤收集后离心，3000转 /分离心20分钟，收集上清液；合并两次上清液。8. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括浓缩净化步骤： 将上清液减压浓缩到50±2mL/1000mL上清液，将C18粉、PSA粉、氨丙基粉和无水硫酸 镁，与浓缩液混合后振荡涡混1分钟，10000转/分离心后上层清液过〇. 22Mm的滤膜净化过 滤； 每50±2mL浓缩液用C18粉0. 5g、PSA粉0. 5g、氨丙基粉Ig和无水硫酸镁15g。9. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括将过滤后的净化 液转移至洁净试管，30°C水浴氮气吹干。10. 如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述花生壳、花生渣、蔗糖、麸皮、尿素 和水的重量份比25 :42 :20 :22 :1 :8。【专利摘要】本专利技术公开了一种黄曲霉毒素B1的制备方法，将接种培养后的菌种3.6156置于发酵培养基中进行培养，再用提取液提取AFB1，然后将含有AFB1的提取液减压浓缩，所得浓缩液经处理后得黄曲霉毒素B1（AFB1），在霉菌培养箱内通过变温培养，提高了真菌毒素产量，达到0.53%，采用含有甲酸的乙酸乙酯、乙腈混合提取液，提取彻底并稳定，通过氮气吹干AFB1结晶产品纯度提高到98.0%以上。【IPC分类】C12P17-18【公开号】CN104818306【申请号】CN201510210606【专利技术人】郭礼强, 丁葵英, 宫小明, 孙军, 赵晗, 郝莹 【申请人】中华人民共和国潍坊出入境检验检疫局【公开日】2015年8月5日【申请日】2015年4月29日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黄曲霉毒素B1的制备方法，其特征在于：将接种培养后的菌种3.6156置于发酵培养基中进行培养，再用提取液提取AFB1，然后将含有AFB1的提取液减压浓缩，所得浓缩液经处理后得黄曲霉毒素B1（AFB1）。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭礼强，丁葵英，宫小明，孙军，赵晗，郝莹，
申请(专利权)人：中华人民共和国潍坊出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：山东;37
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