用于大分子的增强的递送的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了增强大的大分子(即，大于10kDa)(例如结合抗原的多肽)穿过紧密连接的递送的组合物和方法。此类方法和组合物对于通过鼻内施用将治疗性结合抗原的多肽递送至CNS以治疗神经病症特别有用。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】用于大分子的增强的递送的方法和组合物 本申请是申请号为200980126247. 5的中国专利申请的分案申请。 本申请要求2008年7月10日提交的美国临时申请案61/079586(其内容通过引 用合并入本文）的优先权。 专利
本公开内容涉及促进分子穿过生物膜的递送，特别是结合抗原的多肽穿过血脑屏 障进入中枢神经系统（CNS)的递送的组合物和方法。 专利技术背景 根据2006年世界卫生组织的报告，世界上超过10亿人患有神经病症，并且此类病 症每年导致将近680万人死亡。治疗性结合抗原的肽例如抗体可用于治疗多种（如果不是 大部分的话）此类神经病症。然而，使用此类治疗性结合抗原的肽治疗神经病症经常受到 与递送药物穿过血脑屏障（BBB)相关的困难的阻碍。 虽然已发现增强分子穿过上皮细胞层的递送的化合物，但通常显示其只在增强小 分子的递送中有效。例如，已显示肽4-苯基偶氮苄基氧羰基-Pro-Leu-Gly-Pro增强小分 子穿过上皮细胞层的运输，然而对于IOkDa或更大的大分子未显示渗透增强作用（参见美 国专利 5, 534, 496;Yen等人 1995,JControlRelease, 36:25-37)。尽管进行了大量研宄， 但目前还没有将治疗性结合抗原的多肽递送至CNS内的方便有效的方法。 因此，在本领域内存在对增强治疗性结合抗原的多肽穿过上皮层特别地至CNS的 特异性递送以治疗CNS病症的组合物和方法的持续需要。 专利技术概述 本专利技术至少部分基于令人惊讶的发现：渗透增强剂（例如，Pz-肽或FMOC-肽）能 够增强大的大分子（即，大于IOkDa)例如结合抗原的多肽（例如scFv)至CNS的特异性递 送，特别是当给鼻粘膜施用时。因此，本专利技术提供了增强大的大分子（即，大于IOkDa)例如 结合抗原的多肽（例如，scFv)穿过上皮层的递送的组合物和方法。此类方法和组合物是特 别有利的，因为它们使得能够通过鼻内施用方便、有效和选择性地将结合抗原的多肽（例 如scFv)递送至CNS以治疗神经病症。 在一个方面，本专利技术提供了包含一种或多种结合抗原的多肽例如免疫结合剂（例 如，scFv)和一种或多种渗透增强剂（例如，Pz-肽或FMOC-肽）的组合物。在特定的实施 方案中，将结合抗原的多肽共价连接至渗透增强剂。 在某些实施方案中，结合抗原的多肽特异性结合靶抗原特别是TNFa，所述靶抗 原选自TNF-a、0淀粉样蛋白、0淀粉样蛋白衍生的可扩散配体受体、单胺氧化酶-B、 L-3, 4-二羟苯丙氨酸脱羧酶、乙酰辅酶A羧化酶、N-甲基-D-天冬氨酸受体（也称为 GRIN1)、GRINA、GRIN2A、GRIN2B、GRIN2C、GRIN2D、GRIN3A、GRIN3B、组胺Hl受体、毒蕈碱受 体（也称为01冊1)、01冊2、01冊3、01冊4、下丘泌素受体1、下丘泌素受体2、5-羟色胺（也 称为HTR1A)、多巴胺受体（也称为DRD1)、DRD2、DRD3、DRD4、DRD5、肾上腺素能0 1受体、去 甲肾上腺素转运蛋白（NET)和多巴胺D2受体。 在其他实施方案中，结合抗原的多肽是包含与本文的表5、6和7中所示的一个或 多个氨基酸序列具有至少80%，优选85 %、90%、95 %或99 %的同一性或相似性的氨基酸 序列的scFv。 在其他实施方案中，渗透增强剂促进结合抗原的多肽至中枢神经系统的选择性鼻 内递送。 本专利技术的组合物特别地可用作药物（或用于制造药物），所述药物特别地用于治 疗、预防或延迟神经病症的进展，所述神经病症包括但不限于偏头痛、抑郁症、阿尔茨海默 氏病、帕金森病、精神分裂症、癫痫、中风、脑膜炎、肌萎缩侧索硬化、失眠（insomnia)、脑膜 炎、记忆缺陷（memoryimpairment)、多发性硬化、发作性睡病、中风、创伤性脑损伤和应激 (stress)〇在另一个方面，本专利技术提供了包括一种或多种结合抗原的多肽（例如scFv)、一种 或多种渗透增强剂（例如，Pz-肽或FMOC-肽）以及使用说明书的试剂盒。 附图概述 当结合下列附图阅读下列详述时，将更好地理解本公开内容的特征和有利方面， 其中： 图1描述了时程实验，其跟踪在鼻内施用400ygScFv后（A)嗅球、（B)大脑、（C) 小脑和⑶脑干中的ESBA105浓度。 图2比较在鼻内（400yg/mL)或静脉内（40yg/mL)施用ESBA105后（A)嗅球、 (B)大脑、（C)小脑、（D)脑干和（E)血清中ESBA105的浓度，以及在以400yg/mL的等浓度 鼻内或静脉内施用ESBA105后（F)血清中ESBA105的浓度。 图3显示在使用或不使用Pz肽的情况下鼻内施用后，不同脑区域中ESBA105的 (A)Cmax (平均值土SEM，n= 4)和（B)暴露（AUC)的脑组织对血液的浓度比率。 图4描述了在鼻内递送后ESBA105从鼻腔至CNS的迀移途径。施用的化合物可从 鼻腔迀移入血液并且穿过血脑屏障，最后渗入脑组织（下面的途径）。可选择地，化合物可 经嗅神经（N.olfactorius)轴突（即细胞内）或神经周围（即细胞外）迀移入嗅球，然后 进入大脑。化合物还可经三叉神经（N.trigeminus)(神经周围地，即细胞外）迀移入脑干， 然后进入小脑。 详述 定义 本语〃渗透增强剂〃包括增强药物穿过物理屏障例如组织屏障（例如上皮）的 通过的任何组合物。适当的渗透增强剂包括但不限于，N-端连接至保护基团例如4-苯 基偶氮苄基氧羰基（Pz)、N-甲基、叔丁基氧羰基（t-Boc)、荷基甲氧基羰基（FMOC)和节 氧幾基（CBZ)的肽Pro-Leu-Gly-Pro-Arg 、Pro-Leu-Gly-Pro-Lys ,Pr〇-Leu-Gly-Pr〇-Glu,Pro-Leu-Gly-Pro-Asp 、Pro-Leu-Gly-Pro 、Pro-Leu-Gly和Pro-Leu(参见例如，美国专利 5, 534, 496,其通过引用合并入本文）。术语〃Pz-肽〃是指N末端连接至Pz基团的Pro-Leu-Gly-Pro-Arg (参见例如，美国专利5, 534, 496,其通过引用合并入本文）。术语〃FMOC-肽〃是指N端连接至FMOC基团的Pro-Leu-Gly-Pro-Arg (参见例如，美国专利5,534,496,其通过引用合并入本文）。 术语"选择性鼻内递送"是指在导致患者的CNS中分子的浓度比血清中的浓度高 的条件下分子（例如，结合抗原的多肽）至患者的鼻内应用。 术语"结合抗原的多肽"是指大小为至少IOkDa的多肽，其包括免疫结合剂、单克 隆抗体（包括全长单克隆抗体）、多克隆抗体、多特异性抗体（例如，双特异性抗体）、嵌合 抗体、CDR移植抗体、人源化抗体、人抗体、单链抗体（scFv)和抗体片段以及基于本领域内 已知的可选择的支架的抗原结合多肽，所述支架例如但不限于CTLA-4、淀粉酶抑肽、纤连蛋 白（FN3)、新制癌菌素（neocarzinostatin)、CBM4-2、脂质运载蛋白、T细胞受体、蛋白A结 构域（蛋白Z)、Im9、设计的锚蛋白重复蛋白（DARPins)、设计的TPR蛋白、锌指、pVIII、鸟 胰腺多肽、GCN4、Wff结本文档来自技高网...

【技术保护点】
配制为用于鼻内递送结合抗原的多肽至中枢神经系统的组合物，所述组合物包含有效量的结合抗原的多肽和渗透增强剂。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：V·胡尔曼考提尔，D·厄里什，E·弗尔，
申请(专利权)人：德勒尼克斯治疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH