IL-1β的结合成员制造技术

本发明专利技术涉及抗IL-1β结合成员，特别是高度稳定且可溶的单价高效价IL-1β结合抗体片段。这些结合成员可用于治疗炎症性疾病和其他疾病，以及用于诊断。还提供的是相关的核酸、载体、细胞和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】IL-1 β的结合成员 描沭 本专利技术涉及人源化的抗IL-I β抗体，特别是单价、高效价抗IL-I β抗体片段。本 专利技术还涉及编码这些抗体的核酸、载体、含有这些序列的宿主细胞、包括所述抗体或核酸的 药物组合物和诊断组合物及其应用。 专利技术背景 白细胞介素_1β (IL-Ιβ)是由活化的巨噬细胞作为前体产生的促炎性细胞因 子。经蛋白水解切割，通过其活性形式结合至IL-I I型受体（IL-IRl)而启动信号转导，所 述IL-I I型受体（IL-IRl)继而与跨膜IL-I受体辅助蛋白（IL-IRAP)结合在一起。所形 成的复合体有信号转导的能力。作为炎症反应中的关键介体，该细胞因子影响许多细胞活 性，如细胞增殖、分化和凋亡。因此，IL-I β被认为是众多药物的重要标靶。 本领域内存在对具有高治疗效力的抗人IL-I β抗体的需求。为了在治疗上成功， 重要的是，这些抗体显示期望的生物物理学和生物化学特性。例如，由于靶IL-I β是高效 的白细胞介素，其在很低的浓度时就有效，因而需要被全面阻断，故这种抗体需要是高度有 效的且高度稳定和可溶的。 专利技术简沐 在第一方面，本专利技术提供了针对IL-I β的单价抗体片段，其具有低于50皮摩尔 (ρΜ)的效价，所述效价通过对于抑制人IL-I β的生物学效应的半最大抑制浓度IC5tl而确 定。 具有PM级效价值的单价抗体片段，无论是否是人源化的，都是特别的且不能常规 获得。此外，与非人源化的亲本抗体相比，经人源化后抗体对标靶的亲和力通常受损。因而 对于人源化抗体的挑战，是使亲和力参数接近或等于亲本抗体。这对于仅包括一条可变轻 链和重链的单价抗体片段而言尤其如此，因而与显示两条轻链和重链的双价抗体相比，结 合至标靶没有那么强。 此外，当将全长抗体转化为更小的片段时，其效价通常会降低。这不仅仅是由于伴 随的化合价变化（例如，抗体片段可能仅是单价的，而全长免疫球蛋白是双价或多价的）， 还可能是由空间原因导致的。 有效的抗体由于其允许给予患者较低的药物量，由此降低治疗的总成本而特别有 用。此外，提供了更完全地中和疾病分子标靶的可行性。 此外，当施用最高效价的抗体时，可以预期在动物模型以及人类治疗中不同的施 用途径。例如，对于外用药物，虽然递送可能由于上皮层的屏障功能而受限制，但是治疗的 效力由透过该生理屏障的高效价的有限数量的药物分子来弥补。 通常，与更有效的药物相比，为了实现类似的药效作用，需要给予大量不太有效的 药物，其转化成更高的静脉内或皮下施用量。这种更高的施用量对于在动物或人中使用是 不利的，原因有两个：一是用大量的药物治疗患者不切实际，二是因为每单位质量的抗体非 常昂贵。 因此，使用更少量的抗体进行治疗转化为更低的药物生产成本。特别是抗体片段 适合于利用如细菌或酵母培养系统生产时，与通常用于生产全长免疫球蛋白如IgG的哺乳 动物表达系统相比，其成本相对较低。将给予更少量的药物结合成本更低的制造工艺，打开 了每名患者更具成本效益的药物的可能性。因此，更多的患者可以受益于这些药物。 稳定性和可溶性参数是提供可行药物的其他重要参数。抗体药物越稳定可溶，给 药的体积越小且保质期越长。本文所提供的抗体是高度稳定且可溶的，即它们长时间且还 以高浓度保持为单体的。 一方面，提供了抗体，特别是以上的单价抗体片段，其包括 (a)分别如SEQ ID Nos. :1、2和3所示或其变体的可变重链（VH)互补性决定区 (CDR)序列CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中的至少一种；和/或 (b)分别如SEQ ID Nos.:4、5和6所示或其变体的可变轻链（VL)⑶R序列⑶R-L1、 CDR-L2或CDR-L3中的至少一种。 在另一实施方案中，所述抗体，特别是所述的单价抗体片段，其包括 (a)分别如SEQ ID Nos. : 155、156和157所示或其变体的可变重链（VH)互补性决 定区（⑶R)序列⑶R-H1、⑶R-H2或⑶R-H3中的至少一种；和/或 (b)可变轻链（VL)⑶R序列⑶R-Ll、⑶R-L2或⑶R-L3中的至少一种 ⑴分别如SEQ ID Nos. : 158、159和160所示或其变体，或 (ii)分别如 SEQ ID Nos. : 161、162 和 163 所示或其变体。 在一些实施方案中，所述抗体包括 (a)与选自SEQ ID No. :7和SEQ ID No. : 146中的序列具有至少85%-致性的 VH ;和/或 (b)与选自 SEQ ID No. :8、SEQ ID No. : 136 和 SEQ ID No. : 145 中的序列具有至 少85 % -致性的VL。 抗体可包括接头序列，其为SEQ ID No. :9或衍生自SEQ ID No. :9。在一些实施方 案中，这种抗体是与选自SEQ ID No. : 10、SEQ ID No. :73和SEQ ID No. :82中的序列具有 至少85%序列一致性的抗体片段。 -方面，本专利技术提供了结合至IL-I β且与本文所述的抗体竞争结合的结合成员。 所述结合成员可以是单价或多价的。优选的多价结合成员是二价的。多价结合成员可以是 双特异性的。 -方面，本专利技术提供了编码本文所公开的抗体或结合成员的分离的核酸序列。 -方面，提供了包括所述核酸序列的载体。 一方面，本专利技术提供了包括上述核酸序列或上述载体的宿主细胞。 -方面，包括上述抗体、上述结合成员、上述核酸序列、上述载体或上述宿主细胞， 以及进一步合适的载剂（carrier)、稀释剂或赋形剂的组合物。组合物优选为包括药学可接 受的载剂、稀释剂或赋形剂的药物组合物。该药物组合物优选为适合于外用、皮肤内、经皮、 静脉内、皮下、肌肉内、肠胃外、舌下、颊部、口服、鼻、鼻内、直肠、局部或眼部给予的形式。 进一步提供的是治疗IL-I β介导的疾病的方法，其包括给予有需要的受试者上 述药物组合物。 还提供的是用于以下应用的上述抗体、上述结合成员、上述核酸序列、上述载体或 本文公开的宿主细胞： (i)治疗IL-I β介导的疾病； (ii)诊断； (m)美容；和/或 (iv)检测目的。 在又一方面，本专利技术提供了生产本文所述的抗体或结合成员的方法，其包括（i) 分别培养上述宿主细胞，以及回收和纯化抗体片段或所述结合成员的步骤；或者（ii)利用 无细胞系统。此外或可选择地，所述方法可包括至少一个化学蛋白质合成的步骤。 附图简沐 图1示出确定DLX2323与重组人（rh) IL-I β以不同浓度结合的ELISA结果。标 绘的是以ng/ml给出的scFv浓度在波长450nm处的吸光度差异。方形：DLX2323 ;圆形：对 照。 图2是描述DLX2323结合至天然人IL-I β与结合至rhIL-Ι β相比的结果图。天 然人IL-I β源自活化的THP-I细胞上清液。标绘的是以ng/ml给出的IL-I β浓度在波长 450nm处的吸光度差异。方形：rIL-l|3 ;圆形：天然IL-Ιβ。 图3示出在人成纤维细胞测试的两个独立实验中针对中和rhIL-Ιβ比较DLX2323 与几种可商购的IL-I β抑制剂。图3A示出DLX2323与MAB201的结果。Y-轴指示从人成纤维 细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗IL‑1β的单价抗体片段，其对于抑制人IL‑1β的生物学效应具有低于5pM，优选低于约1pM的效价(IC50)，所述效价通过抑制IL‑1β刺激的从人成纤维细胞中释放IL‑6而确定。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬尼·盖布拉维斯基，提图斯·克里施玛尔，西蒙·施密特，阿迪亚帕尔·莎玛谢夫，托尔斯腾·亚历山大·舍费尔，
申请(专利权)人：德勒尼克斯治疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH