救必应药材指纹图谱的构建方法及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种救必应药材指纹图谱的构建方法及其检测方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的配制；(3)测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由13个共有特征峰构成的救必应药材指纹图谱。本发明专利技术经发明专利技术人的大量实验和研究，确定了制备供试品溶液和对照品溶液的方法，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出救必应药材的指纹图谱。采用本申请方法构建的指纹图谱以及检测方法可以准确地鉴定救必应药材，精密度高，且节约试剂。

【技术实现步骤摘要】
救必应药材指纹图谱的构建方法及其检测方法
本专利技术涉及分析检测
，特别是涉及一种救必应药材指纹图谱的构建方法及其检测方法。
技术介绍
救必应为冬青科植物铁冬青的干燥树皮，其性苦、寒。气微香、味苦、微涩。具有清热解毒、利湿止痛之功效，适用于暑湿发热、喉咙肿痛、湿热泻痢、脘腹胀痛、风湿痹痛、湿疹、疮疖、跌打损伤等。现代药理研究表明，救必应还具有抗心律失常和抗心肌缺血作用、降压和减慢心率作用、抗肿瘤作用、止血作用等。救必应为干燥树皮，目前中药材有多种外观相似的易混淆品，而现有技术中对于检测是否为救必应的方法较为复杂，且结果误差较大。因此，有必要建立一种全面、直观、快速的检测方法。
技术实现思路
基于此，本专利技术提供了一种救必应药材指纹图谱的构建方法。具体的技术方案如下：一种救必应药材指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：精密称取紫丁香苷对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；(2)供试品溶液的配制：精密称取救必应药材粉末，加入体积百分含量为45-55％的乙醇，超声提取或回流提取50-70min，过滤，即得所述供试品溶液；(3)测定分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由13个共有特征峰构成的救必应药材指纹图谱。在其中一个实施例中，步骤(3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动相A，0.5％(体积浓度)冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为288-292nm；柱温23-27℃。在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-5min，流动相A的体积百分数由20％变化至25％；6-15min，流动相A的体积百分数由25％变化至35％；15-45min，流动相A的体积百分数由35％变化至45％；45-50min，流动相A的体积百分数由45％变化至60％。在其中一个实施例中，检测波长为290nm，柱温为25℃。在其中一个实施例中，步骤(2)中，乙醇的体积百分含量为50％，提取时间为60min。本专利技术的另一目的是提供一种准确鉴定救必应药材的检测方法。具体的技术方案如下：一种救必应药材指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：精密称取紫丁香苷对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；(2)供试品溶液的配制：精密称取救必应药材粉末，加入体积百分含量为45-55％的乙醇，超声提取或回流提取50-70min，过滤，即得所述供试品溶液；(3)测定分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，即得。在其中一个实施例中，步骤(3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动相A，0.5％冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为288-292nm；柱温23-27℃。在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-5min，流动相A的体积百分数由20％变化至25％；6-15min，流动相A的体积百分数由25％变化至35％；15-45min，流动相A的体积百分数由35％变化至45％；45-50min，流动相A的体积百分数由45％变化至60％。在其中一个实施例中，步骤(2)中，乙醇的体积百分含量为50％，提取时间为60min；步骤(3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动相A，0.5％冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为1.0ml/min；检测波长为290nm；柱温25℃。本专利技术的有益效果如下：本专利技术经专利技术人的大量实验和研究，确定了制备供试品溶液和对照品溶液的方法，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出救必应药材的指纹图谱。采用本申请方法构建的指纹图谱以及检测方法可以准确地鉴定救必应药材，精密度高，且节约试剂。附图说明图1a为溶剂峰比较图；图1b为标准品紫丁香苷HPLC图；图2为不同流动相HPLC图；图3为流动相不同起始梯度HPLC图；图4为流动相不同梯度HPLC图；图5为不同流速HPLC图；图6为不同柱温HPLC图；图7为不同波长HPLC图；图8为不同色谱柱HPLC图；图9为六种提取溶剂HPLC图；图10为不同提取体积HPLC图；图11为不同种提取方法HPLC图；图12为不同提取时间HPLC图；图13为救必应所有样品导出HPLC图谱；图14为救必应药材指纹图谱的对照谱图；图15为实施例2待测药材的HPLC图谱。具体实施方式以下通过实施例对本申请做进一步阐述。实施例1救必应药材指纹图谱的构建方法一、仪器、试药与材料1、仪器KQ－100B型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；T-214型电子分析天平(Denver公司)；Waterse2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器(Waters公司)。2、试剂冰乙酸(色谱纯，天津市化学试剂研究所)；甲醇、乙腈(色谱纯，Honeywell公司)；水为超纯水；对照品为紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号111574-200603)。3、材料救必应药材(广州白云山星群(药业)股份有限公司提供，共12批，批号或产地分别为XG1404-01，XG1307-01、XG1105-01、XG1110-02、20110401、20111201、2014-0501、2014-0502、2014-0503、2014-0504、福建、广西)二、方法与结果1、色谱条件色谱柱：100RP-18endcapped(5μm)，RT250-4.6以甲醇(A)-0.5％冰乙酸水溶液(B)为流动相系统梯度洗脱(0-5min，20％→25％A；6-15min，26％→35％A；15-45min，35％→45％A；45-50min，45％→60％A)，流速为1.0mL·min-1，检测波长290nm；柱温25℃，进样量10μL。2、对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品约12mg，加甲醇适量，配制成每1ml甲醇含1.22mg紫丁香苷的溶液，作为对照品溶液。3、供试品溶液的制备取救必应药材粉末(过60目筛)约1g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇25ml，密塞，称重，超声处理(功率160W,频率59kHz)60分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。4、方法学考察4.1溶剂峰的考察取救必应药材粉末(过60目筛)约1g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇25ml，密塞，称重，超声处理(功率160W,频率59kHz)60分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，HPLC分析救必应药材样品和50％乙醇溶剂空白，得图1。由图1a可知，通过比较50％乙醇和救必应药材图谱，可以发现，溶剂对主要的色谱峰无太大影响，紫外吸收较明显的峰1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13选为主要色谱峰。图1b为对照品紫丁香苷的标准HPLC谱图。4.2流动相组成的选择取约1g救必应药材粉末样品1份，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称重，超声处本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种救必应药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：精密称取紫丁香苷对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；(2)供试品溶液的配制：精密称取救必应药材粉末，加入体积百分含量为45‑55％的乙醇，超声提取或回流提取50‑70min，过滤，即得所述供试品溶液；(3)测定分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由13个共有特征峰构成的救必应药材指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种救必应药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：精密称取紫丁香苷对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；(2)供试品溶液的配制：精密称取救必应药材粉末，加入体积百分含量为45-55％的乙醇，超声提取或回流提取50-70min，过滤，即得所述供试品溶液；(3)测定分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由13个共有特征峰构成的救必应药材指纹图谱，其中，所述高效液相色谱仪的流动相为：甲醇为流动相A，0.5％冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0-5min，流动相A的体积百分数由20％变化至25％；6-15min，流动相A的体积百分数由25％变化至35％；15-45min，流动相A的体积百分数由35％变化至45％；45-50min，流动相A的体积百分数由45％变化至60％。2.根据权利要求1所述的救必应药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为288-292nm；柱温23-27℃。3.根据权利要求2所述的救必应药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，检测波长为290nm，柱温为25℃。4.根据权利要求1-3任一项所述的救必应药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，乙醇的体积百分含量为50％，提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋莉娟，姚江雄，许招懂，方铁铮，
申请(专利权)人：广州白云山星群药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44