一株抑制马铃薯立枯丝核病菌的枯草芽孢杆菌，涉及一株枯草芽孢杆菌。本发明专利技术提供一株枯草芽孢杆菌，可抑制马铃薯立枯丝核病菌，为马铃薯立枯丝核病的生物防治奠定基础。本发明专利技术抑制马铃薯丝核病菌的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌PB12，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No.10603。本发明专利技术枯草芽孢杆菌PB12具有较强的抑制马铃薯立枯丝核病菌菌丝生长的能力，而且随着培养天数的增加，抑菌效果越明显。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株枯草芽孢杆菌。
技术介绍
丝核菌是一类在自然界中广泛存在的真菌，在全世界的耕作、非耕作土壤中均有 分布，许多丝核菌很容易从染病植株及土壤中分离得到。丝核菌的寄主范围极广，可侵染43 科200余种植物。丝核菌是一种土传植物病原真菌，容易引起植物烂种、苗期猝倒。丝核菌 在土壤中的腐生竞争力强，存活时间长，被认为是最具破坏力的土传植物病原菌之一。丝核 菌在菌丝分枝发生点附近缢缩，分枝点附近形成隔膜，菌丝经常呈直角或锐角分枝。生物 防治主要是利用微生物之间的拮抗作用，选择对农作物不造成危害的微生物抑制病原菌的 生长。细菌、放线菌、真菌在植物病害生物防治中开发应用前景良好，生防菌剂的研宄及开 发有着重要的现实意义。微生物源农药是目前应用最广、发展最快、最有前途的一类生物农 药，是解决我国当前农业环境问题的主要突破口之一。 黑龙江省是马铃薯种植之乡，近年来马铃薯种植面积不断扩大，马铃薯产业发展 迅猛。但是由于种薯生产者提供无病种薯的观念不强，用种者常将非种薯做种薯应用，品种 引进和调运过程中忽视检疫把关；甚至有的种植区域种薯生产地区，不注意轮作倒茬；还 有的在种植过程中对病害的防治措施落实的不认真，种种原因致使马铃薯病害日趋严重。 马铃薯立枯丝核病就是其中之一，该病发病普遍，发病率达5%以上，危害程度也在日趋加 重，不仅使产量降低20%，而且严重影响马铃薯品质，已成为马铃薯产业发展的一大障碍。 病原菌立枯丝核菌是一种全世界大量农作物和野生寄主的病原物，其菌核在块茎 上或土壤里越冬，或菌丝体在土壤里的植株残体上越冬，第二年春季，当温度、湿度条件适 合时，菌核萌发侵入马铃薯幼芽、幼苗，特别是有伤口时侵入更多更快。在生长季节又可侵 入根、地下茎、匍匐茎、块茎。新块茎上形成的菌核，或在土壤里又越冬的菌核，下一年遇到 适宜的环境条件，又可发生侵染。总之，该病是种薯带病和土壤传播结合的病害，因此，给防 治带来不便。
技术实现思路
本专利技术提供一株枯草芽孢杆菌，可抑制马铃薯立枯丝核病菌，为马铃薯立枯丝核 病的生物防治奠定基础。 本专利技术抑制马铃薯丝核病菌的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subti I is) PB12，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地 址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No.10603。 本专利技术枯草芽孢杆菌PB12革兰氏染色阳性，杆状，两端钝平，多数菌体串联成串， 呈不规则形状。产芽孢，30°C培养24h芽孢形成率达80%以上，芽孢端生，椭圆形，不膨大， 培养至48h，芽孢全部脱落。在NYDA固体培养基上的菌落呈乳白色，褶皱，边缘不整齐，菌落 中心凸起呈脊状，易挑起。 本专利技术枯草芽孢杆菌PB12在50°C可以生长，pH5. 7可以生长，7% NaCl可以生长， 厌氧条件下不生长。发酵葡萄糖产酸不产气，接触酶反应阳性，淀粉水解呈阳性，VP试验呈 阳性，利用柠檬酸盐反应呈阳性，明胶液化反应呈阳性，石蕊牛奶还原胨化反应呈阳性，硝 酸盐反应呈阳性，甲基红反应呈阳性。 本专利技术枯草芽孢杆菌PB 12可在NYD培养基上生长，最适生长温度为30 °C，最适pH 为7. 2~7. 5,转速150r/min。NYD培养基由牛肉浸膏8g、酵母膏5g、葡萄糖10g、琼脂15g 和蒸馏水1000 mL组成。 本专利技术枯草芽孢杆菌PB12通过16S rDNA序列比对分析，与芽孢杆菌属有极高 的同源性，同源性为98%以上。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果 确定枯草芽孢杆菌PB12属于芽孢杆菌属（Bacillus Cohn)，为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)〇 toon] 平板抑菌实验和培养瓶抑菌实验表明，在固体培养和液体培养条件下，本专利技术枯 草芽孢杆菌PB12均具有较强的抑制马铃薯立枯丝核病菌菌丝生长的能力，而且随着培养 天数的增加，抑菌效果越明显。 本专利技术枯草芽孢杆菌PB12,属于芽孢杆菌属（Bacillus Cohn)，保藏在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No. 10603。【附图说明】 图1为固体培养时枯草芽孢杆菌PB12的拮抗作用；图2为液体培养时枯草芽孢杆 菌PB12的拮抗作用。【具体实施方式】 本专利技术技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的 任意组合。【具体实施方式】 一：本实施方式抑制马铃薯丝核病菌的枯草芽孢杆菌为枯草芽 孢杆菌PB12,保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地 址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为 CGMCCNo. 10603〇 本实施方式枯草芽孢杆菌PB12革兰氏染色阳性，杆状，两端钝平，多数菌体串联 成串，呈不规则形状。产芽孢，30°C培养24h芽孢形成率达80%以上，芽孢端生，椭圆形，不 膨大，培养至48h，芽孢全部脱落。在NYDA固体培养基上的菌落呈乳白色，褶皱，边缘不整 齐，菌落中心凸起呈脊状，易挑起。 本实施方式枯草芽孢杆菌PB12在50°C可以生长，pH5. 7可以生长，7% NaCl可以 生长，厌氧条件下不生长。发酵葡萄糖产酸不产气，接触酶反应阳性，淀粉水解呈阳性，VP 试验呈阳性，利用柠檬酸盐反应呈阳性，明胶液化反应呈阳性，石蕊牛奶还原胨化反应呈阳 性，硝酸盐反应呈阳性，甲基红反应呈阳性。 本实施方式枯草芽孢杆菌PB12可在NYD培养基上生长，最适生长温度为30°C，最 适pH为7. 2~7. 5,转速150r/min。NYD培养基由牛肉浸膏8g、酵母膏5g、葡萄糖10g、琼 月旨15g和蒸馏水1000 mL组成。 本实施方式枯草芽孢杆菌PB12由呼兰区白奎镇庆平屯马铃薯田间感病区域的土 壤中分离得到。分离方法按以下步骤进行：一、以马铃薯丝核菌为靶标，取马铃薯田间感病 区域土壤10克，放于IOOmL带玻璃珠和无菌水的三角瓶中，震摇20分钟，使土样和水充分 混合，将细胞分散。二、利用梯度稀释法稀释至IO 3UO4UO5三个梯度，将该批次的浓缩液进 行梯度稀释涂布于NYDA培养基上，置于32°C培养箱内培养18h，挑选不同菌落形态的菌株 进行标号并分离培养；分离出的单个菌落接入装有NYD培养基（5mL)的试管中，于32°C， 150r/min培养18h。选择拮抗作用强、抑菌谱广的生防菌株进行纯化、保存。即为本实施方 式的枯草芽孢杆菌PB12。 对分离筛选得到的枯草芽孢杆菌PB12进行分子鉴定，按以下步骤进行：提取菌株 的总DNA，采用细菌的16S rDNA通用引物，以基因组DNA为模板进行PCR扩增。然后利用胶 回收试剂盒回收纯化PCR产物；之后，进行克隆、转化，筛选阳性克隆子菌落，经扩大培养后 测序。测序结果与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比对，与芽孢杆菌属（Bacillus Cohn)有极高的同源性，同源性为98%以上。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生 化鉴本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株抑制马铃薯立枯丝核病菌的枯草芽孢杆菌，其特征在于该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PB12，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No.10603。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李晶，曹旭，刘宇帅，陈静宇，张淑梅，孟立强，姜威，胡基华，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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