一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)T861菌株，已于2015年4月10日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2015222。本发明专利技术菌株T861的发酵液对柑橘溃疡病菌具有抑制作用，利用针刺法测得其无菌发酵液对柑橘溃疡病菌体外抑制率达到86.7％以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌菌株，具体 涉及一种粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens)T861菌株，同时涉及该菌株在防治柑橘溃 疡病菌方面的应用。
技术介绍
柑橘溃疡病是由Xanthomonas axonopodis pv. Citri引起的一种检疫性病害，对 柑橘的品质和产量造成严重影响，在世界上有柑橘作物生长的大部分地区均有所报道。柑 橘溃疡病是一种细菌性病害，具有传染速度快、传播途径广、危害程度高、病症顽固难除的 特点。尽管世界各国制定严格的规定，采取多种措施用以阻断溃疡病的传入，但是，农林产 业结构调整和经济贸易的发展，仍加快了柑橘溃疡病的侵染步伐，感病面积逐年攀升，分布 范围迅猛扩大，在亚洲、南美洲、非洲、印度洋群岛以及中东地区都有发生。 对于柑橘溃疡病的发现，各地区积极采取措施防治。在海湾地区及时通过产地检 疫、隔离检疫和就地焚烧感病植株加强病害防控，病情得到有效的控制；但随后在阿根廷、 澳大利亚、巴西、阿曼、沙特阿拉伯、留尼汪岛、美国和乌拉圭流行爆发，其中一些国家采取 了一些试图根除柑橘溃疡病的措施，但是却以失败告终，而巴西、佛罗里达州和乌拉圭这 些国家仍积极的为根除病害做着不懈努力。通常的溃疡病不会在一些干旱的柑橘属果树 生长的地区发生，有的地方甚至已经根除了这种病害。但是，此病在其他地区广泛的发生 继续威胁着柑橘产业，尤其是在那些无病区，加深对柑橘溃疡病的研宄已经引起了全世界 范围的重视。Rossetti (1977)、Civerolo (1981)、Schoulties (1987)、Civerolo (1991)和 Goto(1992)在他们的研宄中都阐述了关于防治溃疡病的观点，但是他们的研宄都是受到 了特定区域的限制，对于今天这个有着深度交流的时代而言或许已经过时。化学防治、农 业防治等方法防治柑橘溃疡病也日渐凸显出其对环境问题的影响以及对技术问题的要求， 因此，生物防治有了更好的应用空间，利用生物防治的方法不仅可以解决农药残留、生态破 坏、技术落后等一系列难题，其防治效果也比较明显。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens)T861菌株，为柑橘溃疡病菌的生物防治提供新的微生物资源。 本专利技术所述的粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens)T861菌株，已于2015年04 月10日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为 CCTCC M2015222。 本专利技术的菌株T861具有如下特性： 1、培养学方面的特性 本专利技术的菌株T861于30°C在LB固体培养基平板上生长，菌落呈乳白色不透明，有 光泽，边缘规则，结合参见图1，有轻微气味。 2、形态学方面的特性 菌体为革兰氏阴性菌，周生鞭毛，无荚膜，无芽孢，呈短杆状。 3、生理生化特征 淀粉水解：阴性 纤维素分解：阴性 甲基红（M.R.):阳性 乙酰甲基甲醇（V.P.):阳性 过氧化氢酶：阴性 明胶液化：阳性 产硫化氢：阴性 硝酸盐还原：阳性 吲哚：阴性。 提取本专利技术菌株的细菌基因组DNA，16S rDNA片段采用通用引物27F/1492R进 行PCR扩增，扩增片段由铂尚生物技术（上海）有限公司测序，测得的序列于NCBI上进行 同源性比较。结果显示其16S rDNA序列与粘质沙门氏菌同源性最高，达到99%以上。经 Biolog检测，诘抗菌株T861与Serratia marcescens相似性为0. 535,远大于其他菌株相 似度，符合鉴定条件。通过形态观察和ITS序列分子鉴定，确定本专利技术菌株为粘质沙雷氏菌 (Serratia marcescens)的一新种，命名为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens)T861 菌 株。 将本专利技术的菌株T861以4-5%接种重量接入LB液体培养基中发酵培养可制得发 酵液，发酵培养条件为：温度28-37°C、pH 6. 5-7. 5、时间24-36h及转速180-200r/min，最佳 发酵培养条件为：温度30°C、pH 7. 0、时间24h及转速180r/min。该发酵液对柑橘溃疡病 菌具有抑制作用，利用针刺法测得其无菌发酵液对柑橘溃疡病菌体外抑制率达到86. 7%以 上。【附图说明】 图1是本专利技术菌株T861的单菌落图。 图2为本专利技术菌株T861的抑菌图。 图3为本专利技术菌株T861无菌发酵液对柑橘溃疡病菌的拮抗效果图。 其中，A :对照；B :喷有本专利技术菌株的发酵液。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步地详细说明。 以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。这些实施例是用于说明本专利技术而 不限于限制本专利技术的范围。实施例中采用的实施条件可以根据厂家的条件做进一步调整， 未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。 实施例1本专利技术拮抗菌株T861的制备 从湘西自治州龙山县采集土样，每种土样取l〇g，分别加到装有90ml无菌水（有 玻璃珠）的三角瓶中，震荡lh，过滤去沉淀，所得菌悬液用无菌水进行梯度稀释，依次稀释 成10'10'10'10'10Λ细菌采用混匀法，真菌和放线菌采用涂沫法进行分离。28°C下 培养48h，选取形态、大小、色泽不同的菌落，进行纯化，斜面培养基保存。 将柑桔溃疡病菌制成菌液与融化的培养基混匀后倒入灭菌培养皿中，在凝固的凝 胶平板上打一孔，将分离得到的菌株分别制成一定浓度的菌悬液，用移液枪取IOOul菌液 加到相应平板的圆孔中，设3个平行。将标记好的培养皿置于28°C的恒温箱中，每隔24h观 察一次抑菌圈的形成情况。选择有拮抗效果的菌株用牛津杯法进行复筛。 实施例2本专利技术菌株T861对柑橘溃疡病菌的室内抑制作用 将柑桔溃疡病菌制成菌液与融化的培养基混匀后倒入灭菌培养皿中，在凝固的凝 胶平板上打一孔，将分离得到的T861菌株分别制成一定浓度的菌悬液，用移液枪取IOOul 菌液加到相应平板的圆孔中，设3个平行。将标记好的培养皿置于30°C的恒温箱中，每隔 24h观察一次抑菌圈的形成情况。菌株T861形成的抑菌圈直径的平均值在55mm左右，抑菌 圈边缘略微隆起，见图2。 实施例3本专利技术菌株T861用于柑橘活体上防治柑橘溃疡病菌 挑取本专利技术菌株T861接种到25ml液体LB液体培养基中，37°C，180r/min培养 24h，得到发酵液。选取生长状况相似的柑橘树3棵，每棵树上选取生长发育程度相似的已 完全展开的新叶四片，用已灭菌的接种针将叶片上表皮刺破（每叶20孔），先用喷雾法将柑 橘溃疡病菌喷于叶片上表面及下表面，Id后将制得的本专利技术菌株T861的发酵液喷于柑橘 溃疡病菌处理过的3片柑橘新叶作为处理，其余1叶为对照，对照叶片上不喷本专利技术菌株的 发酵液而喷清水，喷施菌株T861发酵液一个月后观察发病情况。每棵树为一个处理组，结 合参见图3,结果见下表1。 结果显示，每个处理组中对照（CK)除个别刺孔因伤口太大导致坏死无法侵染外， 其他均形成柑橘溃疡病典型病斑，而处理的病斑抑制率达到86. 7%以上。 表1本专利技术菌株T861发酵液对柑橘溃疡病的抑制作用【主权项】1. 一种抗柑橘溃疡病本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗柑橘溃疡病菌的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)T861菌株，已于2015年04月10日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2015222。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐前君，罗葵，戴良英，周志成，肖启明，刘双清，李魏，李迅，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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