本发明专利技术公开了一株武夷菌素高产菌株及其应用。本发明专利技术所提供的武夷菌素高产菌株具体为不吸水链霉菌武夷变种(Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis)W‑273，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.9604。发酵罐发酵培养该菌株，发现其产武夷菌素的量达到6500‑7500μg/mL发酵液，较出发菌株CK‑15提高了约132‑317％，该菌株具有广阔工业应用的前景。
【技术实现步骤摘要】
一株生物农药武夷菌素的高产菌株W-273及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一株武夷菌素高产菌株及其应用。
技术介绍
生物农药是农作物病虫害生物防治的重要手段，具有安全、高效和环境友好的特点，其中农用抗生素在生物农药占重要的地位。武夷菌素是由不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesanhygroscopicusvar.wuyiensis)产生的一种高效、广谱、低毒、与环境相容性好的农用抗生素，主要用于防治农作物真菌病害。2000年武夷菌素获得国家五部委颁发的“国家重点新产品”证书(2000G041B326001)。2001年武夷菌素被列入露地、保护地无公害番茄生产技术规程(农业行业标准NY/T5006-2001、NY/T5074-2002)，全国多个省市(自治区)也将该技术列入无公害黄瓜、辣椒、草莓、茄子生产技术规程。2009年武夷菌素又被列入蔬菜病虫害安全防治技术规范(国家标准)，指定用于防治茄果类、瓜类、绿叶类蔬菜白粉病、灰霉病、叶霉病等多种病害。2010年武夷菌素产品获得国家有机产品认证(COFCC-R-0903-0070)。目前，武夷菌素的应用已经成为我国无公害蔬菜和有机蔬菜生产中防治病害的核心技术。提高防病效果和降低生产成本是武夷菌素产业化生产和大面积推广面临的主要问题。武夷菌素生产方法主要包括产生菌二级发酵培养、有效成分提取和产品加工三个主要步骤，因此，筛选武夷菌素高产菌株，同时改进高产菌株的培养条件对于降低生产成本起着重要作用。由于采用原来武夷菌素产生菌及培养基配方发酵生产武夷菌素效价较低、生产成本高，严重影响武夷菌素的产业化生产。因此，选育武夷菌素高产菌株W-273并改进该高产菌株培养条件，对于提高武夷菌素产业化生产水平和增强产品在农业市场的竞争力具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株生物农药武夷菌素的高产菌株及其在发酵生产的应用。本专利技术所提供的武夷菌素高产菌株，具体为不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273。该菌株是从武夷菌素生物合成正调控基因wysR过表达菌株的单菌落中筛选得到的新菌株，研究表明，W-273菌株在MS培养基上较原始菌株CK-15生长迅速，产孢时间早且产孢量增加。该菌株已于2014年8月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCCNo.9604。本专利技术的再一个目的是提供一种菌剂。本专利技术所提供的菌剂的活性成分为所述不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604。所述不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604或所述菌剂在制备武夷菌素中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的还一个目的是提供一种制备武夷菌素的方法。本专利技术所提供的制备武夷菌素的方法，具体可包括如下步骤：发酵培养所述不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604，收集发酵产物，获得武夷菌素。在上述方法中，所述发酵培养的培养基的溶剂为水，溶质及其浓度为玉米粉30mg/ml、黄豆粉20mg/ml、葡萄糖39mg/ml、氯化铵4mg/ml、碳酸钙2.65mg/ml、氯化镁0.4mg/ml；pH6.89。在上述方法中，所述发酵培养可为摇瓶发酵培养；所述摇瓶发酵培养的培养时间可为48～72h(如60h)；所述摇瓶发酵培养的培养温度可为26～30℃(如28℃)；所述摇瓶发酵培养的震荡转速可为180～220rpm(如220rpm)。在上述方法中，所述发酵培养也可为发酵罐发酵培养；所述发酵罐发酵培养的培养温度可为26～30℃(如28℃)；所述发酵罐发酵培养过程中的罐压可为0.02～0.10MPa(如0.05MPa)。所述发酵罐发酵培养过程中的搅拌转速可为50～300rpm(如220rpm)。所述发酵罐发酵培养可为一级发酵或二级发酵；当所述发酵罐发酵培养为一级发酵时，培养时间为45～100小时(如60小时)；当所述发酵罐发酵培养为二级发酵时，两次发酵培养时间依次为16～45小时(如18小时)、30～80小时(如60小时)。本专利技术的又一个目的是提供所述菌剂的制备方法。所述菌剂的制备方法，具体可包括如下步骤：将所述不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604作为活性成分，得到所述菌剂。所述不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604的发酵液或所述发酵液的过滤液也属于本专利技术的保护范围。本专利技术以不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)CK-15为出发菌株，对其进行代谢工程改造，筛选得到不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604。发酵罐发酵培养该菌株，发现其产武夷菌素的量达到6500-7500μg/mL发酵液，较出发菌株CK-15提高了约132-317％，该菌株具有广阔工业应用的前景。保藏说明菌种名称：不吸水链霉菌武夷变种拉丁名：(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)菌株编号：W-273保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏机构简称：CGMCC地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号保藏日期：2014年8月26日保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.9604附图说明图1为高产菌株W-273和原始菌株CK-15在MS培养基培养不同天数观察结果。图2为高产菌株W-273和原始菌株CK-15培养不同天数显微镜观察结果(100×)。图3为高产菌株W-273和原始菌株CK-15培养不同天数显微镜观察结果(1000×)。图4为高产菌株W-273和原始菌株CK-15孢子电镜扫描对比图。a(4.0k×)和A(15.0k×)为高产菌株W-273；b(4.0k×)和B(15.0k×)为原始菌株CK-15。图5为高产菌株W-273和原始菌株CK-15不同发酵时间菌丝体生长情况。图6为高产菌株W-273和原始菌株CK-15不同发酵时间发酵液总糖含量。图7为高产菌株W-273和原始菌株CK-15不同发酵时间发酵液效价。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)CK-15：记载于“王万群，武夷菌素产生菌CK-15细菌人工染色体(BAC)文库构建，2008.6.1”一文中。公众可从中国农业科学院植物保护研本文档来自技高网...
【技术保护点】
不吸水链霉菌武夷变种(Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis)W‑273，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.9604。
【技术特征摘要】
1.不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.9604。2.一种菌剂，它的活性成分为权利要求1所述的不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273CGMCCNo.9604。3.权利要求1所述的不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273或权利要求2所述的菌剂在制备武夷菌素中的应用。4.一种制备武夷菌素的方法，包括如下步骤：发酵培养权利要求1所述的不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)W-273，收集发酵产物，获得武夷菌素。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的培养基的溶剂为水，溶质及其浓度为玉米粉30mg/ml、黄豆粉20mg/ml、葡萄糖39mg/ml、氯化铵4mg/ml、碳酸钙2.65mg/ml、氯化镁0.4mg/ml。6.根据权利要求4或5所...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛蓓孛，张克诚，王家旺，刘艳，刘炳花，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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