9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法技术

本发明专利技术涉及应用选择吸附分离的分析方法领域，具体为一种9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法。一种9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法，采用高效液相色谱仪操作，其特征是：按如下方法依次实施：a.设置高效液相色谱仪；b.配制标样溶液；c.配制待测样品溶液；d.分析标样；e.分析试样；e.计算纯度。本发明专利技术操作简便，成本低廉，准确性高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及应用选择吸附分离的分析方法领域，具体为一种9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法。
技术介绍
9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺（简称Fmoc-ONSu）是一种无色或浅黄色针状晶体，分子式C19H15NO5，分子量337.3，结构式为：，9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺是有机合成的重要原料，目前主要用作肽合成和抗血栓类药物中间体。目前对Fmoc-ONSu的合成和应用的研究报道较多，但还没有公开资料介绍Fmoc-ONSu的分析方法。尽管已有文献或专利提到Fmoc-ONSu合成产物的液相色谱含量，但对液相色谱的详细操作条件都没有公开，对于采用哪种类型的高效液相色谱柱及具体操作条件都有待详细摸索。目前常用的方法是进行柱前或柱后衍生，即试样先和衍生化试剂反应生成稳定的具有紫外生色团或荧光团的衍生化产物，再通过紫外光或荧光检测器获得相应的响应，从而可检测出试样的实际含量。这种方法虽然理论上可以用来测定Fmoc-ONSu的真实含量，但衍生剂稀少，操作手续繁琐，有较大缺陷。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，提供一种操作方便、测定准确的液相色谱检测方法，本专利技术公开了一种9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法。本专利技术通过如下技术方案达到专利技术目的：一种9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法，采用高效液相色谱仪操作，其特征是：按如下方法依次实施：a. 设置高效液相色谱仪：高效液相色谱仪的色谱柱作为固定相，固定相为反相键合固定相，即色谱柱的填料选用十八烷基键合相硅胶、辛烷基键合相硅胶和氰基键合相硅胶中的任意一种，填料的粒径不大于5μm，色谱柱的长度为10cm～50cm，色谱柱的内径为4mm～5mm；高效液相色谱仪的流动相选用水、乙腈、四氢呋喃、环己烷、正己烷、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷和甲苯中的任意一种；高效液相色谱仪的检测器采用多波长可变紫外-可见光检测器，检测器所发射的紫外线的波长在220nm～370nm；b. 配制标样溶液：以色谱纯的流动相为溶剂，用容量瓶等仪器将9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的标样配制成浓度为0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作为分析用标样，配制时用超声波脱气溶解并将溶液混合摇匀后作为分析用标样；c. 配制待测样品溶液：以色谱纯的流动相为溶剂，用容量瓶等仪器将含有9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的待测样品配制成浓度为0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作为待分析的试样，配制时用超声波脱气溶解并将溶液混合摇匀后作为分析用标样；d. 分析标样：待高效液相色谱仪条件稳定后，用高效液相色谱仪分析标样，用50μL容量的微量注射器向高效液相色谱仪内注入标样，标样各组分得以分离后，得出标样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积；e. 分析试样：待高效液相色谱仪条件稳定后，用高效液相色谱仪分析试样，用50μL容量的微量注射器向高效液相色谱仪内注入试样，试样各组分得以分离后，得出试样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积；f. 计算纯度：采用外标法以标样定量试样的纯度，待测样品中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的纯度，以质量分数表示，按下式计算：X1=X0××——(1)，(1)式中：X1：试样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的纯度，以百分比表示，X0：标样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的纯度，以百分比表示，A1：试样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积，A0：标样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积，m1：试样的质量，m0：标样的质量。采用外标法分析过程快捷，方便、易操作，分析结果误差小，得到的色谱峰峰形尖锐、对称性好，可作为9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺合成及提纯过程中的纯度检测，即适用于各种纯度的9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺样品。所述的9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法，其特征是：流动相中还中加入改性剂溶液，改性剂溶液的溶质选用柠檬酸-柠檬酸钠、醋酸-醋酸钠、磷酸二氢钠、醋酸、磷酸、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸、磷酸氢二钠-柠檬酸、邻苯二甲酸-盐酸和甘氨酸-盐酸中的任意一种，改性剂溶液的质量是流动相质量的0.1%～5%；添加了改性剂后，不仅可以改善分离度，而且可以抑制Fmoc-ONSu在流动相尤其是在水中的分解。所述的9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法，其特征是：在d和e步骤时，高效液相色谱仪内流动相的流速都为0.8mL/min～1.5mL/min，色谱柱的柱温都为20℃～60℃，标样和试样的进样量都为4μL～20μL，液相色谱分析时间都为1min～40min。对于9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺，要建立一种分析方法必须解决以下问题：1. 针对9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺不稳定易水解的化学性质，选择一种既能准确分离又快速简便测定9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的一种分离模式；(1) 色谱分离模式的选择：色谱是测定物质纯度常用的分析方法，其中以气相色谱和高效液相色谱为主。本专利技术采用高效液相色谱而不用气相色谱的构思是考虑9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺不稳定易分解不能用气相色谱分析。高效液相色谱采用液体做流动相，无需高温，它不仅可以分析高纯度9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺产品，还可以分析其中间产物，扩大了它的使用范围，提高了通用性。(2) 高效液相色谱分离模式的选择：高效液相色谱法中常用的有液固色谱法、液液色谱法、键合相色谱法、亲和色谱法和体积排阻色谱法。具体采用哪种分离模式，本专利技术主要考虑到9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺这个样品属于有一定极性的多环芳烃，具有比较大的容量因子（k'）值，还要考虑各种方法中柱效、分离选择性、固定液稳定性及检测器灵敏度的优劣，考虑选用键合相色谱法。化学键合固定相对各种极性溶剂都有良好的化学稳定性和热稳定性。它的色谱柱柱效高、使用寿命长、重现性好，几乎对各种类型的有机化合物都有良好的选择性。(3) 键合相色谱分离模式的选择：根据键合固定相与流动相相对极性的强弱，键合相色谱法分为正相键合相色谱法和反相键合相色谱法。一般地，极性较小的化合物在正相中流出较快，而极性较大的化合物在反相中流出较快。考虑到9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的极性较大，因此选用反相键合液相色谱检测9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度是适宜的。2. 为提高分离效果，改善分离度，可在流动相中适当加入一定量的水，但须避免9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺在流动相中分解；对于Fmoc-ONSu这类不稳定易水解的样品常用的方法是采用衍生法，即柱前衍生或柱后衍生，但衍生法手续繁琐、衍生剂价格昂贵，不是理想的测定方法。通过大量试验探索，采用在流动相中加入改性剂，既能防止9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺在流动相中分解，又不影响其在色谱柱内的分离效果。试验证明在流动相中加入一定量的改性剂如醋酸－醋酸钠是可行的。3. 选择相匹配的检测器并确定相关的检测参数；液相色谱的检测器很多，常用的有紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差检测器、电化学检测器、电本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法，采用高效液相色谱仪操作，其特征是：按如下方法依次实施：a. 设置高效液相色谱仪：高效液相色谱仪的色谱柱作为固定相，色谱柱的填料选用十八烷基键合相硅胶、辛烷基键合相硅胶和氰基键合相硅胶中的任意一种，填料的粒径不大于5μm，色谱柱的长度为10cm～50cm，色谱柱的内径为4mm～5mm；高效液相色谱仪的流动相选用水、乙腈、四氢呋喃、环己烷、正己烷、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷和甲苯中的任意一种；高效液相色谱仪的检测器采用多波长可变紫外‑可见光检测器，检测器所发射的紫外线的波长在220nm～370nm；b. 配制标样溶液：以色谱纯的流动相为溶剂，将9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的标样配制成浓度为0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作为用于分析的标样；c. 配制待测样品溶液：以色谱纯的流动相为溶剂，将含有9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的待测样品配制成浓度为0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作为待分析的试样；d. 分析标样：待高效液相色谱仪条件稳定后，用高效液相色谱仪分析标样，向高效液相色谱仪内注入标样，标样各组分得以分离后，得出标样中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积；e. 分析试样：待高效液相色谱仪条件稳定后，用高效液相色谱仪分析试样，向高效液相色谱仪内注入试样，试样各组分得以分离后，得出试样中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积；e. 计算纯度：采用外标法以标样定量试样的纯度，待测样品中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的纯度，以质量分数表示，按下式计算：X1=X0××——(1)，(1)式中：X1：试样中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的纯度，X0：标样中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的纯度，A1：试样中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积，A0：标样中9‑芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积，m1：试样的质量，m0：标样的质量。...

【技术特征摘要】
1.一种9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺纯度的液相色谱测定方法，采用高效液相色谱仪操作，其特征是：按如下方法依次实施：
a. 设置高效液相色谱仪：高效液相色谱仪的色谱柱作为固定相，色谱柱的填料选用十八烷基键合相硅胶、辛烷基键合相硅胶和氰基键合相硅胶中的任意一种，填料的粒径不大于5μm，色谱柱的长度为10cm～50cm，色谱柱的内径为4mm～5mm；
高效液相色谱仪的流动相选用水、乙腈、四氢呋喃、环己烷、正己烷、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷和甲苯中的任意一种；
高效液相色谱仪的检测器采用多波长可变紫外-可见光检测器，检测器所发射的紫外线的波长在220nm～370nm；
b. 配制标样溶液：以色谱纯的流动相为溶剂，将9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的标样配制成浓度为0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作为用于分析的标样；
c. 配制待测样品溶液：以色谱纯的流动相为溶剂，将含有9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的待测样品配制成浓度为0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作为待分析的试样；
d. 分析标样：待高效液相色谱仪条件稳定后，用高效液相色谱仪分析标样，向高效液相色谱仪内注入标样，标样各组分得以分离后，得出标样中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺组分的峰面积；
e. 分析试样：待高效液相色谱仪条件稳定后，用高效液相色谱仪分析试样，向高效液相色谱仪内注入试样，试样各组分得以分离后，得出试样...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈叶飞，
申请(专利权)人：上海宝锋工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31