一种霞草提取物的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于天然药物领域，具体涉及一种霞草提取物的制备方法及其应用。本发明专利技术霞草提取物的制备方法，包括下述的步骤：（a）霞草干燥根为原料，经乙醇回流提取后上大孔树脂柱，以乙醇-水系统梯度洗脱，合并40-70%乙醇洗脱液，得到霞草总皂苷；（b）步骤（a）中所得的霞草总皂苷碱水解上大孔树脂柱，即得。本发明专利技术通过碱水解将大量存在于霞草根中没有抗肿瘤活性的，或活性较弱的总皂苷转变成具有强抗肿瘤活性的提取物。经药理实验证明，本发明专利技术的制备方法制备的霞草提取物具有优异的抗肿瘤活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然药物领域，具体涉及一种霞草提取物的制备方法及其应用。
技术介绍
目前,恶性肿瘤(简称癌症)仍然是威胁人类生命和健康的主要疾病。随着工业化、城市化进程的加快和环境污染的加重，全球癌症的发病率呈现持续升高的总体趋势,癌症已成为全球性的公共卫生问题。近年来，尽管抗肿瘤药物的研发与应用取得重要进展，某些类型肿瘤的化疗取得突出的疗效。但是，对于大多数类型肿瘤，特别是发病率较高的实体性肿瘤（如肺癌、肝癌、结肠癌及胰腺癌等）还缺乏有效的药物，不少抗肿瘤药在临床应用过程中产生耐药性，毒副作用大。发现与研究新型有效的抗肿瘤药物具有极其迫切的需要。因此，寻找安全有效的抗肿瘤药物仍然是一个极为重要的课题。自然界中植物资源丰富，是研究抗肿瘤新药的重要来源。目前用于抗肿瘤药物中的天然药物包括了长春碱类、三尖杉酯碱类、鬼臼毒素类、喜树碱类、紫杉醇类等。相对于人工合成的化学药物，天然药物毒性较低的优点在肿瘤治疗中得到了大量应用。因此，从天然产物中寻找新的活性成分，并进而研制新的药物为当今寻找安全有效的抗肿瘤药物的重要途径。霞草（Gypsophila oldhamiana Miq.）为石竹科石头花属植物，主产于山东、山西、陕西等地。具有清热凉血、活血散瘀、消肿止痛、化腐生肌等功效。霞草中富含三萜皂苷类，如皂皮酸、丝石竹皂苷、常青藤皂苷等成分。霞草总皂苷储量丰富，该部位在药材中含量高达约20%，但其活性并不十分明确。专利200510044301.5提供了一种从霞草（Gypsophila oldhamiana Miq.）根中提取的霞草提取物的方法，具体如下：  1、霞草粗提物的制取： (1)、取霞草根自然干燥后粉碎； (2)、用溶剂提取；所说的溶剂它选自丙酮、醇类水或水醇混合溶剂，所说的醇类为甲醇、乙醇、异丙醇等短链醇。 (3)、提取液减压浓缩得提取物浸膏，即为霞草粗提物，该粗提物中含有5%-30%的皂苷；该霞草粗提物也可以按以下方法来提取：A、粉碎的霞草根用水提取； B、提取液浓缩成相对密度1.04～1.34的稠浸膏C、稠浸膏中加入乙醇至乙醇浓度为40～95%；D、静置，取上清液浓缩成浸膏，即为霞草粗提物。2、霞草粗提物的精制：(1)、将霞草粗提物加水制成水混悬液； (2)、过大孔树脂柱，这里所用的大孔树脂孔为中低极性大孔树脂，先用水或l-l0%低浓度的乙醇或甲醇溶液洗脱，除去极性溶剂中的杂质；    (3)、再用20%以上的高浓度乙醇或甲醇洗脱； (4)、收集高浓度醇洗脱液，蒸馏回收溶剂，干燥、制得含皂苷的精制霞草提取物，该提取物中含有30%以上的皂苷。3、含皂苷霞草提取物的纯化：上述经精制后的霞草提取物，进一步用有机溶剂进行纯化可制得更高纯度的霞草提取物，其中皂苷含量可达到80%以上，这里所说的有机溶剂它选自正丁醇、醋酸乙酯、丙酮一乙醚的混合溶剂、氯仿一甲醇一水的混合溶剂或石油醚。专利200510044301.5的霞草提取物的制备方法，根据需要可以制备得到皂苷含量在5%以上或10%以上或30%以上或50%以上或80%以上，具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物。但是，制备得到的霞草提取物其活性较低，在成药过程中服用量较大。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术提供了一种霞草提取物的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供该方法制备霞草提取物在制备抑制癌细胞增殖药物中的应用。所述癌细胞为肝癌细胞Bel-7402、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7、结肠癌细胞HCT-8、卵巢癌A2780、口腔上皮细胞癌KB，宫颈癌细胞Hela，前列腺癌细胞PC-3M，肺腺癌细胞A549中的一种或几种。本专利技术是通过下述的技术方案来实现的：一种霞草提取物的制备方法，包括下述的步骤：（a）霞草干燥根为原料，以4-10倍量的10-80%乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过滤或高速离心，滤液或离心上清液上大孔树脂柱，以乙醇-水系统梯度洗脱，合并40-70%乙醇洗脱液，减压蒸干，得到霞草总皂苷。步骤（a）得到的提取物中，其有效成分为霞草总皂苷，该提取物中霞草总皂苷含量≥50%；（b）将1重量份步骤（a）中所得的霞草总皂苷和5-20重量份1-10%氢氧化钾或氢氧化钠水溶液于40-100℃水浴中温热或回流进行反应1-40小时，至反应液中的霞草总皂苷提取物主斑点消失；反应液放冷后加酸调节pH值至5-6，然后上大孔树脂柱，以乙醇-水系统梯度洗脱，合并40%-70%乙醇液洗脱液，减压回收乙醇至相对密度1.08-1.25的稠膏，冷冻干燥，即得。步骤（b）对霞草总皂苷进行了进一步的水解，得到水解后的霞草总皂苷称之为霞草总次级皂苷，该霞草总次级皂苷是霞草抗肿瘤作用的主要活性成分。该提取物中活性总次级皂苷含量≥50%。上述的霞草提取物的制备方法中，所述步骤（a）中大孔树脂柱为D101、D1、HPD100、HPD300或AB-8大孔树脂柱中的一种。优选的，上述的霞草提取物的制备方法中，所述步骤（a）中大孔树脂柱为D101大孔树脂柱。上述的霞草提取物的制备方法中，所述步骤（a）中乙醇-水系统梯度洗脱为，先用20%以下的乙醇洗脱去除杂质，再用30%以上的高浓度乙醇洗脱，收集40-70%乙醇洗脱液。上述的霞草提取物的制备方法，所述步骤（b）中氢氧化钾或氢氧化钠水溶液浓度为5%（5%为质量百分比浓度），氢氧化钾或氢氧化钠的用量为10ml/g霞草总皂苷，水浴温度为60℃，回流进行反应时间为10小时。上述的霞草提取物的制备方法中，所述步骤（b）中大孔树脂柱为D101、D1、HPD100、HPD300或AB-8大孔树脂柱中的一种。上述的霞草提取物的制备方法中，所述步骤（b）中乙醇-水系统梯度洗脱为，先用20%以下的乙醇洗脱去除杂质，再用30%以上的高浓度乙醇洗脱，收集40-70%乙醇洗脱液。以上所述的霞草提取物的制备方法，详细步骤为：（a）取霞草干燥根为原料，以6-8倍量的40-60%乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过滤或高速离心，滤液或离心上清液上D101型大孔树脂充分吸收后，依次用水、20%乙醇、50%乙醇液洗脱至洗脱液无色，收集50%乙醇洗脱液，减压蒸干，得到霞草总皂苷；（b）步骤（a）中所得的霞草总皂苷加入5%氢氧化钾或氢氧化钠水溶液，氢氧化钾或氢氧化钠水溶液的用量为10ml/1g霞草总皂苷，于60℃水浴中温热或回流进行反应10小时，至反应液中的霞草总皂苷提取物主斑点消失；反应液放冷后加浓盐酸调pH值至5-6，然后上D101大孔树脂柱，充分吸收后，依次用水、20%乙醇、50%乙醇液洗脱至洗脱液无色，收集50%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至相对密度1.12-1.18的稠膏，冷冻干燥，即得霞草总次级皂苷提取物，该提取物中总皂苷含量≥70%。本专利技术的霞草提取物可以和药学上可接受的载体混合制备成各种药物制剂，如片剂、颗粒剂、胶囊、缓释剂、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种霞草提取物的制备方法，包括下述的步骤：（a）霞草干燥根为原料，以4‑10倍量的10‑80%乙醇回流提取2‑3次，每次0.5‑1.5小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过滤或高速离心，滤液或离心上清液上大孔树脂柱，以乙醇‑水系统梯度洗脱，合并40‑70%乙醇洗脱液，减压蒸干，得到霞草总皂苷；（b）将1重量份步骤（a）中所得的霞草总皂苷和5‑20重量份1‑10%氢氧化钾或氢氧化钠水溶液于40‑100℃水浴中温热或回流进行反应1‑40小时，至反应液中的霞草总皂苷提取物主斑点消失；反应液放冷后加酸调节pH值至5‑6，然后上大孔树脂柱，以乙醇‑水系统梯度洗脱，合并40%‑70%乙醇液洗脱液，减压回收乙醇至相对密度1.08‑1.25的稠膏，冷冻干燥，即得。

【技术特征摘要】
1.一种霞草提取物的制备方法，包括下述的步骤：
（a）霞草干燥根为原料，以4-10倍量的10-80%乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过滤或高速离心，滤液或离心上清液上大孔树脂柱，以乙醇-水系统梯度洗脱，合并40-70%乙醇洗脱液，减压蒸干，得到霞草总皂苷；
（b）将1重量份步骤（a）中所得的霞草总皂苷和5-20重量份1-10%氢氧化钾或氢氧化钠水溶液于40-100℃水浴中温热或回流进行反应1-40小时，至反应液中的霞草总皂苷提取物主斑点消失；反应液放冷后加酸调节pH值至5-6，然后上大孔树脂柱，以乙醇-水系统梯度洗脱，合并40%-70%乙醇液洗脱液，减压回收乙醇至相对密度1.08-1.25的稠膏，冷冻干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的霞草提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中大孔树脂柱为D101、D1、HPD100、HPD300或AB-8大孔树脂柱中的一种。
3.根据权利要求2所述的霞草提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中大孔树脂柱为D101大孔树脂柱。
4.根据权利要求1所述的霞草提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中乙醇-水系统梯度洗脱为，先用20%以下的乙醇洗脱去除杂质，再用30%以上浓度乙醇洗脱，收集40-70%乙醇洗脱液。
5.根据权利要求1所述的霞草提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中氢氧化钾或氢氧化钠水溶液浓度为5%，氢氧化钾或氢氧化钠的用量为10ml/g霞草总皂苷，水浴温度为60℃，回流进行反应时间为10小时。
6.根据权利要求1所述的霞草提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中大孔树脂柱为D10...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙敬勇，解龙霄，汪海洋，牟艳玲，谢天封，张浩超，邓志鹏，刘爱芹，王凤玲，王燕，
申请(专利权)人：山东省医学科学院药物研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37