本发明专利技术公开了一种检测复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞的药效的方法，所述检测方法包括以下步骤：制备复方依山红提取物溶液；将所述HepG 2.2.15细胞接种到RPMll640培养基中培养形成细胞悬浮液；通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A1，所述溶液d的吸光值A2及所述上清液c的吸光值A3来计算HepG 2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞的药效；本发明专利技术能客观灵敏的反应复方依山红药效，且本发明专利技术的检测方法简单易操作，有利于检测的规范化。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测复方依山红药效的方法。更具体地说，本专利技术涉及一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法
技术介绍
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)引起的一种严重的世界范围内危害人类健康的疾病，在我国感染率高达10％-20％，HBV持续感染会导致肝硬化和原发性肝细胞肝癌等肝脏疾病，现有的抗病毒药物如α-干扰索和拉米夫定的疗效仍然不能令人满意，因此寻找安全有效的抗HBV药物已成为当今医药学界一项迫切任务。中医药治疗慢性乙型肝炎在我国具有悠久的历史，近几十年有学者陆续对一些中草药进行抗HBV筛查，发现确实存在一些高效、低毒抑制HBV的中草药。复方依山红是从壮族民间挖掘出来的治疗乙型肝炎的经验方，对慢性乙型肝炎具有较好的治疗效果。该方由壮药材满山红、毛鸡骨草、田基黄、牛大力等组成，具有祛邪排毒、清利散瘀、疏通道路、扶助正气的作用(李常伟，李兵，卢汝梅，庞宇舟.复方依山红组方药材的化学成分研究进展[J].广西中医药，2014，(5)：7-8)。但是目前复方依山红的药理机制还未清楚，为了更好地促进复方依山红制剂的研制，本发检测评价复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供一种评价复方依山红药效的方法。目前复方依山红的药理机制还未清楚，为了更好地促进复方依山红制剂的研制，本专利技术通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A1，所述溶液d的吸光值A2及所述上清液c的吸光值A3来计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，能客观灵敏的反应复方依山红药效，且本专利技术的检测方法简单易操作。本专利技术提供的技术方案为：一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，所述检测方法包括以下步骤：1)、配置不同浓度的复方依山红提取物溶液；2)、将HepG2.2.15细胞接种到RPMl-1640培养基中培养形成细胞悬浮液；3)、依次将步骤1)中所述的不同浓度复方依山红提取物溶液分别加入到所述细胞悬浮液中，其中设有不加复方依山红提取物溶液的细胞悬浮液作为对照；4)、将步骤3)中加入了不同浓度复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液a后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液b，最后测试所述溶液b的吸光值A及测试所述上清液a的吸光值A1；将步骤3)中不加复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液c后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液d，测试所述溶液d的吸光值A2及测试所述上清液c的吸光值A3；5)、通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A1，所述溶液d的吸光值A2及所述上清液c的吸光值A3来计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，其中所述HepG2.2.15细胞的存活率＝(A/A2)×100％，不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率＝(A1/A3)×100％。优选的是，所述配置不同浓度的复方依山红提取物溶液为：取复方依山红提取物，溶于无菌去离子水，制成浓度为0.00032mg/L、0.0016mg/L、0.08mg/L、0.04mg/L、0.2mg/L、1mg/L的复方依山红提取物溶液。优选的是，所述复方依山红提取物制备方法：复方依山红由重量份的壮药材满山红20、毛鸡骨草20、牛大力10、田基黄10、黄根5组成，分别取4份所述复方依山红，每份65g，将所述4份复方依山红分别用95wt％乙醇、60wt％乙醇、30wt％乙醇、水作为提取溶剂，每种溶剂回流提取三次，合并提取液，减压干燥后分别得四种复方依山红提取物，不同浓度的醇萃取复方依山红提取物，能够更好的确定复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞作用的有效部位。优选的是，所述RPMl1640培养基含有遗传霉素浓度为360-400mg/L、胎牛血清的重量百分比为8-12％、谷氨酰胺的浓度为1-3mmol/L、青链霉的重量百分比为0.5-2％和NaHCO3的重量百分比为2-8％，所述RPMl1640培养基的PH值为7.4-7.6，适合HepG2.2.15细胞培养，能快速高效培养出HepG2.2.15细胞，并且活细胞数大于90％。优选的是，步骤2)中所述形成细胞悬液后计算细胞总数，活细胞数量不少于细胞总数的90％，所述HepG2.2.15细胞浓度为0.5×105个/mL-1.5×105个/mL。优选的是，采用自动酶标仪在吸收波长为515nm条件下测试所述溶液b的吸光值A及所述溶液d的吸光值A2，在吸收波长为450nm条件下测试所述上清液a的吸光值A1及所述上清液c的吸光值A3。本专利技术至少包括以下有益效果：(1)本专利技术通过测试并计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效；能客观灵敏的反应复方依山红药效，且本专利技术的检测方法简单易操作，有利于检测的规范化。(2)本专利技术提供了一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，通过复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，能客观地确定复方依山红提取物的质量及通过不同浓度醇提取的复方依山红提取物测试其对HepG2.2.15细胞的药效，能够更好的确定复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞作用的有效部位。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式结合下面实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。实施例1一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，所述检测方法包括以下步骤：1)、配置不同浓度的复方依山红提取物溶液；2)、将HepG2.2.15细胞接种到RPMl-1640培养基中培养形成细胞悬浮液；3)、依次将步骤1)中所述的不同浓度复方依山红提取物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：1)、配置不同浓度的复方依山红提取物溶液；2)、将HepG 2.2.15细胞接种到RPM1‑1640培养基中培养形成细胞悬浮液；3)、依次将步骤1)中所述的不同浓度复方依山红提取物溶液分别加入到所述细胞悬浮液中，其中设有不加复方依山红提取物溶液的细胞悬浮液作为对照；4)、将步骤3)中加入了不同浓度复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液a后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液b，最后测试所述溶液b的吸光值A及测试所述上清液a的吸光值A1；将步骤3)中不加复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液c后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液d，测试所述溶液d的吸光值A2及测试所述上清液c的吸光值A3；5)、通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A1，所述溶液d的吸光值A2及所述上清液c的吸光值A3来计算HepG 2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞的药效，其中所述HepG 2.2.15细胞的存活率＝(A/A2)×100％，不同浓度复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率＝(A1/A3)×100％。...
【技术特征摘要】
1.一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，所述
检测方法包括以下步骤：
1)、配置不同浓度的复方依山红提取物溶液；
2)、将HepG2.2.15细胞接种到RPM1-1640培养基中培养形成细胞悬浮液；
3)、依次将步骤1)中所述的不同浓度复方依山红提取物溶液分别加入到所述细胞
悬浮液中，其中设有不加复方依山红提取物溶液的细胞悬浮液作为对照；
4)、将步骤3)中加入了不同浓度复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离
上清液a后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液b，最后
测试所述溶液b的吸光值A及测试所述上清液a的吸光值A1；将步骤3)中不加复方依山
红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液c后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，
再加入碱缓冲溶液后成溶液d，测试所述溶液d的吸光值A2及测试所述上清液c的吸光值
A3；
5)、通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A1，所述溶液d的吸
光值A2及所述上清液c的吸光值A3来计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依
山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依
山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，其中所述HepG2.2.15细胞的存活率＝(A/A2)
×100％，不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制
率＝(A1/A3)×100％。
2.根据权利要求1所述检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其
特征在于：所述配置不同浓度的复方依山红提取物溶液为：取复方依山红提取物，溶于无
菌去离子水，制...
【专利技术属性】
技术研发人员：庞宇舟，卢汝梅，霍丽妮，韦建华，李兵，梁迪，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
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