一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法技术

一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法，包括以下步骤：(1)提取：首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:5-25，单位比例为g/mL，加入pH调节为1.5-7.5的水，加入石蒜属植物粉末质量1％-5％的酶，在40-80℃酶解0.5-2.5h，离心20min，过滤，取上清液，即得石蒜碱提取液；(2)纯化：①溶剂萃取；②阳离子交换树脂吸附；③C18反相硅胶柱层析；④正相硅胶柱层析；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得石蒜碱。本发明专利技术操作简单，生产成本低，对环境无污染，反应时间短,提取得率较高，比其他方法提取得率提高了30.46％；纯化工艺环保，且纯度高，可达99.3％。

【技术实现步骤摘要】
一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法
本专利技术涉及一种石蒜碱的提取方法，特别涉及一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法。
技术介绍
石蒜(Lycorisradiate.Herb)是石蒜科(Amaryllidaceae)石蒜属(Lycoris)的多年生草本植物，主要分布在亚洲，我国有17种，在我国湖南、湖北、江苏、浙江、福建等省均有分布。石蒜属植物具有较高的观赏价值，被誉为“中国郁金香”，石蒜鳞茎富含淀粉，如将其磨碎后用大量水淘洗，脱毒后食用，味如糯米粉，《救荒本草》中记载，可将其炒熟，水浸过食。石蒜性味辛、甘、温，具有消肿、杀虫的作用，其所含丰富的生物碱也得到广泛应用，尤其是石蒜碱，石蒜碱具有抗肿瘤、抗病毒的疗效，但是含量均较低。现有技术中主要有溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃取等方法，但存在环境污染严重、生产成本高等缺点。中国专利2006100512151公开了一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法，提取目标物为石蒜碱；该专利重在石蒜碱分离，工艺复杂，操作繁琐，乙酸乙酯价格较高，需要反复萃取。相比之下，本方法生产成本低，操作较简单。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种提取率高、成产成本低的从石蒜中提取石蒜碱的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案，一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法，包括以下步骤：(1)提取：首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:5-25(优选1:10-1:25，更优选1:10)，单位比例为g/mL，加入pH调节为1.5-7.5(优选3-6，更优选4.5)的水，加入石蒜属植物粉末质量1％-5％(优选2-5％，更优选4％)的酶，在40-80℃(优选35-65℃，更优选50℃)酶解0.5-2.5h(优选1-2h，更优选1.5h)，离心20min，过滤，取上清液，即得石蒜碱提取液；(2)纯化①溶剂萃取：将步骤(1)提取的石蒜碱提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得石蒜碱萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1～6(优选pH为2)用D-001型阳离子交换树脂，以上样速率1-3BV/h(优选3BV/h)上样至饱和，用含0.5-2.5mol/L(优选1.5mol/L)氨水的40％-80％(优选70％)乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相(流动相：V(乙腈)︰V(磷酸盐)为16︰84)溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶(200-300目)以柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10～30(优选1:10)，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得的石蒜碱。进一步，所述步骤④中，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，所述乙酸乙酯与石油醚的体积比为8.4:1.6。进一步，所述酶为纤维素酶与半纤维素酶的混合酶，纤维素酶与果胶酶的混合酶，半纤维素酶与果胶酶的混合酶，纤维素酶、半纤维素酶及果胶酶的混合酶中的一种。进一步，所述酶为纤维素酶与果胶酶的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1。进一步，所述石蒜属植物为忽地笑、红花石蒜、玫瑰石蒜、稻草石蒜、或中国石蒜(优选忽地笑)进一步，所述石蒜属植物粉末为鳞茎或花粉末。与现有技术相比，本专利技术操作简单，生产成本低，因采用的提取溶剂为水，按料液比1:10计算，若生产1kg石蒜碱，比使用甲醇或无水乙醇(工业用7.5元/公斤)作为提取溶剂，生产成本就降低42811元；对环境无污染，提取得率较高，提取得率提高了30.46％；反应时间短，与采用超声波辅助提取相比，时间缩短1.5h,与现有技术浸提方法相比，时间缩短2.5h；本专利技术只在传统水提工艺上增加酶解过程，具有一定的应用价值，易用于工业化生产；纯化工艺环保，且纯度高，可达99.3％。附图说明图1为本专利技术pH值对石蒜碱得率的影响分布图；图2为本专利技术酶用量对石蒜碱得率的影响分布图；图3为本专利技术酶解时间对石蒜碱得率的影响分布图；图4为本专利技术酶解温度对石蒜碱得率的影响分布图；图5为本专利技术料液比对石蒜碱得率的影响分布图。具体实施方式参照附图及实施例对本专利技术做进一步说明。本实施例包括以下步骤：(1)提取：首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末2.000g，以料液比1:5-25，单位比例为g/mL，分别加入pH调节为1.5-7.5的水，加入石蒜属植物粉末质量1％-5％的酶，在40-80℃酶解0.5-2.5h，离心20min，过滤，取上清液，即得石蒜碱提取液；(2)纯化①溶剂萃取：将步骤(1)提取的石蒜碱提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得石蒜碱萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至2，用D-001型阳离子交换树脂，以上样速率3BV/h上样至饱和，用含1.5mol/L氨水的70％乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相(流动相：V(乙腈)︰V(磷酸盐)为16︰84)溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶(200-300目)以柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得纯度为99.3％的石蒜碱。所述步骤④中，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，所述乙酸乙酯与石油醚的体积比为8.4:1.6。酶为纤维素酶与半纤维素酶的混合酶，纤维素酶与果胶酶的混合酶，半纤维素酶与果胶酶的混合酶，纤维素酶、半纤维素酶及果胶酶的混合酶中的一种。石蒜属植物为忽地笑、红花石蒜、玫瑰石蒜、稻草石蒜或中国石蒜。石蒜属植物粉末为鳞茎或花粉末。(1)酶种类的筛选称取2.000g石蒜鳞茎粉末，以料液比1:10(g:mL)分别加入pH调节为4.5的水，分别加入原料质量3％的纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、纤维素酶与半纤维素酶的混合酶、纤维素酶与果胶酶的混合酶、半纤维素酶与果胶酶的混合酶、纤维素酶与半纤维素酶及果胶酶的混合酶，在50本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:5‑25，单位比例为g/mL，加入pH调节为1.5‑7.5的水，加入石蒜属植物粉末质量1％‑5％的酶，在40‑80℃酶解0.5‑2.5h，离心20min，过滤，取上清液，即得石蒜碱提取液；(2)纯化①溶剂萃取：将步骤(1)提取的石蒜碱提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得石蒜碱萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1～6用D‑001型阳离子交换树脂，以上样速率1‑3BV/h上样至饱和，用含0.5‑2.5mol/L氨水的40％‑80％乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇‑水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶以柱直径‑柱高湿法装柱，所述柱直径‑柱高的比例为1:10～30，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得石蒜碱。...

【技术特征摘要】
1.一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:5-25，单位比例为g/mL，加入pH调节为1.5-7.5的水，加入石蒜属植物粉末质量1％-5％的酶，在40-80℃酶解0.5-2.5h，离心20min，过滤，取上清液，即得石蒜碱提取液；(2)纯化①溶剂萃取：将步骤(1)提取的石蒜碱提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得石蒜碱萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1～6用D-001型阳离子交换树脂，以上样速率1-3BV/h上样至饱和，用含0.5-2.5mol/L氨水的40％-80％乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶以柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10～30，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得石蒜碱；所述酶为纤维素酶与半纤维素酶的混合酶，纤维素酶与果胶酶的混合酶，半纤维素酶与果胶酶的混合酶，纤维素酶、半纤维素酶及果胶酶的混合酶中的一种。2.根据权利要求1所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:10-25,单位比例为g/mL,加入pH调节为3-6的水，加入石蒜属植物粉末质量2-5％的酶，在50-65℃酶解1-2h，离心20min，过滤，取上清液，即得石蒜碱提取液。3.根据权利要求2所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田春莲，王鹏，覃基信，刘小攀，
申请(专利权)人：吉首大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43