【技术实现步骤摘要】
癌症基因突变及基因扩增检测专利
本专利技术涉及癌症突变高发基因的检测。本专利技术提供了基于多重PCR和高通量测序技术的用于癌症样品的多基因、多位点突变检测的引物组、试剂盒和检测方法。所提供的检测结果例如可用于辅助诊断或指导临床用药方案。
技术介绍
癌症是全球最主要的非传染性疾病之一,也是目前致死率最高的慢性疾病,我国每年因癌症死亡的人数就高达270万,其中以肺癌及胃癌、结直肠癌等消化道肿瘤最为严重,而女性中以乳腺癌为首的妇科肿瘤也是癌症死亡的主要原因。据统计,我国肺癌的发病率为53.57/10万,死亡率高达45.57/10万,均处于所有恶性肿瘤之首,胃癌则以36.21/10万的发病率仅次之,而乳腺癌以42.55/10万的发病率处于女性肿瘤之首。抗肿瘤靶向药物是目前治疗癌症较为有效的一种手段,2013年全球销量前十大药物近一半为抗肿瘤靶向药物,抗肿瘤靶向药物和其他化疗药物疗效和毒副作用都因人而异,这是因为本质上讲,癌症是一种多基因突变造成的疾病。关键基因的突变、截断、错位或融合等导致肿瘤发生。由于无节制增长,肿瘤细胞发生了更多的基因突变,导致肿瘤恶性化程度加深、转移和抵抗治疗,识别个体肿瘤特异性的驱动基因突变就成了有效的选择靶向药物应用的关键。目前NCCN(美国国立综合癌症网络)已对多种靶向药物使用作出规定,建议其在用于肿瘤治疗前进行基因突变检测以确定是否适合用药,例如吉非替尼(gefitinib)、曲妥珠单抗等(Trastuzumab)。随着科技发展,抗肿瘤药物的发展也表现出药物使用从单一到联合的趋势。以前靶向药物以单药加化疗为主,但大多数肿瘤是多基因疾病 ...
【技术保护点】
用于检测样品中一个或多个癌症驱动基因的一个或多个外显子的突变的引物组,包含用于在一个多重PCR中同时扩增选自BRAF、EGFR、KRAS、PIK3CA和/或HER2基因的一个或多个基因的一个或多个外显子的多个区域的检测引物对,其包含选自下列引物对中的至少3对、至少4对、至少5对、至少6对、至少7对、至少8对、至少9对、至少10对、至少11对、至少12对、至少13对、至少14对、或全部15对引物:用于扩增BRAF基因的外显子11的区域的引物对,其序列如SEQ ID NO:1和2所示;用于扩增BRAF基因的外显子15的区域的引物对,其序列如SEQ ID NO:3和4所示;用于扩增EGFR基因的外显子18的区域的引物对,其序列如SEQ ID NO:5和6所示;用于扩增EGFR基因的外显子19的区域的引物对,其序列如SEQ ID NO:7和8所示;用于扩增EGFR基因的外显子20的区域的引物对,其序列如SEQ ID NO:9和10所示;用于扩增EGFR基因的外显子20的区域的引物对,其序列如SEQ ID NO:11和12所示;用于扩增EGFR基因的外显子21的区域的引物对,其序列如SEQ ID ...
【技术特征摘要】
1.用于检测样品中一个或多个癌症驱动基因的多个外显子的突变的引物组,包含用于在一个多重PCR中同时扩增选自BRAF、EGFR、KRAS、PIK3CA和HER2基因的多个基因的一个或多个外显子的多个区域的检测引物对,其包含下列引物对中的全部15对引物:用于扩增BRAF基因的外显子11的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:1和2所示;用于扩增BRAF基因的外显子15的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:3和4所示;用于扩增EGFR基因的外显子18的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:5和6所示;用于扩增EGFR基因的外显子19的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:7和8所示;用于扩增EGFR基因的外显子20的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:9和10所示;用于扩增EGFR基因的外显子20的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:11和12所示;用于扩增EGFR基因的外显子21的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:13和14所示;用于扩增KRAS基因的外显子3的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:15和16所示;用于扩增KRAS基因的外显子2的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:17和18所示;用于扩增PIK3CA基因的外显子9的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:19和20所示;用于扩增PIK3CA基因的外显子20的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:21和22所示;用于扩增HER2基因的外显子19的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:23和24所示;用于扩增HER2基因的外显子20的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:25和26所示;用于扩增HER2基因的外显子21的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:27和28所示;和用于扩增HER2基因的外显子21的区域的引物对,其序列如SEQIDNO:29和30所示。2.权利要求1的引物组,其中所述多重PCR的反应条件为99℃预热2min,每个循环99℃变性15s,60℃退火4min,共23个循环,最后储存于10℃备用。3.权利要求1的引物组,其进一步包含用于检测HER2基因扩增突变的平衡引物对,所述平衡引物对包括选自下列引物对中的多对引物:如SEQIDNO:31和32所示的引物对;如SEQIDNO:33和34所示的引物对;如SEQIDNO:35和36所示的引物对;如SEQIDNO:37和38所示的引物对;如SEQIDNO:39和40所示的引物对;如SEQIDNO:41和42所示的引物对;如SEQIDNO:43和44所示的引物对;如SEQIDNO:45和46所示的引物对;如SEQIDNO:47和48所示的引物对;如SEQIDNO:49和50所示的引物对;如SEQIDNO:51和52所示的引物对;如SEQIDNO:53和54所示的引物对;如SEQIDNO:55和56所示的引物对;如SEQIDNO:57和58所示的引物对;如SEQIDNO:59和60所示的引物对;如SEQIDNO:61和62所示的引物对;如SEQIDNO:63和64所示的引物对;如SEQIDNO:65和66所示的引物对;如SEQIDNO:67和68所示的引物对;如SEQIDNO:69和70所示的引物对;如SEQIDNO:71和72所示的引物对;如SEQIDNO:73和74所示的引物对;如SEQIDNO:75和76所示的引物对;如SEQIDNO:77和78所示的引物对;如SEQIDNO:79和80所示的引物对;如SEQIDNO:81和82所示的引物对;如SEQIDNO:83和84所示的引物对;如SEQIDNO:85和86所示的引物对;如SEQIDNO:87和88所示的引物对;如SEQIDNO:89和90所示的引物对;如SEQIDNO:91和92所示的引物对;如SEQIDNO:93和94所示的引物对;如SEQIDNO:95和96所示的引物对;如SEQIDNO:97和98所示的引物对;如SEQIDNO:99和100所示的引物对;如SEQIDNO:101和102所示的引物对;如SEQIDNO:103和104所示的引物对;如SEQIDNO:105和106所示的引物对;如SEQIDNO:107和108所示的引物对;如SEQIDNO:109和110所示的引物对;如SEQIDNO:111和112所示的引物对;如SEQIDNO:113和114所示的引物对;如SEQIDNO:115和116所示的引物对;如SEQIDNO:117和118所示的引物对;如SEQIDNO:119和120所示的引物对;如SEQIDNO:121和122所示的引物对;如SEQIDNO:123和124所示的引物对;如SEQIDNO:125和126所示的引物对;如SEQID...
【专利技术属性】
技术研发人员:唐川宁,刘志源,楼峰,陈思毅,
申请(专利权)人:北京圣谷同创科技发展有限公司,
类型:发明
国别省市:北京;11
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