【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于体外组合组装快速定向进化DNA的方法,其特征在于,主要包括以下步骤:(1)亚片段突变体的制备:根据亲本基因序列及目标突变区域或位点,将亲本序列分为若干个亚片段,对每个亚片段分别设计并合成正反向两条引物,且在引物的中部位置引入目标突变序列或兼并突变序列,引物3’端的18‑24bp的序列与亚片段模板序列完全匹配,引物5’端有15‑20bp的序列与邻近的需重组亚片段的引物5’端序列完全匹配,作为DNA片段体外组装的“同源臂”;以亲本DNA基因为模板,进行平行PCR反应,分别扩增出具有重叠末端的且引入突变点的亚片段;(2)体外组装亚突变片段:将上述步骤(1)中制备好的所有亚片段组成亚片段突变文库,各片段与制备好的重组载体等摩尔比混合,利用体外组装技术,组合获得完整的基因序列与载体的重组子文库。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:康振,陈坚,金鹏,堵国成,张俊丽,
申请(专利权)人:江南大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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