一种PGJ2纳米粒的制备及应用制造技术

本发明专利技术提供一种PGJ2纳米粒的制备方法，通过将药物和PLGA溶于水不相溶的丙酮中，将其加入到加有稳定剂的水相中均质化，在低压条件下蒸发有机相，得到药物的水相散体。本发明专利技术应用可吸收纳米高分子载药载体PLGA载体，构建脂质信号分子15d-PGJ2和△12-PGJ2的纳米粒，一方面避免传统局部应用抗生素易产生耐药性的缺点，同时结合15d-PGJ2和△12-PGJ2两者分别具有抗炎和促成骨作用的缺点，探讨其局部引用对人造骨缺损的大鼠模型修复过程中组织炎症和修复的影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于口腔材料制备领域，涉及一种促进缺损骨组织再生修复和抑制缺损区炎症发生发的材料制备，尤其涉及一种PGJ2纳米粒的制备，及其应用。
技术介绍
牙周病是常见的慢性感染性和组织破坏性疾病。由于炎性环境的持续存在，牙周结缔组织破坏形成牙周袋，牙周骨组织破坏导致牙槽骨吸收、牙齿脱落，严重影响患者的生活质量。牙周治疗的最终目标就是重建因牙周病而丧失的支持组织，实现牙周的再生。牙周再生是一个复杂的生物学现象，要实现牙周组织重新向冠方恢复龈牙结合，不但要形成新的结缔组织附着，而且还要再生新的牙槽骨。牙周病的传统机械性疗法主要在于消除病因、控制感染，对于组织再生的作用甚微。骨移植、引导组织再生术、生长因子、局部应用釉基质蛋白等诱导牙周组织再生的疗法，可使牙周膜、牙骨质和牙槽骨获得一定程度的再生，但牙槽骨的再生能力有限。近年来出现的组织工程技术在牙周再生治疗中有一定的优势，但仍存在诸多难以解决的困难，其中之一就是牙周炎特殊炎性环境的存在，使得移植骨植入部位时刻受到致病微生物的侵袭，植入骨面临被炎性吸收的危险。因此，要彻底解决牙周病中牙槽骨炎性吸收及其修复和再生问题，必须控制牙周炎症与促进牙槽骨修复并进。近年来国内外研究发现前列腺素类脂质分子具有潜在的抗炎效应。目前研究较多的是15d-类前列腺素J2(15-deoxy-△12,14-prostaglandinJ2，15d-PGJ2)和Delta12-前列腺素J2(△12-prostaglandinJ2，△12-PGJ2)。前列腺素J2(ProstaglandinJ2，PGJ2)是花生四烯酸代谢的产物，经过2次自发性脱水转化为15d-PGJ2；在血清白蛋白存在时，PGJ2可转化为△12-PGJ2。15d-PGJ2是过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(Peroxisomeproliferator-activatedreceptors，PPAR-γ)的内源性配体，可通过PPAR-γ依赖或PPAR-γ独立方式抑制多种前炎性因子基因的转录活化。迄今已有大量体内体外实验证实15d-PGJ2有潜在的抗炎特性。此外，15d-PGJ2还可能参与成骨细胞和破骨细胞的分化过程。△12-PGJ2与15d-PGJ2的结构极为相似，但不同的是前者的主要作用在于调控骨的形成和代谢。研究发现，△12-PGJ2在成骨细胞培养体系中可诱导羟磷灰石沉积、刺激碱性磷酸酶活性、促进胶原合成和增加骨结节的形成；△12-PGJ2具有上调前成骨细胞MC3T3-E1细胞中骨涎蛋白和骨钙素表达的作用；在大鼠动物实验中发现局部应用△12-PGJ2可以剂量依赖的方式促进人造骨缺损区内及种植体周围新骨的形成，并伴随一些生长因子，如，骨形成蛋白-2/6(Bonemorphogeneticprotein-2/6，BMP-2/6)、血小板源性生长因子-A/B(platelet-derivedgrowthfactor-A/B，PDGF-A/B)的表达增高。但是，15d-PGJ2和△12-PGJ2属于脂质分子，生物学性质不稳定、半衰期短，影响其在临床中的广泛应用。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种PGJ2纳米粒的制备方法——乳化溶剂蒸发法，即将药物和PLGA溶于水不相溶的丙酮中，将其加入到加有稳定剂的水相中均质化，在低压条件下蒸发有机相，得到药物的水相散体。通过以下步骤实现：(1)称取聚乳酸-羟基乙酸(Poly(lactic-co-glycolicacid)，PLGA)(50:50，m.w.50000g/mol)，100mg；司班60，40mg；硬脂酸甘油酯，200mg；于30mL丙酮中充分溶解，形成油相，取1mL备用；(2)称取吐温80，60mg；充分溶于30mL双蒸水，构成水相，取1mL备用；(3)1mL油相混合液中加入Delta12-前列腺素J2(△12-prostaglandinJ2，△12-PGJ2)，100μg后混匀，缓慢加入1mL水相中，边加边搅拌，持续搅拌10分；(4)旋转蒸发最终得到的混合液，蒸发其中的丙酮，最终15d-PGJ2/△12-PGJ2的药物浓度为100mg/L。最终液体体积1mL，其中15d-PGJ2/△12-PGJ2的总量为100ug，故最终15d-PGJ2/△12-PGJ2的药物浓度为100mg/L。空白纳米粒按同样方法制备。制备完成的纳米粒进行粒径分析、透射电镜观察、载药率及体外释放试验综合对其理化性质进行评价。本专利技术的另一个目的是提供上述制备的PGJ2纳米粒在作为药物载体中的应用。15d-PGJ2和△12-PGJ2属于脂质分子，除生物学性质不稳定、半衰期短等缺点外，二者的水溶性极低，应用于动物体内后只有极少部分可以进入靶细胞发挥效应。其缓释功能可以延长药物在体内的循环时间，改善药物的药动学性质。一方面，以PLGA为载体延长了药物的半衰期和体内作用时间；另一方面，PLGA作为15d-PGJ2和△12-PGJ2的载体，可以提高药物的摄取率，提高药物的作用效率。牙周组织炎症反应中涉及的主要过程包括：宿主免疫炎症反应，基质金属蛋白酶产生，花生四烯酸代谢产物，牙槽骨吸收。常用的药物主要有：IL-1和TNF受体拮抗剂，能抑制牙槽骨的吸收和牙周附着丧失；小剂量四环素全身应用可以抑制基质金属蛋白酶的活性；非甾体抗炎药的全身应用可以通过多种途径，降低前列腺素的代谢和合成，减少骨吸收。与上述药物相比，15d-PGJ2作为体内的内源性脂质分子用于调节牙周病患者的炎症反应具有一定的优势：15d-PGJ2同时具备上述几种药物的生理功能；与COX-2酶抑制剂类药物(如：阿司匹林)的抗炎作用相比，15d-PGJ2不会完全抑制COX-2的活性，保留了COX-2酶在炎症后期的消炎作用。研究发现，△12-PGJ2可诱导羟磷灰石沉积、刺激碱性磷酸酶活性、促进胶原合成和增加骨结节的形成，上调一些生长因子，如，BMP-2/6、PDGF-A/B的表达，促进人造骨缺损区内及种植体周围新骨的形成。PLGA聚合物是一种可降解的功能高分子有机聚合物。在体内，PLGA的降解通过是通过酯键的断裂形成单体酸、乳酸和羟基乙酸，进而在体内消除。PLGA的最终的水解产物是二氧化碳和水，乳酸也是体内正常糖代谢产物，故有良好的生物相容性、无毒、无刺激、无免疫原性和药物缓释等特性。纳米高分子载体的上述特性使得其极其适用于牙周局部用药和牙周组织在声中各种生长因子的载体，然而目前国内关于用于牙周局部的纳米药物研究仍是空白。在美国牙周病临床治疗上多采用以可吸收纳米微球为载体的米诺环素控释型局部用药，商品名为“Arestin”,但上述药物均为广谱抗生素，长期使用易造成耐药及菌群失调等。本专利技术应用可吸收纳米高分子载药载体PLGA载体，构建脂质信号分子15d-PGJ2和△12-PGJ2的纳米粒，一方面避免传统局部应用抗生素易产生耐药性的缺点，同时结合15d-PGJ2和△12-PGJ2两者分别具有抗炎和促成骨作用的缺点，探讨其局部引用对人造骨缺损的大鼠模型修复过程中组织炎症和修复的影响。附图说明图1-1是透射电镜下△12-前列谢素J2纳米粒的形态。呈现球形，均匀分布。图1-2是△12-前列腺素J2纳米悬浮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PGJ2纳米粒的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)称取50:50，m.w.50000g/mol聚乳酸‑羟基乙酸、司班60、硬脂酸甘油酯，于30mL丙酮中充分溶解，形成油相，取1mL备用；(2)取吐温80，充分溶于双蒸水，构成水相，取1mL备用；(3)在1mL油相溶液中加入100μg△12‑前列腺素J2后混匀，缓慢加入1mL水相中，边加边搅拌，持续搅拌10分；(4)旋转蒸发步骤(3)得到的混合液，蒸发其中的丙酮，最终15d‑前列腺素J2/△12‑前列腺素J2的药物浓度为100mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种PGJ2纳米粒的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)称取50:50，m.w.50000g/mol聚乳酸-羟基乙酸、司班60、硬脂酸甘油酯，于30mL丙酮中充分溶解，形成油相，取1mL备用；(2)取吐温80，充分溶于双蒸水，构成水相，取1mL备用；(3)在1mL油相溶液中加入100μg△12-前列腺素J2后混匀，缓慢加入1mL水相中，边加边搅拌，持续搅拌10分；(4)旋转蒸发步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴燕岷，魏芬，陈莉丽，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33