【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物工程与发酵领域,具体涉及一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的 鹰嘴豆乳的制备方法。
技术介绍
纳豆由大豆经纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)发酵而成,具有多重生理功效: ①纳豆对心血管系统的作用:纳豆中一种标志性生理活性物质纳豆激酶 (Nattokinase,NK)是能够溶解血栓的蛋白质,由275个氨基酸残基组成,分子量27KD左右, 无毒、无副作用,是一种丝氨酸蛋白酶,其溶栓效果甚至超过溶栓制剂尿激酶。纳豆激酶除 具有直接溶栓作用外,还具有促进静脉内皮细胞产生纤维蛋白溶酶原激活剂的能力,从而 间接表现其溶栓活性。纳豆中亚油酸占全脂质的50%,亚油酸能够降低血浆中胆固醇含量, 有预防动脉硬化、心脏病和高血压的功效,具有血栓溶解作用; ②纳豆对消化系统的作用:大豆蛋白质经纳豆酶的作用转化成可溶性多肽和氨 基酸,有利于人体吸收。lg纳豆中含有10亿个以上纳豆菌,纳豆菌繁殖快,能消耗肠道中 的氧,可以抑制引起肠内异常发酵的痢疾杆菌等腐败菌,促进乳酸菌繁殖,调节肠内细菌平 衡,预防痢疾、肠炎和便秘等。大豆经过纳豆菌发酵蓄积了大量蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、酯 酶、纤维素酶和脲酶等酶群,这些生物酶在消化系统中能够有效调理促进消化吸收。纳豆芽 孢杆菌在通过分解利用大豆蛋白进行繁殖的过程中,可以产生大量酵素、维生素、多聚谷氨 酸和多聚果糖等粘性物质,其被覆在胃肠粘膜表面起到保护作用,饮酒时可缓解酒醉。纳豆 菌还能杀死肠道出血性大肠杆菌; ③纳豆对免疫系统的作用:通过接种纳豆菌的动物实验发现,纳豆可以提高机体 ...
【技术保护点】
一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1)、将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263分别进行亚硝基胍诱变;然后混合二者诱变后代,进行细胞融合传代培养,高通量筛选得到高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌,命名为纳豆芽孢杆菌BN‑NKPQQ‑RWX‑207;2)、将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变,从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌,命名为干酪乳杆菌LcS‑Met‑;3)将纳豆芽孢杆菌BN‑NKPQQ‑RWX‑207和干酪乳杆菌LcS‑Met‑共发酵鹰嘴豆汁,得到富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳。
【技术特征摘要】
1. 一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法,其特征在于,包括以下步 骤: 1) 、将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263分别进 行亚硝基胍诱变;然后混合二者诱变后代,进行细胞融合传代培养,高通量筛选得到高产纳 豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌,命名为纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-207 ; 2) 、将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变,从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌, 命名为干酪乳杆菌LcS-Met_; 3)将纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-207和干酪乳杆菌LcS-Met_*发酵鹰嘴豆汁,得到 富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳。2. 根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法,其特征 在于,步骤1)中,所述的高通量筛选具体包括:①制备2个平板豆芽汁鹰嘴豆汁固体培养 基,其中一个将小鼠抗PQQIgG单抗PQQ-mAb配入,形成平板A,另一个将琼脂糖-纤维蛋白 配入,形成平板B;②将纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263的诱变融合后代涂布其 中一个平板后,再用纤维素膜影印至另一个平板,使平板A和平板B互为影印平板;③平板 A中,高产吡咯喹啉醌的诱变融合后代菌落周围形成肉眼可见沉淀圈,根据沉淀圈直径大小 可肉眼判断产吡咯喹啉醌量大小;④平板B中,高产纳豆激酶的诱变融合后代菌落周围形 成透明圈,根据透明圈直径大小可肉眼判断产纳豆激酶活力高低;⑤平板A与平板B中,高 产吡咯喹啉醌菌落与高产纳豆激酶菌落处于同一位置者,即为高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌 的纳豆芽孢杆菌。3. 根据权利要求2所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法,其特征 在于,步骤1)中,所述的平板豆芽汁鹰嘴豆汁固体培养基以IL计,由以下量的组分组成: 鹰嘴豆汁 100?丨50mL; 蔗糖 4.0?6.0g; 琼脂 1.5?2.0g; 豆芽汁 余量。4. 根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法,其特征 在于,步骤2)中,所述的从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌,具体包括:①制备 2个平板MRS固体培养基,其中一个将甲硫氨酸配入,为平板C,另一个为单纯MRS固体培养 基平板,为平板D;②将诱变后的干酪乳杆菌涂布其中一个平板后,再用纤维素膜影印至另 一个平板,使平板C和平板D互为影印平板;③在平板C与平板D的同一位置,平板C出现 菌落而平板D未出现菌落,或平板C上的菌落显著大于平板D上的菌落,则该菌落为甲硫氨 酸营养缺陷型干酪乳杆菌。5. 根据权利要求4所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法,其特征 在于,步骤2)中,所述的平板MRS固体培养基以IL计,由以下量的组分组成: 蛋白胨 lO.Og; 牛肉膏 lO.Og; 酵母膏 5.0g; 丰宁檬酸氢二铵 2.Og; 葡萄糖 20.0g; 乙酸钠 5...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐娟,李青青,张哲滔,吴渊,
申请(专利权)人:杭州元佩特生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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