抑制KRAS基因表达的RNAi医药组合物制造技术

本发明专利技术提供一种抑制KRAS基因表达的组合物等，其含有脂质粒子，所述脂质粒子含有作为药物的双链核酸和式(I)表示的阳离子性脂质，所述双链核酸中，反义链具有与序列号1～3中任一的KRAS基因的mRNA的连续至少19个碱基的序列互补的碱基序列；式(I)中，R1及R2相同或不同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，L1及L2相同或不同，为-CO-O-或-O-CO-，a及b相同或不同，为1～3，R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制KRAS基因表达的组合物、包含该组合物的医药品等。
技术介绍
KRAS属于RAS家族(分子量约21kDa的具有GTP水解活性的蛋白质)。KRAS存在于细胞膜的内侧，发挥将因表皮生长因子(Epidermal Growth Factor；EGF)等细胞外的生长因子与其受体的结合而产生的信号传递到细胞内的作用。KRAS存在激活突变，人的癌中的约20％确认到激活突变。尤其是，在胰脏癌、大肠癌及肺癌中，高频率地确认到KRAS的激活突变(参见癌症研究(Cancer Res)，2012年，第72卷，p.2457)。报道称，在大肠癌中，作为抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor；EGFR)抗体药品的西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼单抗(panitumumab)对具有KRAS的激活突变的患者无效(参见“新英格兰医学杂志(The New England Journal of Medicine，N Engl J Med)”，2009年，第360卷，p.1408，“临床肿瘤学杂志(Journal of Clinical Oncology，J Clin Oncol)”，2008年，第26卷，p.374，“临床肿瘤学杂志(Journal of Clinical Oncology，J Clin Oncol)”，2008年，第26卷，p.1626)。KRAS被认为是抗癌剂的良好靶标，多年来一直在尝试基于低分子量药物研发来研发制造KRAS抑制剂(参见“癌症生物学与治疗(Cancer Biology & Therapy)”，2002年，第1卷，p.599)。然而，目前尚无以KRAS为靶标的对癌等的有效治疗药。作为抑制靶基因的表达的方法，例如已知利用了RNA干扰(RNA interference，以下称为RNAi)的方法等，具体而言，报道了通过将具有与作为靶标的基因相同的序列的双链RNA导入到线虫中，从而可特异性地抑制该靶基因表达的现象(参见“自然(Nature)”，1998年，第391卷，第6669号，p.806-811)。另外发现，在果蝇中，通过导入21～23个碱基的长度的双链RNA来代替长的双链RNA，也可抑制靶基因的表达，这被命名为短干扰RNA(short interfering RNA，siRNA)(参见国际公开第01/75164号小册子)。关于RNAi，在体内(in vivo)试验中也得到了大量验证，报道了使用了50个碱基对以下的siRNA在胚胎动物中的效果(参见美国专利申请公开第2002-132788号说明书)及在成年小鼠中的效果(参见国际公开第03/10180号小册子)。另外，当将siRNA静脉内给予至小鼠胚胎时，在肾脏、脾脏、肺、胰脏及肝脏各器官中确认到了对特定的基因表达的抑制效果(参见“自然·遗传学(Nature Genetics)”，2002年，第32卷，第1号，p.107-108)。此外，还报道了在脑细胞中直接给予siRNA也可抑制特定的基因的表达(参见“自然·生物技术(Nature Biotechnology)”，2002年，第20卷，第10号，p.1006-1010)。KRAS siRNA例如被记载于专利文献1、专利文献2等中。含有siRNA类的医药品例如被记载于专利文献3、专利文献4、专利文献5等中。专利文献3中公开了含有siRNA类、和例如1,2-二亚油基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DLinDMA)等的医药品。出于开发更柔软的阳离子性脂质、从而提高脂质体等的膜流动性的目的使用了DLinDMA等，其特征在于，使结构上类似的阳离子性脂质N-(2,3-二-(9-(Z)-十八碳烯酰基氧基))-丙烷-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTAP)及N-[1-(2,3-二油烯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)的高级烷基成为至少包含2处不饱和位点的高级烷基。另外，专利文献4中公开了含有siRNA类、和例如2,2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1,3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)等的医药。另外，专利文献5中公开了例如反式-3,4-双(((Z)-十八碳-9-烯酰基氧基)甲基)吡咯烷(化合物I-3)等。专利文献1：国际公开第2008/109516号小册子专利文献2：国际公开第2010/115206号小册子专利文献3：国际公开第2005/121348号小册子专利文献4：国际公开第2009/086558号小册子专利文献5：国际公开第2011/136368号小册子
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的目的在于提供一种抑制KRAS基因表达的组合物、包含该组合物的医药品等。解决课题的手段本专利技术涉及以下的(1)～(23)。(1)一种组合物，其含有下述脂质粒子，所述脂质粒子含有：作为药物的双链核酸，其具有有义链及反义链，该有义链和该反义链具有至少25个碱基对，该反义链具有与序列号1～3中任一的KRAS基因的mRNA的连续至少19个碱基的序列互补的碱基序列，具有最长为35个核苷酸的长度；和式(I)表示的阳离子性脂质，式(I)中，R1及R2相同或不同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，L1及L2相同或不同，为-CO-O-或-O-CO-，a及b相同或不同，为1～3，R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。(2)如上述(1)所述的组合物，其中，脂质粒子是进一步含有式(II)表示的阳离子性脂质的脂质粒子，式(II)：式(II)中，R4及R5相同或不同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，R6为氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。(3)如上述(2)所述的组合物，其中，R4及R5均为十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其含有下述脂质粒子，所述脂质粒子含有：作为药物的双链核酸，所述双链核酸具有有义链及反义链，该有义链和该反义链具有至少25个碱基对，该反义链具有与序列号1～3中任一的KRAS基因的mRNA的连续至少19个碱基的序列互补的碱基序列，具有最长为35个核苷酸的长度；和式(I)表示的阳离子性脂质，式(I)中，R1及R2相同或不同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，L1及L2相同或不同，为‑CO‑O‑或‑O‑CO‑，a及b相同或不同，为1～3，R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.16 US 61/671,9631.一种组合物，其含有下述脂质粒子，所述脂质粒子含有：
作为药物的双链核酸，所述双链核酸具有有义链及反义链，该
有义链和该反义链具有至少25个碱基对，该反义链具有与序列号
1～3中任一的KRAS基因的mRNA的连续至少19个碱基的序列互
补的碱基序列，具有最长为35个核苷酸的长度；和
式(I)表示的阳离子性脂质，
式(I)中，R1及R2相同或不同，为碳原子数为12～24的直链状
或支链状的烷基、链烯基或炔基，
L1及L2相同或不同，为-CO-O-或-O-CO-，
a及b相同或不同，为1～3，
R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链
烯基。
2.如权利要求1所述的组合物，其中，脂质粒子是进一步含有
式(II)表示的阳离子性脂质的脂质粒子，
式(II)中，R4及R5相同或不同，为碳原子数为12～24的直链状
或支链状的烷基、链烯基或炔基，
R6为氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链
烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不同的1～3
个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、

\t单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉
基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
3.如权利要求2所述的组合物，其中，R4及R5均为十二烷基、
十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-
三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基
十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、
3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、
二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-
烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、
(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、
(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基
十二碳-2,6,10-三烯基或3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基。
4.如权利要求2所述的组合物，其中，R4及R5均为十四烷基、
十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯
基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-
二十碳-11,14-二烯基。
5.如权利要求3或4所述的组合物，其中，R6为氢原子、甲基、
吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不同的1～3个的氨
基、单烷基氨基、二烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷
基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取
代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
6.如权利要求1～5中任一项所述的组合物，其中，R3为氢原
子或甲基。
7.如权利要求1～6中任一项所述的组合物，其中，L1及L2为
-O-CO-，R1及R2为相同的十二...

【专利技术属性】
技术研发人员：直井智幸，洼山刚之，榎园淳一，石井俊彦，德永昌浩，畑中剑太朗，
申请(专利权)人：协和发酵麒麟株式会社，戴瑟纳制药公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP