一种高得率的云芝多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高得率的云芝多糖的制备方法，通过合适的酶解、醇沉技术、利用聚合物/无机盐双水相体系、大孔吸附树脂除杂、超滤膜进行过滤等步骤来提高云芝多糖的提取率，将经过本发明专利技术提取的云芝多糖含量与用酶解法得到的云芝含量进行对比，云芝多糖含量平均增加21％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食用菌有效成份提取分离
，具体而言，涉及高得率的云芝多糖的制备方法。
技术介绍
云芝中主要活性成分为云芝多糖，云芝多糖具有免疫调节功能，是良好的免疫增强剂，具有增强免疫细胞功能和识别能力，提高IgM的量等作用；云芝多糖同时具有保肝护肝作用，可显著降低血清转氨酶，对肝组织病变和肝坏死有明显的修复作用。云芝多糖功效显著，药用价值高，可做各类药品、保健品、功能性食品的原料。因此具有极高的价值。双水相萃取技术始于20世纪60年代，由于双水相萃取条件温和，容易放大，可连续操作，因此该技术已成功地应用于蛋白质、核酸和病毒等生物产品的分离和纯化，也有抗生素，中药有效成份等小分子分离方面的尝试，利用聚合物/无机盐双水相体系来提取云芝多糖还没见报道。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种提取云芝多糖的方法，通过合适的酶解、醇沉技术、利用聚合物/无机盐双水相体系、大孔吸附树脂除杂、超滤膜进行过滤等步骤来提高云芝多糖的提取率，为此本专利技术采用的一个技术方案是：一种高得率的云芝多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)将云芝子实体晾干至水分含量为15～20％，然后进行粉碎处理，得到200～300目的云芝粉，与蒸馏水按1：30-40的重量比混合成混合液后，备用；(2)酶解处理：取占混合液重量0.1-0.2％的纤维素酶加入混合液中，调解pH值至4-6，在搅拌的过程中于40-55℃酶解40-80分钟；(3)将云芝粉进行微波辅助热水提取，所述的微波功率为500-700W，提取时间为3-5分钟；然后继续进行超声波辅助热水提取，其超声温度20-60℃，功率为600-800W，超声时间为20-60min；然后将所得的云芝水提液冷却至室温，离心分离得上清液和云芝残渣；(4)醇沉多糖：将步骤(3)所得上清液减压浓缩，加入2-4倍体积的无水乙醇进行醇沉后，离心，冷冻高燥后得云芝粗多糖；(5)双水相萃取：将云芝粗多糖溶于水，得粗多糖溶液，加入聚合物/无机盐双水相体系中，在温度30-50℃、pH4-7的条件下震荡30-50分钟，震荡速度为100-200r·min-1，然后静置20-40分钟分层；所述的聚合物为聚乙二醇，无机盐为磷酸钾；所述的聚乙二醇浓度为10-20％，磷酸钾的浓度15-25％；(6)取出富含无机盐的下层，采用大孔吸附树脂以2-4BV/h的流速对所得云芝粗多糖以5-10倍柱体积水进行洗脱除杂，洗脱流速为1-4BV/h，之后，调节pH值范围为6.5-7.5，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱脱蛋白处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:2～5；(7)用截留量为6000的超滤膜除盐，截留分子量范围为100000-800000D，工作压力为0.2-0.7Mpa，温度为30-50℃，转子的转速为300-800r/min，收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到云芝多糖。本专利技术的有益效果是：本专利技术的云芝粗多糖提取率较高，并且较纯净。具体实施方式下面对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例1(1)将云芝子实体晾干至水分含量为15％，然后进行粉碎处理，得到300目的云芝粉，与蒸馏水按1：30的重量比混合成混合液后，备用；(2)酶解处理：取占混合液重量0.1％的纤维素酶加入混合液中，调解pH值至4，在搅拌的过程中于55℃酶解40分钟；(3)将云芝粉进行微波辅助热水提取，所述的微波功率为500W，提取时间为5分钟；然后继续进行超声波辅助热水提取，其超声温度20℃，功率为800W，超声时间为20min；然后将所得的云芝水提液冷却至室温，离心分离得上清液和云芝残渣；(4)醇沉多糖：将步骤(3)所得上清液减压浓缩，加入2倍体积的无水乙醇进行醇沉后，离心，冷冻高燥后得云芝粗多糖；(5)双水相萃取：将云芝粗多糖溶于水，得粗多糖溶液，加入聚合物/无机盐双水相体系中，在温度30℃、pH7的条件下震荡50分钟，震荡速度为100r·min-1，然后静置20分钟分层；所述的聚合物为聚乙二醇，无机盐为磷酸钾；所述的聚乙二醇浓度为10％，磷酸钾的浓度25％；(6)取出富含无机盐的下层，采用大孔吸附树脂以2BV/h的流速对所得云芝粗多糖以5倍柱体积水进行洗脱除杂，洗脱流速为4BV/h，之后，调节pH值范围为6.5，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱脱蛋白处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:2；(7)用截留量为6000的超滤膜除盐，截留分子量范围为100000-800000D，工作压力为0.2Mpa，温度为50℃，转子的转速为800r/min，收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到云芝多糖。实施例2(1)将云芝子实体晾干至水分含量为18％，然后进行粉碎处理，得到200目的云芝粉，与蒸馏水按1：35的重量比混合成混合液后，备用；(2)酶解处理：取占混合液重量0.15％的纤维素酶加入混合液中，调解pH值至5，在搅拌的过程中于45℃酶解60分钟；(3)将云芝粉进行微波辅助热水提取，所述的微波功率为600W，提取时间为4分钟；然后继续进行超声波辅助热水提取，其超声温度40℃，功率为700W，超声时间为40min；然后将所得的云芝水提液冷却至室温，离心分离得上清液和云芝残渣；(4)醇沉多糖：将步骤(3)所得上清液减压浓缩，加入3倍体积的无水乙醇进行醇沉后，离心，冷冻高燥后得云芝粗多糖；(5)双水相萃取：将云芝粗多糖溶于水，得粗多糖溶液，加入聚合物/无机盐双水相体系中，在温度40℃、pH5的条件下震荡40分钟，震荡速度为150r·min-1，然后静置30分钟分层；所述的聚合物为聚乙二醇，无机盐为磷酸钾；所述的聚乙二醇浓度为15％，磷酸钾的浓度20％；(6)取出富含无机盐的下层，采用大孔吸附树脂以3BV/h的流速对所得云芝粗多糖以7倍柱体积水进行洗脱除杂，洗脱流速为3BV/h，之后，调节pH值范围为7，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱脱蛋白处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:3；(7)用截留量为6000的超滤膜除盐，截留分子量范围为100000-800000D，工作压力为0.5Mpa，温度为40℃，转子的转速为500r/min，收集截留浓缩液，并用蒸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高得率的云芝多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将云芝子实体晾干至水分含量为15～20％，然后进行粉碎处理，得到200～300目的云芝粉，与蒸馏水按1：30‑40的重量比混合成混合液后，备用；(2)酶解处理：取占混合液重量0.1‑0.2％的纤维素酶加入混合液中，调解pH值至4‑6，在搅拌的过程中于40‑55℃酶解40‑80分钟；(3)将云芝粉进行微波辅助热水提取，所述的微波功率为500‑700W，提取时间为3‑5分钟；然后继续进行超声波辅助热水提取，其超声温度20‑60℃，功率为600‑800W，超声时间为20‑60min；然后将所得的云芝水提液冷却至室温，离心分离得上清液和云芝残渣；(4)醇沉多糖：将步骤(3)所得上清液减压浓缩，加入2‑4倍体积的无水乙醇进行醇沉后，离心，冷冻高燥后得云芝粗多糖；(5)双水相萃取：将云芝粗多糖溶于水，得粗多糖溶液，加入聚合物/无机盐双水相体系中，在温度30‑50℃、pH 4‑7的条件下震荡30‑50分钟，震荡速度为100‑200r·min‑1，然后静置20‑40分钟分层；所述的聚合物为聚乙二醇，无机盐为磷酸钾；所述的聚乙二醇浓度为10‑20％，磷酸钾的浓度15‑25％；(6)取出富含无机盐的下层，采用大孔吸附树脂以2‑4BV/h的流速对所得云芝粗多糖以5‑10倍柱体积水进行洗脱除杂，洗脱流速为1‑4BV/h，之后，调节pH值范围为6.5‑7.5，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱脱蛋白处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:2～5；(7)用截留量为6000的超滤膜除盐，截留分子量范围为100000‑800000D，工作压力为0.2‑0.7Mpa，温度为30‑50℃，转子的转速为300‑800r/min，收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到云芝多糖。...

【技术特征摘要】
1.一种高得率的云芝多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将云芝子实体晾干至水分含量为15～20％，然后进行粉碎处理，得到
200～300目的云芝粉，与蒸馏水按1：30-40的重量比混合成混合液后，备用；
(2)酶解处理：取占混合液重量0.1-0.2％的纤维素酶加入混合液中，调解
pH值至4-6，在搅拌的过程中于40-55℃酶解40-80分钟；
(3)将云芝粉进行微波辅助热水提取，所述的微波功率为500-700W，提
取时间为3-5分钟；然后继续进行超声波辅助热水提取，其超声温度20-60℃，
功率为600-800W，超声时间为20-60min；然后将所得的云芝水提液冷却至室温，
离心分离得上清液和云芝残渣；
(4)醇沉多糖：将步骤(3)所得上清液减压浓缩，加入2-4倍体积的无水
乙醇进行醇沉后，离心，冷冻高燥后得云芝粗多糖；
(5)双水相萃取：将云芝粗多糖溶于水，得粗多糖溶液，加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗宇，
申请(专利权)人：罗宇，
类型：发明
国别省市：广西;45