从雨生红球藻中提取虾青素的方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及从雨生红球藻中提取虾青素的方法。将种子原液置于带有引流装置玻璃仪器中培养，10～15d进行后期雨生红球藻的扩大培养和虾青素的积累培养。将种子培养指数生长期的培养物,经离心后细胞团接种于BBM基本培养基，得初培养物。后期虾青素积累培养，是通过本发明专利技术的通气式塑料袋式简易装置扩大培养。积累阶段采用胁迫培养方法获得小试雨生红球藻培养物，喷雾干燥得藻粉。采用超声细胞破壁辅助混合溶剂提取法从雨生红球藻中提取虾青素的制备技术，将雨生红球藻粉加入有机溶剂超声破壁处理，水浴回流提取，抽滤，合并滤液，浓缩即得。本发明专利技术相比传统的直接提取法，节约了提取时间，提高了虾青素出率。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于医药
，涉及。将种子原液置于带有引流装置玻璃仪器中培养，10～15d进行后期雨生红球藻的扩大培养和虾青素的积累培养。将种子培养指数生长期的培养物,经离心后细胞团接种于BBM基本培养基，得初培养物。后期虾青素积累培养，是通过本专利技术的通气式塑料袋式简易装置扩大培养。积累阶段采用胁迫培养方法获得小试雨生红球藻培养物，喷雾干燥得藻粉。采用超声细胞破壁辅助混合溶剂提取法从雨生红球藻中提取虾青素的制备技术，将雨生红球藻粉加入有机溶剂超声破壁处理，水浴回流提取，抽滤，合并滤液，浓缩即得。本专利技术相比传统的直接提取法，节约了提取时间，提高了虾青素出率。【专利说明】
本专利技术属于医药
，涉及。
技术介绍
虾青素是类胡萝卜素的含氧衍生物，具有很强的抗氧化活性，具有抑制肿瘤发生、 增强免疫功能等多方面的生理作用。市场庞大，目前在食品、医药、化妆品及养殖行业得到 了广泛的应用。 雨生红球藻（Haematococcuspluvialis)是一种单细胞微藻，隶属绿藻门、团藻 目、红球藻科、红球藻属，是公认自然界中生产天然虾青素的最好生物来源，在极佳的培养 条件下，雨生红球藻的虾青素含量可达3%以上，远高于红酵母和其他微生物，因此利用雨 生红球藻提取虾青素，具有广阔的发展前景，极具大规模工业化生产潜力，已成为各国研 究的热点。雨生红球藻适宜生长的温度范围较窄，对环境变化非常敏感，在营养生长期内 抵抗细菌和原生动物污染的能力很差，而在极端环境下则又失去繁殖能力，因而在开放池 中培养雨生红球藻，会受到较大的限制。尚未实现规模养殖和天然虾青素的工业化生产， 在应用开发上还有许多关键问题和技术需要突破。本专利技术采用封闭式塑料袋式简易装置继 续扩大培养。积累阶段采用胁迫培养法，大量积累虾青素。能普及到农户，实现雨生红球藻 的养殖普遍化和规模化。 由于雨生红球藻细胞壁较厚，加大了提取虾青素的难度，也降低了藻粉直接作饵 料的利用率。所以在使用前必须将其细胞壁进行破碎（破壁）。目前使用的破壁方法有匀 浆法、冻融温差法、直接研磨法等，匀浆过程中产生高温，冻融温差法效果不是很好，直接 研磨很容易使虾青素氧化而破坏其生理活性。超声波破壁是被研究较多的破壁方法，近年 来广泛使用。本专利技术采用超声辅助混合溶剂提取法，利用超声波细胞破壁，混合溶剂提取， 缩短提取时间，提高收率。同时利用响应面法优化，得到一种提取虾青素提取的最佳工艺。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种。该方法 将超声波细胞破壁技术成功应用于雨生红球藻提取虾青素的工艺中，开发出提高雨生红球 藻中虾青素收率的制备技术。 本专利技术采用封闭式塑料袋式简易装置继续扩大培养。积累阶段采用胁迫培养法， 大量积累虾青素。普及到农户，实现雨生红球藻的养殖普遍化和规模化。 本专利技术通过以下步骤实现： 种子培养：将购买的雨生红球藻种用BBM培养基扩大培养至指数生长期：由40W 日光灯提供侧光，黑暗和光照周期：12:12h照明，光强1000?15001x，温度控制25±1°C。 取样15mL?45ml购买的雨生红球藻原液，置于5L的带有引流装置玻璃仪器中培养，10? 15d进行后期雨生红球藻的扩大培养和积累培养。 所述的BBM培养基为：NaNo30. 25g/L、K2HP040. 075g/L、MgS04. 7H200. 075g/ L、CaC12. 2H200. 025g/L、K2H2P040. 075g/L、NaclO. 025g/L、Bllmg/L、biotinO. 25ug/ 1、B120. 15ug/L.PIVlml/L(FeC13 · 6H2097mg/L、MnC12 · 4H2041mg/L、ZnC125mg/L、 CoC12 · 6H202mg/L、Na2Mo04 · 2H204mg/L、Na2EDTA750mg/L、蒸馏水 1L),pH调至 7 ?8。 将种子培养指数生长期的培养物，经离心后接种于BBM基本培养基中培养10? 15d。培养基置于通气式简易装置继续培养。积累阶段采用胁迫培养方法，用BBM做基本 培养基，设置缺氮胁迫培养基（K2HPO4O. 075g/L、MgSO4. 7Η20(λ075g/L、CaCl2. 2Η20(λ025g/ L、K2H2PO4O. 075g/L、NaclO. 025g/L、Bllmg/L、biotinO. 25ug/l、Β120. 15ug/L.PIVlml/ L(FeCl3 *6H2097mg/L,MnCl2 *4H2041mg/L,ZnCl25mg/L,CoCl2 *6H202mg/L,Na2Mo04 *2H204mg/ L、Na2EDTA750mg/L、蒸馏水1L)，pH调至7?8.)，在营养胁迫试验中，光强提高到12000 - 150001X，温度不变，用通气振摇培养。 将由培养所得积累大量虾青素的雨生红球藻藻液进行滤过，并进行气流式喷雾干 燥得澡粉。 精确地称取雨生红球藻粉，加入有机溶剂，置于超声细胞破碎仪下破壁，使虾青素 从细胞内转到细胞外并溶于有机溶剂中，置于恒温磁力搅拌装置中水浴回流一小时。然后 真空浓缩得虾青素的浓缩液。 本专利技术的具体方法如下： (1)种子培养：用BBM培养基扩大培养至指数生长期。由40W日光灯提供侧 光，12:12h照明，光强1000?15001x，温度控制25±1°C。取样15mL购买的种子原液，置 于5L的带有引流装置玻璃仪器培养，10?15d进行后期雨生红球藻的扩大培养和积累培 养。 通气振摇培养：将种子培养指数生长期的培养物，经离心后细胞团接种于BBM基 本培养基培养10?15d。培养基置于通气式装置中扩大培养。然后米用胁迫培养方法， 用BBM做基本培养基，设置缺氮胁迫培养基，在营养胁迫试验中，光强提高到12000? 150001X，温度不变，用通气振摇培养。 藻粉制备：取上述的培养物置于离心管中，离心菌体，得菌体经无菌水洗涤两次， 获得湿菌体。进行喷雾干燥得雨生红藻粉。 (2)超声辅破壁处理 向雨生红球藻中加入少量有机溶剂，置于超声细胞破碎仪下破壁。 (3)虾青素的提取和虾青素浓缩液的制备 将破壁后的藻液转移至茄形瓶中，加至所需溶剂量，30°C下，水浴回流，提取，抽 滤，洗涤，合并滤液，置于低温37°C真空下进行旋转蒸发浓缩，得虾青素浓缩液，回收有机试 剂。 所述的有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、无水乙醇、1 :(1?2)乙酸乙酯-无水乙醇（v/ V)、氯仿、氯仿-无水乙醇、二甲基亚砜中的一种，有机溶剂体积与雨生红球藻的重量之比 为：50 ?400:1，优选：100 ?200:1。 本专利技术的有机溶剂优选1 :1乙酸乙酯-无水乙醇（v/v)混合溶剂，与雨生红球藻 的体积重量比为50?400:1，优选：100?200:1。 所述的细胞超声破壁是在频率15?25kHz、强度0?250W、时间10?60min条件 下进行的。 破壁具体操作如下：向雨生红球藻中加入1 :1乙酸乙酯-无水乙醇（v/v)混合 试剂，置于超声细胞破碎仪下破壁，超声破壁功率〇?250W本文档来自技高网...

【技术保护点】
从雨生红球藻中提取虾青素的方法,其特征在于，将雨生红球藻种子原液进行扩大培养后，得雨生红球藻培养物，喷雾干燥得到所需要的藻粉，再将藻粉通过超声辅助混合试剂破壁处理，利用有机溶剂提取虾青素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩静，齐计英，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21