一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原、抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原、抗体及其制备方法和应用，将磺胺间二甲氧嘧啶小分子与EDC-HCl混合，加入无水N,N-二甲基甲酰胺DMF使其全部溶解，为A液，取载体蛋白溶于PBS中，为B液；将A液缓慢滴加到B液中，在室温下搅拌反应；反应产物在PBS缓冲溶液中透析，得到纯化的磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原。本发明专利技术将磺胺间二甲氧嘧啶与非动物源的载体大豆11S球蛋白酸性亚基成功连接形成新型抗原，并顺利生产出单克隆抗体。大豆11S球蛋白酸性亚基有稳定的结构，可在有机溶剂条件下同磺胺间二甲氧嘧啶等小分子半抗原连接，并与免疫动物保持较远的亲缘关系，因此可作为新型的免疫载体，以尝试取代牛血清白蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原、抗体及其制备方法和应 用
本专利技术涉及一种酶联免疫分析方法检测使用的抗原抗体，尤其涉及的是一种磺胺 间二甲氧嘧啶人工抗原、抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
目前，农兽药残留已给我国食品的安全供应带来严重的危害，药物残留涉及的药 物种类越来越多，磺胺间二甲氧嘧啶（SDM)也是其中之一。磺胺间二甲氧嘧啶是一种人造 抗生素，作为饲料添加剂广泛添加到动物饲料中。目前农兽药残留物的检测多通过酶联免 疫分析的方法，通过特异的抗体抗原反应，来检测外来抗原的存在。磺胺间二甲氧嘧啶是小 分子化合物，必须同载体蛋白结合形成全抗原，从而诱导抗体的产生。目前，在ELISA中，t匕 较常用的载体是动物源的载体，但是存在一定的免疫缺陷。制备出的抗体的亲和力较差，可 迅速被肾脏系统消除；与免疫动物的亲缘关系较近，会一定程度上增加阳性克隆筛选的难 度和工作量；此载体蛋白质存在着很大的安全隐患，可能携带病毒。因而，探索并使用新型 的非动物源性的免疫载体将逐渐成为未来的发展趋势。这种载体应该同免疫动物的亲缘关 系较远，且具有比较稳定的结构和较强的水溶性，在有机溶剂存在的状态下能和半抗原进 行交联，制备抗体的亲和力良好，检测灵敏度较高。 IlS球蛋白分子量为302000-375000,它是由6个酸性亚基（A1、A2、A3、A4、A5、A6) 和6个碱性亚基（BI B2 B3 B4 B5 B6)构成的两个环状六角形结构，酸性和碱性亚基交互 对应，通过二硫键连接，形成比较稳定的结构形式。酸性亚基A1、A2、A3的等电点为pH5. 15、 pH5. 40、pH4. 75,碱性亚基B1、B2、B3的等电点为ρΗ8. 0、ρΗ8· 25、pH8. 5。酸性亚基是大豆蛋 白中主要起抗原作用的亚基，因此可以尝试在免疫反应中用作载体。大豆IlS球蛋白酸性 亚基溶解度较高，同免疫动物的亲缘关系较远，制备抗体的亲和力良好，检测灵敏度较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗 原、抗体及其制备方法和应用。 本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原，分 子结构式为： 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原，其特征在于，分子结构式为：所述载体蛋白protein为大豆11S球蛋白酸性亚基。

【技术特征摘要】
1. 一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原，其特征在于，分子结构式为：所述载体蛋白protein为大豆IlS球蛋白酸性亚基。2. 如权利要求1所述的一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的制备方法，其特征在于，包 括以下步骤： (1) 将0. 05mmol的磺胺间二甲氧嘧啶小分子与26. 26mg的EDC-HCl混合，加入无水 N，N-二甲基甲酰胺DMF使其全部溶解，为A液，取5mg的载体蛋白溶于0. 02M，pH= 7. 4的 PBS中，为B液； (2) 将A液缓慢滴加到B液中，在室温下搅拌反应4?6h，然后4°C冰箱过夜； ⑶反应产物在pH= 7. 4的PBS缓冲溶液中透析3天，得到纯化的磺胺间二甲氧嘧啶 人工抗原，测定其浓度，分装，_20°C保存。3. 根据权利要求2所述的一种磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的制备方法，其特征在于， 所述载体蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，朱华玲，杨松，闫晓明，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：安徽;34