一种滇南杜鹃的组培繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种滇南杜鹃的组培繁殖方法，该方法适用于杜鹃花科滇南杜鹃的组培快繁，属植物生物技术领域。本发明专利技术以开花后的新嫩茎段为外植体，通过外植体消毒、丛生芽诱导、继代及壮苗、瓶外生根一系列步骤，有效解决了因滇南杜鹃分布区域窄、引种驯化难造成的植株量少，由种子播种开花时间长而导致的无法满足商业提取香料的需求问题。本发明专利技术提供的组培快繁方法，在1个月内增殖系数为10-20，生根率为80％-90％，移栽成活率为95％-98％，极大地提高了滇南杜鹃的繁殖系数，为该物种的引种驯化、保存和商业生产提供了技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物生物技术中植物组织培养方法，具体地说，涉及杜鹃花滇南杜鹃的组织培养快繁方法。
技术介绍
滇南杜鹃隶属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron L.)马银花亚属(Subgen.Azaleastrum)长蕊组(Sect.Azaleastrum)，常绿灌木。滇南杜鹃花白色，有浓郁的香味，是香料提取的良好材料，具有较高的经济利用价值。由于滇南杜鹃分布地域狭窄，材料有限，难以满足香料生产的原材料供应。目前，组培快繁已成为中药材、花卉、濒危物种苗木生产的重要手段。据研究报道杜鹃对培养基的适应性与杜鹃的基因型密切相关，不同品种的杜鹃对培养基的适应程度不同。对于杜鹃花科植物，目前已经报道适合组织培养使用的基本培养基有Read、Anderson、WPM等，但由于杜鹃花科植物种类丰富、种间差异较大，应用时还需结合不同的杜鹃花亚属甚至亚组进行调整。迄今，滇南杜鹃没有相关生物技术方法繁殖的研究与报道，为了使滇南杜鹃能广泛应用于香料生产，解决滇南杜鹃自然匮乏、引种驯化难的问题，以更大的量和更快的速度供应市场的需求，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供滇南杜鹃的组织培养方法，使之在野外分布区域狭窄，引种驯化难度大的情况，加快种苗繁殖，使之为香料市场提供足够的原材料，为滇南杜鹃的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了如下的技术方案：一种滇南杜鹃的组培繁殖方法，该方法包括以下步骤：1)外植体选择与消毒：取滇南杜鹃开花后嫩茎段为外植体，冲洗干净后消毒；2)改良培养基：改良Anderson培养基：将其中的NH4NO3由400mg/L减少为350mg/L，KNO3由480mg/L减少为380mg/L，其余元素不变；3)丛生芽诱导：丛芽诱导培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+3.0mg/L2-iP+0.5mg/L ZT+0.8mg/L IAA+0.5g/L AC，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，暗培养7天后进行光照培养30天；4)继代培养：继代培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+2mg/L 2-iP+0.4mg/L IAA，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，继代培养30天；5)壮苗培养：壮苗培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+1mg/L IAA，蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2；6)移栽：选取3cm高，茎粗达到1.5mm-2mm进行瓶外生根，用1mg/LNAA泡根1小时后移栽。根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导为全黑暗诱导7天后进行人工辅助光诱导，光强度为2000LUX，温度为20-23℃；继代及壮苗培养的光照条件为人工辅助光2500LUX-3000LUX，温度为18-23℃。根据所述的组培繁殖方法，其中所述移栽是壮苗在瓶内生长至3cm高，茎粗达1.5mm-2mm后经瓶内炼苗后分离，移到瓶外，生根时，将切口泡入1mg/LNAA 1小时后移栽至大棚。根据所述的组培繁殖方法，其中所述移栽之前，移栽基质用800倍多菌灵进行喷施消毒，所述移栽基质为底层为碎石，中层为体积比为1份珍珠岩+2份腐殖土+1份红土，上层为体积比为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2，大棚温度为20-30℃，空气湿度50～60％，基质湿度70～80％。本专利技术的方法可以更具体地表述如下：滇南杜鹃的组培繁殖方法，包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导，瓶外移栽生根步骤，取滇南杜鹃的开花后的新嫩茎段为外植体，消毒先用5ml洗洁精定容于1L水溶液中进行浸泡清洗20min，再用无菌水冲洗至无泡沫后采用75％的酒精灭菌20s，无菌水冲洗3遍后，用0.1％升汞溶液添加2滴表面活性剂吐温-20进行表面消毒6min，分两次进行，第一次消毒4min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1％升汞消毒2min后用无菌水清洗3-5遍。改良Anderson培养基的制备：因滇南杜鹃花生存环境土壤为坡地酸性土壤，低盐分浓度及高比值NH4+/NO3-对滇南杜鹃的生长较利。材料在改良Anderson培养基中褐变率低、成活率高。改良Anderson培养基，是将原培养基中NH4NO3400mg/L减少为350mg/L，原培养基中KNO3由480mg/L减少为380mg/L，其余元素不变。丛芽诱导培养基为改良Anderson+3.0mg/L 2-iP(2-异戊烯腺嘌呤)+0.5mg/L ZT(玉米素)+0.8mg/L IAA+0.5g/L AC(活性炭)，pH5.1-5.2，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2；诱导期加活性炭0.5g/L，降低材料褐化死亡率，丛芽诱导为全黑暗诱导7天后进行人工辅助光诱导30天，光强度为2000LUX，温度为20-23℃。继代培养基为改良Anderson+2mg/l 2-iP+0.4mg/L IAA，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，继代培养30天；壮苗培养基为改良Anderson+1mg/L IAA，蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2；瓶外生根为移栽前使用1mg/LNAA泡根1小时候移栽。继代及壮苗培养的光照条件为人工辅助光2500LUX-3000LUX，温度为20-23℃。移栽是瓶外生根，壮苗在瓶内生长至3cm高，茎粗达到1.5mm-2mm后经棚内炼苗后分离，将切口泡入1mg/LNAA 1小时后移栽。移栽基质为底层为碎石，中层为1份珍珠岩+2份腐殖土+1份红土，上层为1份珍珠岩+1份腐殖土(均为体积比，移栽前，移栽基质需用800倍多菌灵进行喷施消毒)，pH为5.1-5.2。大棚温度为20-30度，空气湿度50～60％，基质湿度70～80％。本专利技术技术方案的提出是基于下述的研究基础：滇南杜鹃为杜鹃花科为数不多的具有香味的植物，但滇南杜鹃分布区域狭窄，人工引种驯化难，为解决其自然资源少，达到大量繁殖、保存和可持续利用，故此专利技术滇南杜鹃的组织培养技术。组培扩繁不仅可以在短时间内获得大量的再生植株，而且以成年植株为原材料，缩短开花年限，为供应充足的原材料市场，促进香料提取有积极的作用。相比现有技术，本专利技术存在如下的优益性和有益效果：1.本专利技术通过改良基础培养基配方，使得材料成活率较其他常用培养基提高36％；...

【技术保护点】
一种滇南杜鹃的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：1)外植体选择与消毒：取滇南杜鹃开花后嫩茎段为外植体，冲洗干净后消毒；2)改良培养基：改良Anderson培养基：将其中的NH4NO3由400mg/L减少为350mg/L，KNO3由480mg/L减少为380mg/L，其余元素不变；3)丛生芽诱导：丛芽诱导培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+3.0mg/L2‑iP+0.5mg/L ZT+0.8mg/L IAA+0.5g/L AC，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1‑5.2，暗培养7天后进行光照培养30天；4)继代培养：继代培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+2mg/L 2‑iP+0.4mg/L IAA，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1‑5.2，继代培养30天；5)壮苗培养：壮苗培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+1mg/L IAA，蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH5.1‑5.2；6)移栽：选取3cm高，茎粗达到1.5mm‑2mm进行瓶外生根，用1mg/LNAA泡根1小时后移栽。

【技术特征摘要】
1.一种滇南杜鹃的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1)外植体选择与消毒：取滇南杜鹃开花后嫩茎段为外植体，冲洗干净后消
毒；
2)改良培养基：改良Anderson培养基：将其中的NH4NO3由400mg/L减
少为350mg/L，KNO3由480mg/L减少为380mg/L，其余元素不变；
3)丛生芽诱导：丛芽诱导培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+3.0mg/L
2-iP+0.5mg/L ZT+0.8mg/L IAA+0.5g/L AC，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，
暗培养7天后进行光照培养30天；
4)继代培养：继代培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+2mg/L 2-iP
+0.4mg/L IAA，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，继代培养30天；
5)壮苗培养：壮苗培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+1mg/L IAA，
蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2；
6)移栽：选取3cm高，茎粗达到1.5mm-2mm进行瓶外生根，用1mg/LNAA
泡根1小时后移栽。
2.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导为全黑
暗诱导7天后进行人工辅助光诱导，光强度为2000LUX，温度为20-23℃；继代
及壮苗培养的光照条件为人工辅助光2500LUX‐3000LUX，温度为18-23℃。
3.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述移栽是壮苗在瓶内
生长至3cm高，茎粗达1.5mm-2mm后经瓶内炼苗后分离，移到瓶外，生根时，
将切口泡入1mg/LNAA 1小时后移栽至大棚。
4.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述移栽之前，移栽
基质用800倍多菌灵进行喷施消毒，所述移栽基质为底层为碎石，中层为体积比
为1份珍珠岩+2份腐殖土+1份红土，上层为体积比为1份珍珠岩+1份腐殖土，
pH为5....

【专利技术属性】
技术研发人员：马永鹏，田晓玲，罗桂芬，黄承林，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53